本文選題：人巨細(xì)胞病毒 + 先天性感染�。� 參考：《南方醫(yī)科大學(xué)》2013年博士論文

【摘要】：研究背景 人巨細(xì)胞病毒(Human Ctyomegalovirus, HCMV)是感染發(fā)育中的胎兒最常見(jiàn)的病毒,在發(fā)展中國(guó)家和低收入的群體中廣泛傳播,也是導(dǎo)致兒童出生缺陷主要因素之一。目前,HCMV先天性感染已經(jīng)成為智力低下和學(xué)習(xí)困難的主要病因。 為探討HCMV先天性感染致學(xué)習(xí)記憶功能障礙的機(jī)制,課題組從2002年開(kāi)始,成功的建立HCMV先天性感染的系列鼠模型。早期的預(yù)實(shí)驗(yàn)研究表明,HCMV先天性感染子代鼠出現(xiàn)顯著地空間學(xué)習(xí)記憶障礙,其機(jī)制不明確。 為探討HCMV先天性感染對(duì)子代大鼠空間學(xué)習(xí)記憶的影響,本研究擬建立先天性HCMV感染的Sprague Dawley(SD)大鼠模型,應(yīng)用病理、神經(jīng)行為學(xué)檢測(cè)方法(Morris水迷宮、懸吊和曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)等),探討HCMV先天性感染對(duì)子代大鼠空間學(xué)習(xí)記憶和運(yùn)動(dòng)功能發(fā)育的影響及病理機(jī)制；應(yīng)用在位場(chǎng)電位記錄的方法,檢測(cè)HCMV先天性感染對(duì)仔鼠海馬DG區(qū)、CA1區(qū)突觸可塑性的影響；應(yīng)用免疫組化和蛋白電泳技術(shù)等技術(shù),分析仔鼠海馬組織中觸發(fā)突觸可塑性的NMDA受體亞單位的表達(dá)情況,檢測(cè)誘導(dǎo)和維持突觸可塑性的關(guān)鍵蛋白、分子CaMKⅡ和Ca2+的水平,從海馬損傷的病理、突觸可塑性特性改變的神經(jīng)生理學(xué)、以及影響突觸可塑性的蛋白、分子水平變化角度,闡明HCMV先天性感染致大鼠海馬空間學(xué)習(xí)記憶損傷的機(jī)制,對(duì)防治兒童感染HCMV而導(dǎo)致神經(jīng)殘疾具有重要的理論意義和臨床價(jià)值。 第一部分HCMV先天性感染大鼠模型建立及空間學(xué)習(xí)記憶等神經(jīng)行為的檢測(cè) 目的 建立HCMV先天性感染的SD大鼠模型,探討HCMV先天性感染對(duì)子代大鼠空間學(xué)習(xí)記憶、運(yùn)動(dòng)和情緒發(fā)育的影響。 方法 將40只12周齡的SPF級(jí)SD大鼠按雌雄3：1合籠交配,妊娠第4天(實(shí)驗(yàn)組)腹腔內(nèi)接種HCMV病毒懸液0.5m1/早,對(duì)照組同期接種等量的HELF細(xì)胞懸液。檢測(cè)胎鼠腦組織病毒顆粒,免疫組化檢鋇(?)HCMVpp65等特異性抗原。分別對(duì)實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組生后第4周的仔鼠,進(jìn)行空間學(xué)習(xí)記憶(Morris水迷宮)、運(yùn)動(dòng)功能(懸吊試驗(yàn)、斜坡實(shí)驗(yàn)、傾斜板實(shí)驗(yàn)、不自主運(yùn)動(dòng)和自主運(yùn)動(dòng))和情感行為(拒俘反應(yīng)試驗(yàn)和曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn))的檢測(cè)。統(tǒng)計(jì)處理使用SPSS20.0軟件,測(cè)定結(jié)果以x+s表示,應(yīng)用SPSS20.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理,測(cè)定結(jié)果以x+s表不,Morris水迷宮空間學(xué)習(xí)記憶測(cè)試數(shù)據(jù)采用廣義混合線性模型進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,等級(jí)資料采用秩和檢驗(yàn)。計(jì)數(shù)資料用x2檢驗(yàn),作圖用Origin8.0,顯著性水準(zhǔn)α取0.05,雙側(cè)。 結(jié)果 (1)實(shí)驗(yàn)組孕鼠每窩產(chǎn)仔數(shù)、一周內(nèi)仔鼠的死亡率和海馬HCMV病毒分離陽(yáng)性率均顯著高于對(duì)照組(P0.05)。病理上,實(shí)驗(yàn)組子代大鼠皮層出現(xiàn)典型神經(jīng)細(xì)胞空泡變性,海馬齒狀回細(xì)胞帶細(xì)胞數(shù)有所減少,組織結(jié)構(gòu)稀疏,排列紊亂。子代海馬神經(jīng)元細(xì)胞培養(yǎng)物中成功檢測(cè)到HCMV早期感染標(biāo)志物(主要即可早期抗原,MIE),同時(shí)也找到HCMV病毒活動(dòng)性感染的標(biāo)志物pp65,證實(shí)HCMV先天性中樞系統(tǒng)感染模型的建立。 (2)空間學(xué)習(xí)記憶結(jié)果(Morris水迷宮)：廣義混合線性模型模型有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=120.113,P=0.000),實(shí)驗(yàn)組第1-4天逃避潛伏期分別(d1：96.33±17.29；d2：74.35±12.61；d3：56.63±16.50；d4：41.02±6.83)比對(duì)照組第1-4天逃避潛伏期(dl：48.37±12.10；d2：31.40±9.04；d3：23.38±9.21；d4：17.13±3.99)延長(zhǎng),兩組間差異存在顯著性(F=499.473,P0.05),四天之間結(jié)果差異存在顯著性(F=123.623,P0.05) 采用廣義混合線性模型檢驗(yàn),考慮速度為協(xié)變量,模型有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=108.163,P=0.000),實(shí)驗(yàn)組第1-4天的總路程(dl：14.34±6.55；d2：10.47±3.92；d3：8.35±4.10；d4：6.45±3.63)高于對(duì)照組1-4天的總路程(d1：7.66±1.89；d2：5.04±2.32；d3：4.12±1.91；d4：3.05±1.59)(F=440.167,p0.01；),四天之間結(jié)果差異存在顯著性(F=121.658,P0.05)(圖5)。 Morris水迷宮空間探索能力比較,實(shí)驗(yàn)組穿越平臺(tái)次數(shù)4.21±1.44,顯著低于對(duì)照組7.50±1.72(t=-7.182,P0.01)；實(shí)驗(yàn)組目標(biāo)象限游泳時(shí)間占總時(shí)間的百分?jǐn)?shù)(26±4)%也低于對(duì)照組(47±5%),差異具有顯著性(t=15.487,P0.01)。 上述Morris水迷宮系列結(jié)果表明：HCMV先天性感染導(dǎo)致子代出現(xiàn)空間學(xué)習(xí)記憶功能的下降。 實(shí)驗(yàn)組第1-4天游泳速度分別為(dl：16.38±4.59；d2：16.63±7.14；d3：19.16±8.00；d4：18.26±8.62)與對(duì)照組第1-4天游泳速度(d1：14.89±6.38；d2：14.17±4.97；d3：15.19±6.34；d4：15.62±7.88)比較,兩組間差別存在顯著性(F=7.211,p=0.0080.05；方差分析)。說(shuō)明HCMV先天性感染大鼠存在運(yùn)動(dòng)功能的下降。 (3)運(yùn)動(dòng)功能測(cè)試的結(jié)果：實(shí)驗(yàn)組大鼠懸吊實(shí)驗(yàn)得分(1.444±0.70)顯著低于對(duì)照組(2.61±0.70),差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Z=-3.789,P0.001)；實(shí)驗(yàn)組大鼠斜坡實(shí)驗(yàn)評(píng)分(1.99±0.20)顯著低于對(duì)照組(4.244±0.14),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=17.821,P0.001)；傾斜板實(shí)驗(yàn),實(shí)驗(yàn)組在傾斜板上的停留時(shí)間(46.34+3.28)s低于對(duì)照組(63.33+4.69)s,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=6.286,P0.001)。不自主運(yùn)動(dòng)：兩種仔鼠均有不同程度不自主運(yùn)動(dòng),實(shí)驗(yàn)組得分(7.50±1.05)較對(duì)照組(9.33±1.21)低,差異存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=2.803,P0.05)。自主運(yùn)動(dòng)：實(shí)驗(yàn)組自主運(yùn)動(dòng)的次數(shù)(18.33±0.84)顯著低于對(duì)照組(29.17±1.22)差異具有顯著性(t=14.657,P0.001。上述結(jié)果表明HCMV先天性感染可導(dǎo)致子代出現(xiàn)運(yùn)動(dòng)能力受損。 4)情緒行為發(fā)育的結(jié)果：實(shí)驗(yàn)組拒俘反應(yīng)性試驗(yàn)得分(3.56±0.92)顯著低于對(duì)照組(5.28±0.83),差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Z=-4.248,P0.001,兩獨(dú)立樣本非參數(shù)檢驗(yàn))。曠場(chǎng)試驗(yàn),實(shí)驗(yàn)組站立次數(shù)(30.28±3.44)顯著低于對(duì)照組(30.28±4.11),差異具有顯著性(t=-12.630,P0.05)；跨格子數(shù)實(shí)驗(yàn)組(80.56±3.16)與對(duì)照組(84.94±3.70)差異無(wú)顯著性(t=1.815,P=0.129)。結(jié)果表明HCMV先天性感染可影響子代情緒行為的發(fā)育。 結(jié)論 (一)成功的建立了HCMV先天性感染的SD大鼠模型,通過(guò)病理、電鏡、病毒分離和特異性抗原檢測(cè)等途徑證實(shí)模型的可靠性。 (二)神經(jīng)行為學(xué)檢測(cè)證實(shí)：HCMV先天性感染大鼠模型,子代出現(xiàn)顯著地空間學(xué)習(xí)記憶功能下降,同時(shí)伴有運(yùn)動(dòng)和情緒行為發(fā)育的異常,與臨床HCMV先天性感染患者的表現(xiàn)類似。 (三)皮層液化壞死、海馬結(jié)構(gòu)紊亂和顆粒細(xì)胞減少等病變是導(dǎo)致子代大鼠出現(xiàn)空間學(xué)習(xí)記憶和運(yùn)動(dòng)動(dòng)能下降以及情緒發(fā)育異常的主要病理學(xué)原因。 (四)本研究雖然提出了CMV在神經(jīng)細(xì)胞中潛伏感染和再激活是導(dǎo)致學(xué)習(xí)記憶下降的病因,但是推論是基于國(guó)內(nèi)同類研究的結(jié)果分析總結(jié)而得出的,缺乏直接依據(jù),需要進(jìn)一步深入研究,尋找潛伏感染和再激活的依據(jù),為臨床治療HCMV無(wú)癥狀感染患者提供理論基礎(chǔ)。 第二部分HCMV先天性感染對(duì)仔鼠海馬DG區(qū)、CA1區(qū)LTP/DP的影響 目的 海馬DG區(qū)、CA1區(qū)的突觸可塑性是反應(yīng)空間學(xué)習(xí)記憶功能的一個(gè)重要指標(biāo)。為明確HCMV先天性感染致子代大鼠空間學(xué)習(xí)記憶損傷的機(jī)制,本研究擬采用在位場(chǎng)電位記錄方法,探討HCMV先天性感染對(duì)子代大鼠海馬DG和CA1區(qū)LTP/DP特性的影響。 方法 取SPF級(jí)8周齡的SD大鼠共40只按雌、雄,3：1配對(duì),將受精鼠隨機(jī)分為2組(實(shí)驗(yàn)組、對(duì)照組),每組15只,在妊娠第4天分別腹腔內(nèi)接種1×10-6TCID50HCMV病毒懸液0.5ml/♀,對(duì)照組同期分別接種等量的HELF細(xì)胞上清液。在仔鼠出生后60～90天,用神經(jīng)電生理的方法(在位場(chǎng)電位記錄方法),檢測(cè)HCMV先天性感染對(duì)海馬DG區(qū)輸入/輸出曲線(I/O曲線)、雙脈沖反應(yīng)(PPF)、長(zhǎng)時(shí)程增強(qiáng)(LTP)和去增強(qiáng)(DP)的興奮性突觸后電位(EPSP)和群峰電位(PS)。同時(shí)選擇海馬CA1區(qū)長(zhǎng)時(shí)程增強(qiáng)(LTP)和去增強(qiáng)(DP)的興奮性突觸后電位(EPSP)和群峰電位(PS)。統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：比較實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組組間的差異用重復(fù)測(cè)量資料方差分析,同一重復(fù)水平兩組間做兩樣本t檢驗(yàn)。配對(duì)設(shè)計(jì)數(shù)據(jù)兩組間比較采用配對(duì)t檢驗(yàn),顯著性水準(zhǔn)α取0.05,雙側(cè),作圖用Origin8.0。 結(jié)果 (一)海馬DG區(qū)實(shí)驗(yàn)結(jié)果 海馬DG區(qū)I/O曲線結(jié)果顯示：采用重復(fù)測(cè)量資料方差分析,和對(duì)照組相比,HCMV先天性感染組的EPSP幅度明顯(1.57±0.41)(n=7)低于對(duì)照組(2.16±0.72)(n=7),差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=39.004,P0.05),表明HCMV先天性感染可抑制DG區(qū)顆粒細(xì)胞的基礎(chǔ)突觸傳遞效能。同時(shí)和對(duì)照組相比,先天性HCMV系統(tǒng)感染組PS幅度(4.8±0.20)(n=7)亦顯著低于對(duì)照組(7.1±0.26)(n=7),差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=39.004,P0.05)。結(jié)果表明先天性HCMV中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染損傷了DG區(qū)顆粒細(xì)胞的共同發(fā)放。 采用配對(duì)t檢驗(yàn),雙脈沖易化的峰值實(shí)驗(yàn)組為175.62±14.24,較對(duì)照組(224.50±12.42)顯著減低,這表明HCMV先天性感染可以導(dǎo)致子代大鼠海馬DG區(qū)的雙脈沖反應(yīng)顯著減弱(t=7.199,P0.01,)。 DG區(qū)LTP (EPSP)的結(jié)果：采用重復(fù)測(cè)量方差分析,對(duì)照組LTP(EPSP)幅值(137.14±7.85)%,實(shí)驗(yàn)組LTP (EPSP)幅值為(124.26士4.95)%,和對(duì)照組比較,HCMV先天性感染組顯著高于對(duì)照組(F=58.622,P0.05)。DP幅值比較也采用重復(fù)測(cè)量方差分析,滿足球形假設(shè),DP對(duì)照組DP幅值為(88±5)%(EPSP),實(shí)驗(yàn)組為(91±2)%,(F=4.463,P=0.055) DG區(qū)LTP (PS)的結(jié)果：采用重復(fù)測(cè)量資料方差分析,對(duì)照組LTP(PS)幅值(234.92±30.17)%,實(shí)驗(yàn)組EPSP (PS)幅值為(136.84+12.37)%,和對(duì)照組比較,HCMV先天性感染組顯著高于對(duì)照組(F=352.114,P0.05)。對(duì)照組DP(PS)幅值為(72±6)%,實(shí)驗(yàn)組為(91±5)%,(F=130.947,P0.05)。這表明HCMV先天性感染明顯損傷了大鼠海馬DG區(qū)的LTP/DP誘導(dǎo),并且對(duì)PS的LTP/DP誘導(dǎo)的損傷尤為嚴(yán)重。 (二)海馬CA1區(qū)LTP/DP的結(jié)果 采用重復(fù)測(cè)量資料的方差分析,對(duì)照組的LTP (EPSP)幅值為(151.17士11.3)%,實(shí)驗(yàn)組LTP (EPSP)幅值為(124.63士6.1)%,和對(duì)照組比較,HCMV先天性感染幅值與對(duì)照組有顯著性差異(F=133.737,P0.05)。對(duì)照組的DP(EPSP)幅值為(88±9)%,實(shí)驗(yàn)組DP(EPSP)幅值為(98±2)%,差異有顯著性(F=7.064,P0.05)。 方法同上,對(duì)照組的LTP (PS)幅值為(235±26)%,和實(shí)驗(yàn)組相比(168±17)%,(PS：F=127.624,P0.05)對(duì)照組的的DP (PS)幅值為(82±9)%(PS),實(shí)驗(yàn)組DP(PS)幅值為(83+7)%(PS),差別無(wú)顯著性(PS：F=0.796P0.05)。這表明HCMV先天性感染明顯損傷了大鼠海馬CA1區(qū)的LTP/DP誘導(dǎo),并且對(duì)EPSP的LTP/DP誘導(dǎo)的損傷尤為嚴(yán)重。 結(jié)論 (一)HCMV先天性感染影響子代大鼠海馬DG區(qū)基礎(chǔ)突觸傳遞效能和顆粒細(xì)胞的共同發(fā)放,影響突觸可塑性的調(diào)節(jié),海馬結(jié)構(gòu)紊亂、顆粒細(xì)胞減少是導(dǎo)致DG區(qū)基礎(chǔ)突觸傳遞效能下降及顆粒細(xì)胞發(fā)放能力的減低結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)。 (二)HCMV先天性感染子代大鼠出現(xiàn)CA1區(qū)和DG區(qū)LTP/DP的誘導(dǎo)和維持異常,形成突觸可塑性調(diào)節(jié)障礙。 (三)本研究重點(diǎn)探討了影響大鼠空間學(xué)習(xí)記憶的突觸可塑性機(jī)制,對(duì)海馬DG區(qū)和CA1區(qū)LTP/DP的誘導(dǎo)和維持能力進(jìn)行檢測(cè),結(jié)合第一部分病理學(xué)改變的結(jié)果,認(rèn)為突觸可塑性特性的改變可能是導(dǎo)致子代大鼠空間學(xué)習(xí)記憶能力下降的重要機(jī)制。 (四)不足之處：本研究?jī)H探討了LTP,未能對(duì)海馬各區(qū)LTD的變化進(jìn)行檢測(cè),未來(lái)的研究中應(yīng)結(jié)合LTP/LTD的總體變化情況,較為全面的研究HCMV先天性感染對(duì)突觸可塑性范圍的影響。 第三部分NMDA受體亞單位及相關(guān)蛋白(CaMKⅡ)和分子(Ca2+)水平的改變對(duì)突觸可塑性的影響 目的 鈣離子內(nèi)流介導(dǎo)的,有CaMKⅡ參與的NMDA受體激活,是學(xué)習(xí)記憶和突觸可塑性的基礎(chǔ)。為探討HCMV先天性感染導(dǎo)致突觸可塑性改變和學(xué)習(xí)記憶下降的原因,本研究擬對(duì)HCMV先天性感染的SD大鼠子代海馬NMDA受體亞基、CaMKⅡ和Ca2+進(jìn)行檢測(cè)。 方法 建立HCMV先天性感染的SD大鼠模型,對(duì)實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組子代大鼠分別進(jìn)行以下檢測(cè)：(1)免疫組化定位檢測(cè)子代大鼠海馬DG區(qū)和CA1區(qū)NMDA受體(GluN1,GluN2A和GluN2B)的表達(dá)水平。、Vest-blotting檢測(cè)海馬組織中的(GluN1, GluN2A和GluN2B)表達(dá)水平。(2)免疫組化的方法檢測(cè)海馬神經(jīng)細(xì)胞的CaMKⅡ表達(dá)水平；(3)Fura-2熒光法測(cè)定海馬神經(jīng)細(xì)胞Ca2+濃度。 結(jié)果 (1)子代海馬DG區(qū)NMDA受體免疫組化檢測(cè)結(jié)果顯示：實(shí)驗(yàn)組DG區(qū)GluN1(0.168±0.032), GluN2A (0.176±0.016), GluN2B (0.123±0.013)均低于對(duì)照組GluN1(0.288±0.027), GluN2A (0.235±0.033), GluN2B (0.184±0.023),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(GluN1:t=6.656, P0.01;GluN2A:t=3.817, P0.01; GluN2B:t=6.842, P0.01)。。 子代海馬CA1區(qū)NMDA受體免疫組化檢測(cè)結(jié)果顯示：實(shí)驗(yàn)組CA1區(qū)GluN1(0.220±0.017), GluN2A (0.215±0.024), GluN2B (0.17±0.021)均低于對(duì)照組GluN1(0.320±0.033), GluN2A (0.273±0.024), GluN2B (0.280±0.023),差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(GluN1:t=8.819, P0.01; GluN2:t=4.271, P0.01; GluN2B: t=8.582,P0.01)。研究結(jié)果表明,CA1區(qū)和DG區(qū),均存在NMDA受體亞基表達(dá)水平的顯著下降。 子代海馬組織的NMDA受體蛋白印跡表達(dá)結(jié)果顯示,實(shí)驗(yàn)組海馬GluN1(0.463±0.042),GluN2A (0.156±0.020), GluN2B (0.174±0.013)均低于對(duì)照組GluN1(0.686±0.037),GluN2A (0.248±0.020), GluN2B (0.233±0.033),差異具有顯著性(GluN1:t=9.889, P0.01;GluN2:t=19.916, P0.01; GluN2B: t=4.116, P0.01)。研究結(jié)果表明,HCMV先天性感染的子代大鼠海馬組織中NMDA受體亞基的表達(dá)水平顯著下降。 實(shí)驗(yàn)組子代大鼠海馬CaMKⅡ免疫陽(yáng)性細(xì)胞平均光密度值(0.2184+0.026)低于對(duì)照組(0.3323±0.025)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)義(t=8.184,P0.01),證實(shí)HCMV先天性感染導(dǎo)致子代海馬神經(jīng)CaMKⅡ表達(dá)水平減低。 實(shí)驗(yàn)組子代海馬神經(jīng)細(xì)胞鈣離子濃度為227.64±10.70,顯著高于對(duì)照組子代海馬神經(jīng)細(xì)胞鈣離子濃度(130.68±6.24),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=21.768,p0.05)。說(shuō)明HCMV先天性感染導(dǎo)致子代海馬神經(jīng)細(xì)胞鈣離子濃度升高。 結(jié)論 (一)HCMV先天性感染子代海馬組織和CA1區(qū)、DG區(qū)等,都存在NMDA受體亞單位(GluNl, GluN2A, GluN2B)的表達(dá)水平下降,伴有GluN1/GluN2比例失衡,可能是導(dǎo)致LTP及空間學(xué)習(xí)記憶功能受損的機(jī)制之一。 (二)HCMV先天性感染致子代大鼠海馬組織中CaMKⅡ的表達(dá)水平降低,CaMKⅡ水平減低是導(dǎo)致突觸可塑性減低的重要原因,也是空間學(xué)習(xí)記憶功能損傷的一個(gè)重要原因。 (三)HCMV先天性感染組子代大鼠海馬神經(jīng)細(xì)胞出現(xiàn)鈣代謝異常。鈣代謝紊亂可能是導(dǎo)致海馬及皮層神經(jīng)元細(xì)胞水腫、壞死和空間學(xué)習(xí)記憶功能下降以及突觸可塑性范圍縮小的一個(gè)重要機(jī)制。 (四)不足之處：本研究?jī)H重點(diǎn)探討了影響LTP維持和誘導(dǎo)的核心受體、蛋白和分子,其他相關(guān)受體如AMPA受體、CaM以及其他突觸后膜的調(diào)節(jié)分子和蛋白需要進(jìn)一步深入研究。 總結(jié) 本研究通過(guò)成功建立HCMV先天性感染的SD大鼠模型，應(yīng)用Morris水迷宮等神經(jīng)行為學(xué)檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)感染組子代大鼠出現(xiàn)空間學(xué)習(xí)記憶功能下降，伴有運(yùn)動(dòng)、情感行為等的功能發(fā)育異常。為探討HCMV先天性感染仔鼠空間學(xué)習(xí)記憶功能損傷的機(jī)制，對(duì)影響海馬空間學(xué)習(xí)記憶功能的重要因素，即海馬DG區(qū)、CAl區(qū)的突觸可塑性LT/DP進(jìn)行檢測(cè)，證實(shí)HCMV先天性感染可導(dǎo)致子代大鼠海馬CAl和DG區(qū)突觸可塑性下降，尤其是損害了LTP的誘導(dǎo)。同時(shí)為了初步探討突觸可塑性改變的具體機(jī)制，對(duì)海馬CAl區(qū)、DG區(qū)NMDA受體的核心亞基GluN1、GluN2A和GluN2B、以及誘導(dǎo)和維持突觸可塑性的主要蛋白(CaMKⅡ)和分子(海馬神經(jīng)細(xì)胞的鈣離子濃度)進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果證實(shí)HCMV先天性感染大鼠海馬組織、CAl區(qū)和DG區(qū)，，均存在NMDA受體亞單位GluNl、GluN2A和GIuN2B表達(dá)水平的顯著下降。海馬神經(jīng)細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度升高，CaMKⅡ表達(dá)水平下降。 本研究證實(shí)： (一)HCMV先天性感染子代大鼠腦組織出現(xiàn)皮層液化壞死、空泡變性和海馬結(jié)構(gòu)紊亂等病理改變，行為學(xué)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)空間學(xué)習(xí)記憶功能下降，伴有運(yùn)動(dòng)和情緒發(fā)育水平的減低。 (二)HCMV先天性感染影響子代大鼠海馬DG區(qū)基礎(chǔ)突觸傳遞效能和顆粒細(xì)胞的共同發(fā)放，出現(xiàn)CAl區(qū)和DG區(qū)LTP/DP的誘發(fā)和維持障礙，導(dǎo)致突觸可塑性降低。 (三)HCMV先天性感染仔鼠損傷的海馬組織中存在NMDA受體亞單位(GluNl，GluN2A和GluN2B)表達(dá)水平減低、GluN1/GluN2比例失衡以及CaMKⅡ表達(dá)水平的減低和鈣離子濃度升高。 (四)NMDA受體亞單位表達(dá)水平的下降、海馬組織中CaMKⅡ的低表達(dá)和鈣離子濃度的異常升高，從而影響突觸可塑性的誘導(dǎo)和維持，可能是導(dǎo)致HCMV先天性感染損傷子代SD大鼠空間學(xué)習(xí)記憶功能的一個(gè)重要機(jī)制。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R725.1

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1881905