本文選題：腸道病毒EV71 + 單克隆抗體��； 參考：《北京工業(yè)大學》2016年碩士論文

【摘要】：手足口病是由腸道病毒感染引起的傳染病,多發(fā)于5歲以下嬰幼兒,其中部分由腸道病毒71型(簡稱EV71)感染的患兒可引起神經(jīng)系統(tǒng)感染癥狀并導致心肺功能衰竭,嚴重者會導致死亡。EV71病毒感染病例數(shù)量龐大,但是只有少數(shù)患者發(fā)展為重癥,因此,研制EV71中和抗體,為手足口病重癥患者提供特異性治療藥物,是降低手足口病發(fā)病率和死亡率的可能解決方案之一。本課題通過磁珠分選EV71感染者外周血中記憶性B細胞,在飼養(yǎng)層細胞中培養(yǎng),加入細胞因子刺激細胞分泌抗體,用ELISA法檢測細胞上清是否含有陽性抗體,提取檢測結(jié)果為陽性的細胞總RNA,采用逆轉(zhuǎn)錄和巢式PCR方法擴增免疫球蛋白重鏈和輕鏈;經(jīng)測序鑒定后,將序列克隆到真核表達載體中;通過瞬時轉(zhuǎn)染293T細胞得到重組抗體,通過以上方法共分離得到59株單克隆抗體;用硫氰酸銨洗脫法檢測抗體的親和力活性,共得到6株親和力較高的單克隆抗體;中和實驗檢測抗體的中和活性,成功篩選到1株抗EV71的人源中和抗體,IC50為5.5μg/m L。本課題成功建立了人源化EV71單克隆抗體的制備方法,為特異性治療由EV71病毒感染引起的手足口病提供了新的方法和思路,同時為篩選其他人源化單克隆抗體奠定了基礎(chǔ)。呼吸道疾病高發(fā)于春冬季,能引起呼吸道疾病的細菌和病毒多種多樣,本課題建立呼吸道合胞病毒、副流感病毒1型、副流感病毒2型、腺病毒、冠狀病毒、流感病毒、EB病毒等12種呼吸道病原體實時熒光定量PCR檢測方法,對北京市望京醫(yī)院2011-2012年采集的178份呼吸道感染病例咽拭子樣本進行檢測,結(jié)果顯示178份患者咽拭子樣本中檢測到陽性樣本64例,陽性結(jié)果占總樣本的36.2%。該工作為呼吸道病原體檢測提供了可靠的技術(shù)手段,為呼吸道疾病預防控制提供了基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。
[Abstract]:Hand, foot and mouth disease (HFMD) is an infectious disease caused by enterovirus infection, mostly in infants under 5 years old. Some of the children infected with enterovirus 71 (EV71) can cause symptoms of nervous system infection and cause heart and lung failure. Severe cases can lead to death. EV71 virus infection is a large number, but only a few patients develop severe. Therefore, the development of EV71 neutralizing antibodies, for hand, foot and mouth disease patients with specific treatment drugs, It is one of the possible solutions to reduce the morbidity and mortality of HFMD. In this study, memory B cells in peripheral blood of EV71 infected patients were separated by magnetic beads, cultured in feeder layer cells, and cytokines were added to stimulate cells to secrete antibodies. ELISA method was used to detect whether the supernatants contained positive antibodies. The total RNAs of positive cells were extracted, the heavy and light chains of immunoglobulin were amplified by reverse transcription and nested PCR, the sequence was cloned into eukaryotic expression vector after sequencing, and the recombinant antibody was obtained by transient transfection of 293T cells. A total of 59 monoclonal antibodies were isolated by the above methods, 6 monoclonal antibodies with high affinity were obtained by ammonium thiocyanate elution assay, and neutralization activities of antibodies were detected by neutralization experiments. The IC50 of a human neutralizing antibody against EV71 was 5.5 渭 g / mL. The preparation method of humanized EV71 monoclonal antibody was successfully established, which provided a new method and thought for the specific treatment of hand-foot-mouth disease caused by EV71 virus infection, and laid a foundation for screening other humanized monoclonal antibodies. Respiratory diseases occur frequently in spring and winter. There are a variety of bacteria and viruses that can cause respiratory diseases. In this study, respiratory syncytial virus, parainfluenza virus type 1, parainfluenza virus type 2, adenovirus, coronavirus were established. Twelve respiratory pathogens such as influenza virus Epstein-Barr virus and other respiratory pathogens were detected by real-time fluorescence quantitative PCR. 178 throat swabs of respiratory tract infection cases collected by Beijing Wangjing Hospital in 2011-2012 were detected. The results showed that 64 of 178 pharynx swab samples were positive, and the positive results accounted for 36.2% of the total samples. This work provides reliable technical means for the detection of respiratory pathogens and provides basic data for the prevention and control of respiratory diseases.
【學位授予單位】：北京工業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R725.1

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本文編號：1869368