本文選題：脂肪細(xì)胞 + 胰島素抵抗��； 參考：《華中科技大學(xué)》2012年碩士論文

【摘要】：目的 觀察不同類型、不同濃度的游離脂肪酸對(duì)3T3-L1成熟脂肪細(xì)胞在胰島素刺激狀態(tài)和ASP刺激狀態(tài)下胰島素經(jīng)典信號(hào)通路（IRS-1，PI3K）蛋白表達(dá)的影響，以及脂代謝關(guān)鍵酶（LPL,HSL,Perilipin,DGAT）基因水平及蛋白表達(dá)的影響，以探討ASP對(duì)脂肪細(xì)胞糖脂代謝的調(diào)節(jié)作用。 方法 1、采用經(jīng)典的激素“雞尾酒”（10μg/ml胰島素+0.5mmol/L1-甲基3-異丁基黃嘌呤+1.0μmol/L地塞米松）誘導(dǎo)方法，誘導(dǎo)3T3-L1前脂肪細(xì)胞分化為成熟脂肪細(xì)胞，顯微鏡下觀察3T3-L1前脂肪細(xì)胞及脂肪細(xì)胞形態(tài)，油紅O染色觀察胞漿內(nèi)脂滴聚集。 2、Western Blot方法檢測(cè)ASP和INS刺激下脂肪細(xì)胞HSL,Perilipin,IRS-1,PI3K蛋白表達(dá)水平。 3、Real-time PCR方法定量檢測(cè)ASP刺激下脂肪細(xì)胞LPL, HSL, Perilipin,DGAT基因表達(dá)水平。 結(jié)果 1、顯微鏡下觀察3T3-L1前脂肪細(xì)胞呈成纖維細(xì)胞樣的長(zhǎng)梭形，胞漿中無(wú)脂滴；分化成熟后，細(xì)胞呈大圓形，胞漿內(nèi)可見大量脂滴包繞胞核，呈“戒環(huán)”狀。 2、INS和ASP作用于對(duì)照組（0mmol/L）和刺激組（1.0mmol/L）的游離脂肪酸孵育的分化成熟的3T3-L1脂肪細(xì)胞，結(jié)果示：1.0mmol/L油酸和棕櫚酸孵育過(guò)夜后，INS刺激和ASP刺激下顯著增加成熟脂肪細(xì)胞HSL和Perilipin蛋白的表達(dá)。與對(duì)照組比（無(wú)FFA刺激），油酸組增加1.75倍（p0.01）INS刺激狀態(tài)和76%（p0.05）ASP刺激狀態(tài)成熟脂肪細(xì)胞HSL蛋白的表達(dá)。棕櫚酸組增加85%（p0.01）INS刺激狀態(tài)成熟脂肪細(xì)胞HSL蛋白的表達(dá)。油酸和棕櫚酸還增加INS刺激狀態(tài)1.27倍（p0.01）和96%（p0.05）脂肪細(xì)胞perilipin蛋白的表達(dá)，以及86%（p0.05）INS刺激狀態(tài)下和76%（p0.05）ASP刺激狀態(tài)下perilipin蛋白表達(dá)。 1.0mmol/L油酸和棕櫚酸孵育過(guò)夜后，INS和ASP刺激下顯著增加成熟脂肪細(xì)胞PI3K蛋白的表達(dá)。與對(duì)照組相比（無(wú)FFA刺激），油酸和棕櫚酸組分別增加2.59倍（p0.01）和3.66倍（p0.01）INS刺激狀態(tài)成熟脂肪細(xì)胞PI3K蛋白的表達(dá)，棕櫚酸增加1.27倍（p0.01）ASP刺激狀態(tài)下PI3K蛋白表達(dá)。 與此相對(duì)，INS和ASP刺激均未能顯著增加成熟脂肪細(xì)胞IRS-1蛋白的表達(dá)。 而與INS刺激組相比，ASP組均未能顯著增加成熟脂肪細(xì)胞PI3K蛋白、perilipin蛋白、HSL蛋白及perilipin蛋白的的表達(dá)（P＞0.05）。 3、ASP作用于不同濃度(0.125、0.5、1.0mmol/L)的游離脂肪酸孵育的分化成熟的3T3-L1脂肪細(xì)胞，結(jié)果示：ASP可以從不同程度上增加脂代謝關(guān)鍵酶HSL、LPL、Perilipin和DGAT基因的表達(dá)。 與空白對(duì)照組相比，ASP刺激下，，0.5mmol/L與1.0mmol/L油酸組HSL基因表達(dá)顯著升高5倍和3.26倍（p0.01），0.5mmol/L與1.0mmol/L棕櫚酸組HSL基因表達(dá)顯著升高1.98倍和1.87倍（p0.05）。 ASP刺激下，0.125mmol/L油酸孵育的3T3-L1成熟脂肪細(xì)胞LPL基因表達(dá)與空白對(duì)照組相比降低了41%（p0.05），0.5mmol/L與1.0mmol/L油酸孵育的3T3-L1成熟脂肪細(xì)胞LPL基因表達(dá)與空白對(duì)照組相比分別升高1.87倍和2.98倍（p0.01）。而對(duì)不同濃度棕櫚酸孵育的3T3-L1成熟脂肪細(xì)胞LPL基因表達(dá)無(wú)明顯影響（p＞0.05）。 ASP作用于0.5mmol/L和1.0mmol/L的油酸孵育的分化成熟的3T3-L1脂肪細(xì)胞，其perilipin基因表達(dá)與空白對(duì)照組相比分別升高6.87倍和5.46倍（p0.01）。而僅對(duì)0.125mmol/L濃度的棕櫚酸的分化成熟的3T3-L1脂肪細(xì)胞perilipin基因表達(dá)降低27%（p0.05），0.5mmol/L與1.0mmol/L棕櫚酸組則無(wú)明顯影響（p＞0.05）。 ASP作用下，0.5mmol/L與1.0mmol/L油酸組DGAT基因表達(dá)均有分別升高2.5倍和2倍（p0.01）。三種不同濃度（0.125、0.5、1.0mmol/L）棕櫚酸孵育的3T3-L1成熟脂肪細(xì)胞DGAT基因表達(dá)與空白對(duì)照組相比分別升高3.81倍、4.63倍和2.53倍（p0.05）。 結(jié)論 在脂肪酸誘導(dǎo)的胰島素抵抗?fàn)顟B(tài)下，ASP可增加脂代謝關(guān)鍵酶HSL、perilipin蛋白及經(jīng)典胰島素信號(hào)通路PI3K蛋白的表達(dá)。ASP可以從不同程度上增加糖脂代謝關(guān)鍵酶HSL、LPL、Perilipin和DGAT基因的表達(dá)，通過(guò)增加這些酶的表達(dá)，提高酶的敏感性，參與調(diào)節(jié)脂肪細(xì)胞糖脂代謝。
[Abstract]:Purpose

The effects of different types of free fatty acids with different concentrations on the expression of insulin classical signal pathway ( IRS - 1 , PI3 ) protein in 3T3 - L1 mature adipocytes were investigated . The effects of different concentrations of free fatty acids on the expression of insulin classical signal pathway ( IRS - 1 ) and protein expression in 3T3 - L1 mature adipocytes were investigated . The effects of ASP on the lipid metabolism of 3T3 - L1 adipocytes were investigated .

method

1 . The differentiation of 3T3 - L1 preadipocytes into mature adipocytes was induced by classical hormone " cocktail " ( 10 渭g / ml insulin + 0.5 mmol / L - methyl 3 - isobutylxanthine + 1.0 渭mol / L dexamethasone ) .

2 . Western Blot was used to detect the expression level of HSL , Periarthritis , IRS - 1 and PI3 protein in fat cells stimulated by ASP and INS .

3 銆

本文編號(hào)：1782783