本文選題：表沒(méi)食子兒茶素沒(méi)食子酸酯(EGCG) + 3T3-L1細(xì)胞�。� 參考：《上海交通大學(xué)》2014年碩士論文

【摘要】：背景:肥胖是一種復(fù)雜的多因素的慢性疾病,是糖尿病、高血壓、腫瘤和心血管疾病的危險(xiǎn)因素,肥胖及其相關(guān)慢性病的防治是營(yíng)養(yǎng)與健康研究與實(shí)踐工作的重點(diǎn)。肥胖的發(fā)展是以脂肪細(xì)胞數(shù)量增加和細(xì)胞體積肥大所導(dǎo)致的脂肪積聚為特征。目前認(rèn)為,脂肪組織的增生需要建立新生血管提供足夠的氧氣和營(yíng)養(yǎng),阻斷脂肪組織的血管生成可能是一個(gè)抑制脂肪生成的新途徑。脂肪組織是人體內(nèi)最大的內(nèi)分泌組織之一,可產(chǎn)生多種脂肪因子調(diào)節(jié)其自身及機(jī)體代謝,其中,它所分泌的血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)被認(rèn)為是促進(jìn)脂肪組織血管新生最重要的調(diào)節(jié)因子。最新研究證據(jù)表明,調(diào)節(jié)血管生成的藥物能通過(guò)調(diào)節(jié)脂肪組織脈管系統(tǒng)的生長(zhǎng)和重構(gòu)來(lái)影響脂肪的擴(kuò)張和代謝。因此,針對(duì)脂肪組織的血管生成調(diào)節(jié)劑為肥胖癥的治療提供了一種新的治療選擇。表沒(méi)食子兒茶素沒(méi)食子酸酯((-)-Epigallocatechin-3-gallate,EGCG)是綠茶中最豐富且最具有活性的成分,已有研究證實(shí)其對(duì)肥胖有防治作用。幾項(xiàng)腫瘤新生血管抑制實(shí)驗(yàn)表明,EGCG具有抑制腫瘤新生血管形成的作用。那么,EGCG是否具有抑制脂肪組織血管生成的潛力?目前尚無(wú)研究報(bào)道。我們假設(shè)EGCG可以通過(guò)抑制脂肪組織血管新生途徑調(diào)節(jié)脂肪組織生成及其功能。本課題在培養(yǎng)的脂肪細(xì)胞水平擬對(duì)上述假設(shè)進(jìn)行驗(yàn)證。目的:1.通過(guò)觀察EGCG對(duì)3T3-L1前脂肪細(xì)胞增殖和分化的影響,了解EGCG對(duì)脂肪組織生成的影響;2.通過(guò)觀察EGCG在3T3-L1前脂肪細(xì)胞增殖和分化過(guò)程對(duì)VEGF表達(dá)的影響,以及脂肪細(xì)胞分泌的VEGF對(duì)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(Human Umbilical Vein Endothelial Cell,HUVEC)增殖及小管形成的影響,了解EGCG對(duì)血管生成的作用;3.通過(guò)觀察EGCG對(duì)脂肪細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子PPARγ、C/EBPα對(duì)VEGF表達(dá)的作用,初步探索EGCG調(diào)控脂肪組織血管生成的分子機(jī)制。方法:1.采用x CELLigence實(shí)時(shí)細(xì)胞分析系統(tǒng)觀察不同濃度的EGCG對(duì)3T3-L1前脂肪細(xì)胞和脂肪細(xì)胞增殖的影響;2.采用油紅O染色法檢測(cè)不同濃度的EGCG對(duì)3T3-L1前脂肪細(xì)胞分化的影響;3.采用ELISA法檢測(cè)不同濃度的EGCG處理的3T3-L1前脂肪細(xì)胞和脂肪細(xì)胞細(xì)胞培養(yǎng)上清液中VEGF的含量;采用免疫熒光技術(shù)檢測(cè)不同濃度的EGCG對(duì)3T3-L1前脂肪細(xì)胞和脂肪細(xì)胞VEGF表達(dá)的影響;采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)不同濃度的EGCG對(duì)3T3-L1前脂肪細(xì)胞和脂肪細(xì)胞VEGF表達(dá)的影響;4.采用蛋白免疫印跡反應(yīng)(Western Blotting)法和實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)不同濃度的EGCG對(duì)3T3-L1脂肪細(xì)胞PPARγ、C/EBPα的蛋白表達(dá)水平和m RNA水平的影響;5.建立3T3-L1細(xì)胞和HUVEC的共培養(yǎng)體系,采用x CELLigence實(shí)時(shí)細(xì)胞分析系統(tǒng)觀察3T3-L1前脂肪細(xì)胞和脂肪細(xì)胞對(duì)HUVEC增殖的影響;收集采用EGCG和未采用EGCG處理的3T3-L1脂肪細(xì)胞的細(xì)胞培養(yǎng)上清液,用于培養(yǎng)接種于Matrigel膠上的HUVEC,觀察其對(duì)HUVEC小管生成的影響。結(jié)果:1.與對(duì)照組相比,0.5μg/ml~50μg/ml EGCG刺激均對(duì)3T3-L1前脂肪細(xì)胞的增殖顯著的抑制作用(P0.05),且該作用呈現(xiàn)一定的劑量依賴關(guān)系。2.雖然≤10μg/ml的EGCG刺激對(duì)3T3-L1前脂肪細(xì)胞的分化沒(méi)有明顯的影響,但是高達(dá)25μg/ml的EGCG刺激能抑制3T3-L1前脂肪細(xì)胞的分化(P0.05)。3.5μg/ml~50μg/ml EGCG刺激能抑制3T3-L1前脂肪細(xì)胞和脂肪細(xì)胞的細(xì)胞上清液中VEGF分泌。免疫熒光實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,VEGF在3T3-L1脂肪細(xì)胞中的表達(dá)比與3T3-L1前脂肪細(xì)胞更多。實(shí)時(shí)熒光定量PCR結(jié)果顯示,EGCG能顯著降低3T3-L1前脂肪細(xì)胞和脂肪細(xì)胞中VEGF的表達(dá)。4.Western Blotting和實(shí)時(shí)熒光定量PCR結(jié)果顯示,EGCG能顯著降低3T3-L1脂肪細(xì)胞PPARγ、C/EBPα的蛋白表達(dá)和m RNA表達(dá)。5.3T3-L1細(xì)胞能刺激HUVEC的增殖,25μg/ml的EGCG處理的3T3-L1脂肪細(xì)胞的細(xì)胞上清液能夠抑制HUVEC小管生成。結(jié)論:首先,EGCG具有抑制前脂肪細(xì)胞和脂肪細(xì)胞的增殖,減少前脂肪細(xì)胞的分化,并降低脂質(zhì)在脂肪細(xì)胞中積累的能力。其次,在細(xì)胞水平,我們發(fā)現(xiàn)EGCG具有抑制脂肪組織的血管生成的作用。
[Abstract]:Background : Obesity is a complicated multi - factor chronic disease , it is the risk factor of diabetes , hypertension , tumor and cardiovascular disease , obesity and its associated chronic diseases control is the focus of nutrition and health research and practice . The expression of VEGF in 3T3 - L1 preadipocytes and 3T3 - L1 preadipocytes were inhibited significantly . The results showed that the expression of VEGF in 3T3 - L1 preadipocytes was significantly reduced compared with that of 3T3 - L1 preadipocytes ( P0.05 ) .

【學(xué)位授予單位】：上海交通大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R589.2

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