【摘要】：目的構(gòu)建穩(wěn)定沉默SUMO特異性蛋白酶1(SENP1)基因的人Ⅱ型肺泡上皮細(xì)胞系HEPApiC。方法構(gòu)建沉默SENP1基因的LV3-SENP1-RNAi慢病毒載體。將HEPApiC細(xì)胞分為實(shí)驗(yàn)組、對照組、空載組,實(shí)驗(yàn)組感染LV3-SENP1-RNAi,空載組感染空載體,對照組不做特殊處理;感染72 h后觀察綠色熒光強(qiáng)度,采用qRT-PCR檢測HEPApiC細(xì)胞中的SENP1 mRNA,采用Western blotting法檢測SENP1蛋白。結(jié)果經(jīng)酶切鑒定及測序分析,成功構(gòu)建LV3-SENP1-RNAi慢病毒載體質(zhì)粒,包裝后得到高滴度的病毒顆粒。感染LV3-SENP1-RNAi的HEPApiC細(xì)胞中GFP表達(dá)隨時(shí)間延長逐漸增強(qiáng),說明LV3-SENP1-RNAi成功感染HEPApiC細(xì)胞。實(shí)驗(yàn)組、對照組、空載組細(xì)胞中SENP1 mRNA相對表達(dá)量分別為0.026、0.050、0.057,SENP1蛋白相對表達(dá)量分別為0.161±0.015、0.781±0.046、0.811±0.008;實(shí)驗(yàn)組SENP1 mRNA及蛋白相對表達(dá)量降低,與對照組及空載組相比,P均0.05。結(jié)論成功構(gòu)建了穩(wěn)定沉默SENP1基因的HEPApiC細(xì)胞系。
[Abstract]:Objective to construct a stable human type 鈪，

本文編號(hào)：2133137