本文選題：滋陰瀉火中藥 + Ghrelin��； 參考：《復(fù)旦大學(xué)》2012年碩士論文

【摘要】：目的：以達那唑誘導(dǎo)的雌性性早熟大鼠模型為研究對象,觀察性早熟大鼠模型青春期啟動時下丘腦中營養(yǎng)相關(guān)因子Ghrelin及其受體GHSR1-α的表達變化,探討Ghrelin/GHSR1-α在性早熟大鼠青春期啟動中的作用；通過滋陰瀉火中藥干預(yù)性早熟模型大鼠,觀察滋陰瀉火中藥對大鼠下丘腦Ghrelin及其受體GHSR1-α表達的影響,從而揭示滋陰瀉火中藥延緩青春期發(fā)育的機制。 方法：(1)選擇3日齡SD雌性大鼠40只,隨機分為正常組(N)、模型組(M)、生理鹽水干預(yù)組(MS)和中藥干預(yù)組(TCM),每組10只。M、MS和TCM組大鼠于5日齡每只皮下注射達那唑300μg進行造模。15日齡時,TCM組開始每天定時喂飼滋陰瀉火中藥,MS組給予等劑量的生理鹽水,每5天稱大鼠體重一次。20日齡時開始每天觀察動物陰門開啟情況,以大鼠陰門開啟作為青春啟動的標志。(2)選擇陰門開啟的模型組大鼠作為處死時間點,同時選擇相應(yīng)數(shù)量的剩余三組大鼠一并處死,留取大鼠外周血、下丘腦、卵巢、子宮等標本,計算子宮及卵巢指數(shù)。(3)采用放免法檢測外周血中E2、FSH、LH及Leptin, Ghrelin和IGF-1的水平和下丘腦Ghrelin、GnRH的含量,受體GHSR1-α的個數(shù)及活性變化。(4)采用Real-time PCR法檢測大鼠下丘腦Ghrelin及其受體GHSR1-α mRNA的表達變化。(5)應(yīng)用SPSS13.0進行統(tǒng)計分析,結(jié)果以均數(shù)士標準差(x±S)表示。多組間比較采用One-Way ANOVA單因素方差分析或Kruskal-Wallis H多樣本的非參數(shù)檢驗,兩組間比較采用LSD或Mann-Whitney U方法,數(shù)據(jù)的相關(guān)性分析采用Bivariate-correlation方法進行。 結(jié)果：(1)各組大鼠青春期啟動指標的比較：M組和MS組大鼠陰門開啟的時間提前,為21-23日齡,早于N組和TCM組；TCM組外周血清E2(19.97±2.62pg/ml)、LH(16.96±1.31mIU/m1)、子宮指數(shù)(49.71±5.50)和下丘腦GnRH(18.15+3.67pg/m1)明顯低于M組(24.67±4.05pg/ml、69.34±9.60、18.83±1.11mIU/ml、23.81±3.99pg/m1)和MS組(24.11±2.52pg/ml、66.53±6.87、18.81±1.08mIU/ml、22.70±2.52pg/m1)(P0.05),接近N組水平；TCM組卵巢指數(shù)(44.46±7.51)明顯低于MS組(55.03±8.02)和N組(51.18±5.00)(P0.05)。(2)大鼠能量代謝指標的比較及與性發(fā)育指標的相關(guān)性分析：15日齡時M組體重(36.97±4.77g)明顯高于N組(32.71±4.74g)(P0.05),TCM組15、20、23日齡體重(32.59±3.92g、44.38±8.16g、59.15±10.60g)明顯低于模型組(36.97±4.77g、53.49±8.91g、69.95±9.54g)(P0.05)；中藥干預(yù)組血中Leptin、 Ghrelin和IGF-1的水平分別為6.74±0.83ng/ml、67.08±16.17ng/mg和262.60±28.77ng/ml,與M組(7.10±1.05ng/ml、70.36±13.82ng/ml、250.04±31.97ng/m1)和MS(7.13±1.17ng/ml、82.70±16.56ng/ml、256.62±31.84ng/m1)組比較無明顯差別(P0.05),且各組內(nèi)能量代謝指標與性發(fā)育指標相關(guān)性不顯著。(3)各組大鼠下丘腦Ghrelin/GHSR1-α基因的表達的比較：在Ghrelin和GHSR1-α基因的轉(zhuǎn)錄水平,M組(0.82±0.03、0.91±0.05)和MS組(0.87±0.03、0.88±0.03),明顯低于N組(1.00±0.02、1.00±0.05)(P0.01),而TCM組(0.96±0.05、1.00±0.02)則明顯高于M組和MS組(P0.01)；而各組間下丘腦Ghrelin蛋白含量和GHSR1-α有效個數(shù)及活性無顯著的統(tǒng)計學(xué)差異。 結(jié)論：以達那唑誘導(dǎo)的性早熟大鼠模型在青春啟動時,下丘腦Ghrelin及其受體的mRNA的含量下降,提示Ghrelin及其受體可能參與青春期啟動的過程；滋陰瀉火中藥預(yù)防性干預(yù)可以延緩性早熟大鼠的青春期發(fā)育,對下丘腦Ghrelin及其受體基因的轉(zhuǎn)錄具有一定的上調(diào)作用。
[Abstract]:Objective: To study the changes of the expression of Ghrelin and its receptor GHSR1- alpha in the hypothalamus of the female precocious precocious rat model with nalazol induced precocious puberty, and to explore the role of Ghrelin/GHSR1- alpha in the puberty initiation of precocious puberty rats. The effect of traditional Chinese medicine on Nourishing Yin and reducing fire on the expression of Ghrelin and its receptor GHSR1- in the hypothalamus of rats was observed to reveal the mechanism of delaying the development of puberty by traditional Chinese medicine for nourishing yin and purging fire.
Methods: (1) 40 SD female rats of 3 days of age were randomly divided into normal group (N), model group (M), saline intervention group (MS) and traditional Chinese medicine intervention group (TCM), 10.M in each group, MS and TCM group rats at 5 day of age of each subcutaneous injection of Na 300 micron for.15 days of age, TCM group began to feed Yin and purge fire traditional Chinese medicine regularly every day, MS group gave the same agent. When the body weight was measured every 5 days, the rat's pubera opening was observed every 5 days. (2) the rat model group was selected as the time point of death, and the remaining three groups of rats were killed and the rat's peripheral blood and lower colliculus were left. The specimens of the brain, ovary and uterus were used to calculate the index of uterus and ovary. (3) the level of E2, FSH, LH and Leptin, the level of Ghrelin and IGF-1, the level of Ghrelin and GnRH in the hypothalamus, the number and activity of the receptor GHSR1- alpha in the hypothalamus were detected by radioimmunoassay. (4) the expression of Ghrelin and its receptor in the hypothalamus of rats was detected by Real-time PCR method. (5) the statistical analysis was carried out with SPSS13.0, and the results were expressed by the standard deviation (x + S). The multiple groups were compared with One-Way ANOVA single factor ANOVA or Kruskal-Wallis H multi sample nonparametric tests. The two groups were compared with LSD or Mann-Whitney U methods, and the correlation analysis of data was carried out by Bivariate-correlation method.
Results: (1) the comparison of puberty start index of rats in each group: the time of opening of the pubera in group M and MS was ahead of time, 21-23 days old, earlier than that of group N and TCM; the peripheral serum of TCM group was E2 (19.97 + 2.62pg/ml), LH (16.96 + 1.31mIU/m1), uterine index (49.71 + 5.50) and GnRH (18.15+3.67pg/m1) in the hypothalamus were significantly lower than that of M group (24.67 +, 69.34). 9.60,18.83 + 1.11mIU/ml, 23.81 + 3.99pg/m1) and MS group (24.11 + 2.52pg/ml, 66.53 + 6.87,18.81 + 1.08mIU/ml, 22.70 + 2.52pg/m1) (P0.05) were close to the N group level. The TCM group ovarian index (44.46 + 7.51) was significantly lower than that of the MS group (55.03 + 8.02) and (51.18 + 5). (2) the comparison of the energy metabolism index and the correlation with the sexual development index. The body weight of group M (36.97 + 4.77g) at 15 days of age was significantly higher than that in group N (32.71 + 4.74g) (32.71 + 4.74g), and 15,20,23 day old weight (32.59 + 3.92g, 44.38 + 8.16g, 59.15 + 10.60g) in group TCM was significantly lower than that in model group (36.97 + 4.77g, 53.49 + 8.91g, 69.95 +), and the level of traditional Chinese medicine intervention group was 6.74 +. L, 67.08 + 16.17ng/mg and 262.60 + 28.77ng/ml, compared with group M (7.10 + 1.05ng/ml, 70.36 + 13.82ng/ml, 250.04 + 31.97ng/m1) and MS (7.13 + 1.17ng/ml, 82.70 + 16.56ng/ml, 256.62 + 31.84ng/m1) group no significant difference (P0.05), and there was no significant correlation between the energy metabolism index and sexual development index in each group. (3) the hypothalamus of rats in each group A comparison of the expression of alpha gene: at the transcriptional level of Ghrelin and GHSR1- alpha genes, group M (0.82 + 0.03,0.91 + 0.05) and MS group (0.87 + 0.03,0.88 + 0.03), obviously lower than that of N group (1 + 0.02,1.00 + 0.05) (P0.01), while the TCM group (0.96 + 0.05,1.00 + 0.02) was significantly higher than that of the M group and the group. There was no significant difference in the number and activity of the effective number and activity.
Conclusion: the content of mRNA in the hypothalamus Ghrelin and its receptor in the hypothalamus induced by the dadazolazole induced precocious puberty rat model decreased, suggesting that Ghrelin and its receptor may participate in the process of puberty initiation. The preventive intervention of traditional Chinese medicine for nourishing yin and purging fire can delay the development of the green and spring period of the precocious puberty rats and the Ghrelin and its receptor base in the hypothalamus. The transcription of the cause has a certain up - regulation effect.
【學(xué)位授予單位】：復(fù)旦大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號】：R272

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本文編號：1924770