【摘要】：第一部分小兒特發(fā)性血小板減少性紫癜GPⅠbα基因變異的研究 目的：研究廣西地區(qū)小兒特發(fā)性血小板減少性紫癜GPⅠbα（platelet glycoprotein Ib alphα，GPⅠbα)基因變異情況，探討GPⅠbα基因變異與小兒特發(fā)性血小板減少性紫癜的關(guān)系，探索ITP發(fā)病的遺傳機制。 方法:(1)收集2009年3月至2013年5月在廣西醫(yī)科大學第一附屬醫(yī)院門診和住院部治療的小兒ITP病例組76例。收集健康小兒對照組115例。（2）用血液基因組DNA抽提試劑盒提取外周血基因組DNA，對病例組患兒和健康對照兒的GPⅠbα基因第2外顯子進行聚合酶鏈反應（polymerase chain reaction，PCR）擴增、凝膠電泳和基因測序。（3）應用統(tǒng)計學方法比較GPⅠbα基因變異在小兒ITP病例組與健康對照組的分布差異以及ITP病例組不同基因型的臨床特征，分析GPⅠbα基因變異與小兒ITP的相關(guān)性。 結(jié)果：（1）發(fā)現(xiàn)GPⅠbα基因單核苷酸多態(tài)性（single nucleotidepolymorphism，SNP）rs6065（HPA-2）。小兒ITP病例組C/T基因型(HPA-2ab)頻率17.11%，T等位基因(HPA-2b)頻率8.55%；健康對照組C/T基因型(HPA-2ab)頻率3.48%，T等位基因(HPA-2b)頻率1.74%。（2）GPⅠbα基因rs6065（HPA-2）小兒ITP病例組和健康對照組均符合Hardy-weinberg平衡。本課題健康人群rs6065（HPA-2）基因型和等位基因頻率的分布與我國漢族人群無統(tǒng)計學差異，與日本、歐洲和非洲人群呈統(tǒng)計學差異(P0.05)。（3）rs6065（HPA-2）基因型和等位基因頻率在小兒ITP病例組和健康對照組的分布有統(tǒng)計學差異(P0.01)。GPⅠbα基因rs6065C/T基因型(HPA-2ab)是小兒ITP發(fā)病的危險因素(P=0.001，OR:5.726,95%CI：1.791-18.312）；T等位基因(HPA-2b)是小兒ITP發(fā)病的危險因素(P=0.002，OR:5.284，95%CI：1.689-16.529）。（4）小兒ITP病例組rs6065（HPA-2）C/C(HPA-2aa)與C/T基因型(HPA-2ab)臨床特征比較無統(tǒng)計學差異。 結(jié)論：（1）GPⅠbα基因SNP位點rs6065（HPA-2）與廣西地區(qū)小兒ITP發(fā)病相關(guān)。rs6065C/T基因型(HPA-2ab)和T等位基因(HPA-2b)是廣西地區(qū)小兒ITP發(fā)病的危險因素。 （2）首次報道GPⅠbα基因SNP位點rs6065（HPA-2）在廣西地區(qū)健康兒童中的分布情況，臨床上有助于指導血小板輸注。 第二部分小兒特發(fā)性血小板減少性紫癜GPⅢa基因變異的研究 目的：研究廣西地區(qū)小兒特發(fā)性血小板減少性紫癜GPⅢa(plateletglycoprotein Ⅲa，GPⅢa)基因變異情況，探討小兒ITP發(fā)病和GPⅢa基因變異的相關(guān)性，探索小兒ITP發(fā)病的遺傳機制。 方法:（1）收集2009年3月至2013年5月在廣西醫(yī)科大學第一附屬醫(yī)院門診和住院部治療的ITP病例組70例。收集健康對照組50例。（2）用血液基因組DNA抽提試劑盒提取外周血基因組DNA，對病例組患兒和健康對照兒的GPⅢa基因第1~15外顯子及側(cè)翼內(nèi)含子進行PCR擴增、凝膠電泳和基因測序。健康對照組針對ITP病例組已檢出的突變進行PCR擴增、凝膠電泳和基因測序。（3）分析GPⅢa基因變異與小兒ITP的相關(guān)性。 結(jié)果：（1）共發(fā)現(xiàn)GPⅢa基因12個基因變異。D591H為新的基因突變； rs5918、rs5917、rs15908、rs13306487、rs4642、rs4634、rs70940817、rs3760372、rs1969267、c.2015-61GA和rs13306489為SNP，其中c.2015-61GA為新的SNP。（2）11個SNP位點的ITP病例組均符合Hardy-Weinberg平衡。rs15908AC、rs4642、rs4634、rs3760372、rs1969267、c.2015-61GA和rs13306489ITP病例組和健康對照組均符合Hardy-weinberg平衡定律。（3）rs13306489基因型和等位基因頻率在小兒ITP病例組和健康對照組的分布有統(tǒng)計學差異(P0.05)，ITP病例組G/C基因型頻率降低（P=0.01），C等位基因頻率降低（P=0.012）。c.2015-61GA、rs15908AC、rs4642、rs4634、rs3760372和rs1969267基因型和等位基因頻率在小兒ITP病例組和健康對照組的分布無統(tǒng)計學差異。 結(jié)論：（1） GPⅢa基因rs13306489位點與廣西地區(qū)小兒ITP發(fā)病相關(guān)，ITP病例組rs13306489G/C基因型和C等位基因頻率降低。 （2） GPⅢa基因D591H變異有可能是一種新的基因突變，可能與該患兒ITP的發(fā)病有關(guān)； rs70940817位點有可能是廣西地區(qū)小兒ITP常見的多態(tài)性位點。 （3）c.2015-61GA為GPⅢa基因新的SNP。c.2015-61GA、rs15908AC、rs4642、rs4634、rs3760372和rs1969267與廣西地區(qū)小兒ITP發(fā)病無關(guān)。 GPⅢa基因rs5918(HPA-1)、 rs5917(HPA-4)和rs13306487(HPA-6)位點可能與小兒ITP無相關(guān)性。 第三部分小兒特發(fā)性血小板減少性紫癜P2Y1和P2Y12基因變異的研究 目的：研究廣西地區(qū)小兒特發(fā)性血小板減少性紫癜（idiopathicthrombocytopenic purpura，ITP）P2Y1(Purinergic2receptor subtype Y1，P2Y1)和P2Y12(Purinergic2receptor subtype Y12，P2Y12)基因變異情況，探討小兒ITP發(fā)病與P2Y1、P2Y12基因變異的相關(guān)性，探索小兒ITP發(fā)病的遺傳機制。 方法:（1）收集2009年3月至2013年5月在廣西醫(yī)科大學第一附屬醫(yī)院門診和住院部治療的小兒ITP病例組71例，其中急性ITP組33例，慢性ITP組38例。（2）提取外周血基因組DNA，對71例病例組患兒P2Y1基因第1外顯子和P2Y12基因第2外顯子進行PCR擴增、凝膠電泳和基因測序。收集健康對照組50例和69例分別對P2Y1基因第1外顯子和P2Y12基因第2外顯子行PCR擴增、凝膠電泳和基因測序。（3）應用統(tǒng)計學方法比較P2Y1和P2Y12基因變異在小兒ITP病例組和健康對照組間的差異，，分析P2Y1和P2Y12基因變異與小兒ITP的相關(guān)性。 結(jié)果：（1）共發(fā)現(xiàn)P2Y1基因4個基因突變，均為SNP。其中rs1065776和rs199546439急性ITP組，rs118182811和rs701265病例組和健康對照組均符合Hardy-weinberg平衡定律。P2Y1基因rs118182811和rs701265的基因型及等位基因頻率在急性ITP病例組、慢性ITP病例組和健康對照組的分布無統(tǒng)計學差異（。2）共發(fā)現(xiàn)P2Y12基因rs6785930和rs6809699兩個SNP。rs6785930和rs6809699病例組和健康對照組均符合Hardy-weinberg平衡定律。rs6785930和rs6809699基因型及等位基因頻率在急性ITP病例組、慢性ITP病例組和健康對照組的分布無統(tǒng)計學差異。 結(jié)論：（1）P2Y1基因rs1065776和rs199546439可能ITP發(fā)病相關(guān)。P2Y1基因rs118182811和rs701265突變與小兒ITP無關(guān)。 （2）P2Y12基因rs6785930和rs6809699突變與小兒ITP無關(guān)。
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【學位授予單位】：廣西醫(yī)科大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R725.5

【參考文獻】

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本文編號：2293633