本文選題：變性高效液相色譜　切入點：SORBS2基因　出處：《南方醫(yī)科大學(xué)》2012年碩士論文

【摘要】：背景與目的： 隨著現(xiàn)代社會科學(xué)技術(shù)的發(fā)展,以及醫(yī)學(xué)模式的進(jìn)化,人類疾病譜和死亡譜已經(jīng)發(fā)生了很大改變,出生缺陷已逐漸成為我國嬰幼兒死亡的主要原因。先天性心臟病(Congenital Heart Disease, CHD)是胎兒時期心血管發(fā)育異常而導(dǎo)致的先天畸形,是出生缺陷中最常見的類型,幾乎占據(jù)了主要出生缺陷的三分之一,在新生兒非感染性死亡中占首位。廣東省優(yōu)生優(yōu)育協(xié)會2009年對廣東省0-5歲兒童出生缺陷情況調(diào)查結(jié)果顯示,先天性心臟病是廣東地區(qū)最常見的出生缺陷,已成為嚴(yán)重影響兒童身心健康及人口生存質(zhì)量的重大公共衛(wèi)生問題,給社會和家庭帶來嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)和精神等方面的負(fù)擔(dān)。 先天性心臟病中僅表現(xiàn)為心臟畸形而不伴有其他系統(tǒng)的先天異常,稱之為單純性先天性心臟病(non-syndromic CHD),約占80%。隨著分子遺傳學(xué)和分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展,近些年來的研究證實,該病是與環(huán)境因素相關(guān)的多基因遺傳病,其遺傳背景復(fù)雜,致病機制尚不明確,且其遺傳因素在疾病發(fā)生過程中存在著明顯的地區(qū)差異和種族差異。由于發(fā)病率極高且患病后果嚴(yán)重,因此,研究該病的致病機制與易感基因試圖建立行之有效的疾病篩查和診斷技術(shù)可及早預(yù)防重型先天性心臟病患兒的出生,以期降低該病的發(fā)病率,不僅可以減少患兒家庭負(fù)擔(dān),而且對提高我國人口素質(zhì)和人口質(zhì)量具有重要意義。 心臟發(fā)育是胚胎發(fā)育過程中一個及其復(fù)雜的事件,許多基因按照時空順序的表達(dá)調(diào)控著心臟的正常發(fā)育,其中任何一個基因的異常都有可能導(dǎo)致先天性心臟病的發(fā)生。單純性CHD的致病基因很多,它們之間存在相互影響和協(xié)同調(diào)節(jié),在心臟發(fā)育的不同時期有著不同的表達(dá)與調(diào)節(jié)。并且與許多和機體生長發(fā)育、能量代謝、細(xì)胞周期、細(xì)胞骨架以及細(xì)胞黏附、細(xì)胞遷移、LIM蛋白、鋅指蛋白等相關(guān)的蛋白基因在心臟發(fā)育中相互協(xié)調(diào)、相互作用,形成有序的網(wǎng)絡(luò)系統(tǒng)。因而,心臟并不是一個靜態(tài)的器官,將心臟的發(fā)育與身體其他器官分開來看是錯誤的；把兒童與成人的心臟疾患完全區(qū)分開也是有失公允的。心臟從開始發(fā)育,到最終成熟,再到成熟后的功能維護(hù),是一個動態(tài)的、整體的過程。 目前,對先天性心臟病的研究分為四個方面：配體受體如NOTCH1.NODAL等；轉(zhuǎn)錄因子如GATA4、NKX2.5、TFAP2B等心臟發(fā)育早期的重要轉(zhuǎn)錄因子；收縮蛋白如MYHl.ACTC等,其他復(fù)雜基因如FLNA.ELN等。尤以轉(zhuǎn)錄因子的研究最多,涉及到其他遺傳學(xué)機制的分析報道較少,存在很大空白。心臟的發(fā)育涉及多種基因的相互調(diào)控與影響,而且與這些基因在不同時間和不同空間的先后表達(dá)和相互作用有關(guān),其中任何基因表達(dá)的質(zhì)或量的異常也可能會影響心臟的發(fā)育。在心臟表達(dá)的蛋白很多,其中銜接蛋白就屬于其中一類,而我們對于這一類蛋白在心臟中的表達(dá)調(diào)控功能還知之甚少。銜接蛋白由兩個或兩個以上的沒有酶活性的蛋白質(zhì)相互作用組成,調(diào)節(jié)各種細(xì)胞功能。VInexin,CAP/ponsin,與SORBS2(ArgBP2)構(gòu)成一個新的銜接蛋白家族,它們有與活性肽sorbin同源的SoHo保守區(qū)域,以及3個SH3結(jié)構(gòu)域(Src同源3)。與該銜接蛋白家族相聯(lián)系的一部分蛋白已經(jīng)確定。有越來越多的證據(jù)表明,該蛋白家族在調(diào)節(jié)細(xì)胞擴增,遷移,黏附,凋亡,細(xì)胞骨架和信號轉(zhuǎn)導(dǎo)方面發(fā)揮重要作用。其中的soRBS2蛋白在心臟大量表達(dá),它的蛋白產(chǎn)物表達(dá)在心肌肌原纖維的Z帶中,對于裝配和維持心肌肌原纖維的穩(wěn)定性、附著性有重要作用。 sORBS2又名ArgBP2,是一個70kD的在非肌肉細(xì)胞中表達(dá)于應(yīng)力纖維,在心臟表達(dá)于Z帶的蛋白質(zhì)。SORBS2定位于4q35.1,共有八種亞型,是通過不同剪接方式獲得的,分別由492到1100aa的氨基酸組成。其中大量表達(dá)于心臟的亞型1全長226794bp,cDNA為4939bp,編碼666個氨基酸,由23個外顯子,22個內(nèi)含子組成。 SORBS2除了在心肌纖維的Z帶發(fā)揮作用之外,還有很多其他功能。通過羧基末端的SH3結(jié)構(gòu)域與非受體酪氨酸蛋白激酶家族成員c-Abl相互作用,通過氨基末端的SoHo同源結(jié)構(gòu)域與脂筏蛋白相互作用。由該蛋白在上皮和心肌亞細(xì)胞定位可知,其作為銜接蛋白在應(yīng)力纖維中裝配信號復(fù)合體；在肌動蛋白細(xì)胞骨架和細(xì)胞運動性中發(fā)揮重要調(diào)控作用；在錨定連接中,與橋粒黏著斑蛋白協(xié)同作用；結(jié)合泛素連接酶Cbl,非受體酪氨酸激酶c-Abl可磷酸化Cbl,激活的Cbl可以促進(jìn)Abl的降解,發(fā)揮信號調(diào)節(jié)作用；或者與ATK1復(fù)合介導(dǎo)PAK1通路的激活；通過抑制細(xì)胞黏附,細(xì)胞遷移等作用抑制腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移。 SORBS2基因在細(xì)胞骨架的穩(wěn)定中有重要作用,作為支架蛋白,通過調(diào)節(jié)多種集中在細(xì)胞骨架的細(xì)胞信號通路控制細(xì)胞黏附和運動的平衡性。微管、微絲、中間絲及其結(jié)合蛋白構(gòu)成了心肌細(xì)胞的骨架系統(tǒng),它們在維持心肌細(xì)胞正常形態(tài),調(diào)節(jié)心肌細(xì)胞等一系列生理活動中發(fā)揮著重要作用。在細(xì)胞內(nèi),細(xì)胞骨架成分將肌小節(jié)和細(xì)胞外基質(zhì)連接起來,構(gòu)成一個收縮力的傳導(dǎo)環(huán)路,起著傳導(dǎo)收縮力以及機械支撐的作用。心肌細(xì)胞骨架系統(tǒng)作為一種動態(tài)結(jié)構(gòu),不僅在維持心肌細(xì)胞形態(tài),參與收縮活動中發(fā)揮作用,而且對心肌離子通道的錨定作用和功能方面有著重要的調(diào)控作用。細(xì)胞骨架變化往往會引起心肌缺氧、心肌肥厚及心力衰竭等病理性進(jìn)程。細(xì)胞骨架結(jié)合蛋白種類繁多,功能復(fù)雜,而銜接蛋白恰是其結(jié)合蛋白中的一種,其確切功能大部分還不清楚。研究細(xì)胞骨架,骨架結(jié)合蛋白及其與心肌離子通道的關(guān)系對于闡明多種心律失常的發(fā)生機制有重要的理論和實際意義。 因為心臟是一個動態(tài)的、整體的器官,大量不同種類的基因表達(dá)在其中,調(diào)控著心臟的正常發(fā)育與成熟,以及成熟后的功能維護(hù)。SORBS2作為銜接蛋白,在信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、心肌肌原纖維的穩(wěn)定和細(xì)胞骨架調(diào)控等方面的作用,讓我們將之與心臟的發(fā)育聯(lián)系起來,并且進(jìn)一步與先天性心臟病的形成聯(lián)系到一起。 近年來,一種具有高效、精確、高通量、半自動化、價格低廉等優(yōu)點的用于檢測已知突變及未知突變篩查,敏感性和特異性高達(dá)96%-100%的方法,變性高效液相色譜(Denaturing High Performance Liquid Chromatography, DHPLC)技術(shù)被廣泛的應(yīng)用。與同樣是用于突變篩查的其他變異檢測技術(shù)相比,變性高效液相色譜有著明顯的優(yōu)勢。本研究主要是通過定點誘變技術(shù)與基因克隆技術(shù)來構(gòu)建SORBS2基因的已知變異,并針對SORBS2基因的所有編碼區(qū)及剪接位點來設(shè)計變性高效液相色譜檢測方法,并用該檢測方法篩檢中國人群單純性先天性心臟病病例以期找到中國人SORBS2基因的相關(guān)數(shù)據(jù)。 本研究旨在為進(jìn)一步研究單純性先天性心臟病分子機制,建立一種快速、準(zhǔn)確、經(jīng)濟(jì)且適于中國人群中國南方地區(qū)單純性先天性心臟病相關(guān)基因突變的研究方法,并為臨床上該類疾病的診斷、預(yù)防和治療提供參考,同時也為SORBS2基因突變導(dǎo)致的其他銜接蛋白異常疾病的分子機制的研究提供借鑒和參考。 材料與方法： 1.標(biāo)本：共收集209例先天性心臟病病例(男性121例、女性84例、未知4例,年齡為0-6個月)和120例正常人的全血標(biāo)本,這些標(biāo)本大多來自于中山博愛醫(yī)院和珠江醫(yī)院等。采用標(biāo)準(zhǔn)的飽和酚／氯仿法從外周血中提取基因組DNA。 2.分子分析方法： (1).針對NCBI數(shù)據(jù)庫中SORBS2的基因變異采用大引物PCR方法定點誘變和基因克隆方法：首先通過設(shè)計定點誘變引物,采用PCR技術(shù)直接從人基因組DNA樣品中獲取目的基因——含某一變異的基因,然后運用經(jīng)典的基因工程技術(shù)將其克隆至pMD20-T載體,轉(zhuǎn)化的宿主菌為大腸桿菌DH5α。每個克隆重組子中插入的目的基因進(jìn)行DNA測序以驗證基因變異型。 (2).針對SORBS2基因的所有編碼區(qū)及剪接位點設(shè)計變性高效液相色譜分析的引物,構(gòu)建SORBS2基因的變性高效液相色譜分析方法。 3.統(tǒng)計學(xué)分析：用建立的SORBS2基因變性高效液相色譜分析方法對構(gòu)建的包含SORBS2基因已知變異的人工變異體進(jìn)行穩(wěn)定性分析,確定該體系的穩(wěn)定性和可靠性。 4.標(biāo)本篩檢：對所收集的標(biāo)本進(jìn)行SORBS2基因突變篩查。 5.實驗結(jié)果的綜合分析、總結(jié)。 結(jié)果： 運用大引物PCR定點誘變方法人工構(gòu)建包含SORBS2基因已知變異的變異體,并將誘變得到的片段克隆到pMD20-T-載體后進(jìn)行測序,所有克隆均鑒定為所需變異,誘變成功率達(dá)100%。 建立的針對SORBS2基因的變性高效液相色譜分析方法能夠快速、準(zhǔn)確地區(qū)分已知變異序列和野生型序列,并且靈敏性和穩(wěn)定性都好。 收集209例單純性先天性心臟病和120例正常人標(biāo)本,對這些標(biāo)本進(jìn)行SORBS2基因的變性高效液相色譜分析檢測,未檢測到定點誘變的已知變異,也未發(fā)現(xiàn)新的致病突變,只檢測到4個已知的單核苷酸多態(tài)性(SNP)和兩個未報道過的位于內(nèi)含子的基因變異。 結(jié)論： 變性高效液相色譜分析技術(shù)是近幾年來被廣泛應(yīng)用的基因突變檢測技術(shù)。這種檢測方法不受突變堿基位點與類型的局限,無需序列特異性探針,無需純化,在PCR結(jié)束后直接進(jìn)行變性高效液相色譜檢測,即可完成對樣品基因型的分析。這種方法因其操作簡便、快速,使用成本低,結(jié)果準(zhǔn)確,并且靈敏度高而受到普遍的關(guān)注和廣泛應(yīng)用。 本課題研究中建立的針對SORBS2基因的變性高效液相色譜分析檢測方法能夠快速、準(zhǔn)確地將SORBS2基因變異序列與野生型序列區(qū)分,并且實驗的重復(fù)性和再現(xiàn)性好、穩(wěn)定性高,體系可靠。本研究建立的基于PCR的變性高效液相色譜分析SORBS2基因突變方法是一種高通量、高靈敏度、半自動化、快速、準(zhǔn)確、經(jīng)濟(jì)的突變檢測技術(shù)。 近年來,銜接蛋白家族的功能不斷被發(fā)掘,其中的SORBS2因在心臟中大量表達(dá),而被考慮是否與先天性心臟病的形成相聯(lián)系,SORBS2基因的致病突變還未有被報道,也沒有對SORBS2基因進(jìn)行人群突變篩查的研究。本研究中,利用變性高效液相色譜分析技術(shù)對中國人先天性心臟病病例標(biāo)本進(jìn)行突變篩查,沒有發(fā)現(xiàn)新致病突變,這也說明了中國人SORBS2基因突變的攜帶率相對較低。 先天性心臟病作為一種與環(huán)境因素相關(guān)的多基因疾病,雖然已經(jīng)有超過40種基因被報道與先天性心臟病的形成有關(guān),然而對于它的致病機理,我們?nèi)匀恢挥袦\顯而初步的認(rèn)識。已經(jīng)報道過的可能與先天性心臟病形成有關(guān)的致病基因中有很大一部分,都只在一些零星的散發(fā)病例中被發(fā)現(xiàn)。 目前,國內(nèi)外對先天性心臟病的病因分析主要認(rèn)為是轉(zhuǎn)錄因子突變造成的,涉及到其他遺傳學(xué)病因分析的報道較少。根據(jù)PubMed等文獻(xiàn)檢索數(shù)據(jù)庫的檢索結(jié)果,未見有關(guān)中國人群SORBS2基因突變導(dǎo)致先天性心臟病的報道。因此本研究對先天性心臟病的遺傳學(xué)病因的研究具有重要的意義和價值。 綜上所述,雖然SORBS2在心臟中大量表達(dá),但其對單純性先天性心臟病的病因影響不大。我們猜測,SORBS2可能對心肌病變和細(xì)胞骨架變化引起的其他心臟疾病可能有著一定程度的影響,這將是我們后續(xù)研究中的一個重要方向。 本研究不僅為SORBS2基因的檢測建立了一種簡便、經(jīng)濟(jì)、快速、高效和靈敏的檢測方法,而且對進(jìn)一步闡明中國人先天性心臟病的分子機制,對臨床上該病的診斷、預(yù)防和治療具有重要的參考意義,同時也為SORBS2基因突變導(dǎo)致的其他銜接蛋白異常疾病的分子機制的分析提供了借鑒。
[Abstract]:Background and Purpose :

With the development of modern society science and technology , and the evolution of medical model , the human disease spectrum and death spectrum have changed greatly . birth defects have become the main cause of infant death in China . Congenital heart disease ( CHD ) is the most common type in the birth defect , which accounts for the most common birth defects in Guangdong region .

With the development of molecular genetics and molecular biology , it is proved that the disease is a multi - gene genetic disease associated with environmental factors .

Cardiac development is one of the most complex events in the development of the embryo . Many genes regulate the normal development of the heart according to the expression of space - time sequence .
It is also unfair to distinguish children from the heart of adults . The heart starts to develop , eventually mature , and then to mature functional maintenance is a dynamic , integral process .

At present , the study of congenital heart disease is divided into four aspects : ligand receptor such as NOTCH1 . NODAL , etc . ;
Transcription factors such as GATA4 , NKX2.5 , TFAP2B and other important transcription factors in the early stages of cardiac development ;
There are many other complex genes , such as MYHl . ACTC , etc . , and other complex genes such as FLNA , ELN , etc .

SORBS2 , also known as ArgBP2 , is a 70 kD protein expressed in non - muscle cells in non - muscle cells and expressed in Z - band in the heart .

SORBS2 , in addition to its role in the Z - band of cardiac muscle fibers , has a number of other functions . By interacting with the non - receptor tyrosine protein kinase family member c - Abl through the SH3 domain at the carboxy terminus , the SoHo homology domain at the amino terminus interacts with the lipid raft protein . It is known from the localization of the protein in the epithelial and myocardial sub - cells , which act as an adapter protein in the stress fiber assembly signal complex ;
plays an important role in regulating the cytoskeletal and cell motility of actin ;
in that anchor connection , the bridge particle has a synergistic effect with the protein spot ;
In combination with ubiquitin ligase Cbl , non - receptor tyrosine kinase c - Abl can phosphorylate Cbl , and activated Cbl can promote the degradation of Abl .
or the activation of PAK1 pathway is mediated by combination with ATK1 ;
inhibiting tumor cell metastasis by inhibiting cell adhesion , cell migration , and the like .

Microtubules , microfilaments , intermediate filaments and their binding proteins play an important role in maintaining normal morphology of myocardial cells , regulating cardiac muscle cells and other physiological activities .

Because the heart is a dynamic , integral organ , a large number of different kinds of genes are expressed in it , regulate the normal development and maturation of the heart , as well as the functional maintenance after maturation . SORBS2 plays a role in signal transduction , stabilization of cardiac muscle fiber and regulation of cytoskeletal muscle , etc . , and links it with the development of the heart , and further relates to the formation of congenital heart disease .

In recent years , a method for detecting known mutations and unknown mutation screening , sensitivity and specificity up to 96 % -100 % , which has the advantages of high efficiency , accuracy , high flux , semi - automation , low price and so on , is widely used in the detection of known mutation and unknown mutation screening , sensitivity and specificity up to 96 % -100 % .

The aim of this study is to study the molecular mechanism of simple congenital heart disease and to establish a rapid , accurate , economical and suitable method for the diagnosis , prevention and treatment of congenital heart disease in southern China .

Materials and Methods :

1 . Specimens : 209 cases of congenital heart disease ( 121 male , 84 female , 4 unknown , 0 - 6 months old ) and 120 normal controls were collected from peripheral blood by standard saturated phenol / chloroform method .

2 . Molecular analysis method :

( 1 ) For the gene mutation of SORBBS2 , the gene mutation and gene cloning method of SORBS2 were determined by PCR . The gene was cloned into pMD20 - T vector directly from human genomic DNA sample by PCR . The transformed host bacteria was E . coli DH5.alpha . The gene inserted in each clone was sequenced to verify the gene variant .

( 2 ) A denaturing high - performance liquid chromatography analysis method for SORBS2 gene was constructed for all coding regions and splice sites of SORBS2 gene .

3 . Statistical analysis : The stability and reliability of the system were determined by analyzing the stability of the constructed artificial variants containing the known variation of SORBS2 gene by means of the established SORBS2 gene denaturing high - performance liquid chromatography .

4 . Screening of specimen : The SORBS2 gene mutation screening was performed on the collected specimen .

5 . Comprehensive analysis and summary of experimental results .

Results :

The variants of the known mutation of SORBS2 gene were constructed artificially by using a large - primer PCR constant - point mutation method , and the fragment obtained from the mutation was cloned into pMD20 - T - vector for sequencing . All the clones were identified as the required variation , and the success rate of mutagenesis was 100 % .

The established denaturing high - performance liquid chromatography analysis method for SORBS2 gene can rapidly and accurately distinguish the known mutation sequence and the wild - type sequence in the region , and has good sensitivity and stability .

209 cases of simple congenital heart disease and 120 normal human specimens were collected . The denaturing high performance liquid chromatography ( HPLC ) analysis of SORBS2 gene was performed on these specimens . No known mutation was detected and no new pathogenic mutation was detected . Only 4 known single nucleotide polymorphisms ( SNPs ) and two unreported genetic variants were detected .

Conclusion :

denaturing high performance liquid chromatography ( HPLC ) is a widely used technique for gene mutation detection in recent years . This method is not limited by mutation base site and type . It does not need to be purified . After PCR is completed , it can be directly subjected to denaturing high performance liquid chromatography detection to complete the analysis of the genotype of the sample .

The method of denaturing high - performance liquid chromatography analysis for SORBS2 gene which was established in this research was able to quickly and accurately distinguish SORBS2 gene mutation sequence from wild - type sequence , and the repeatability and reproducibility of experiment were good , stability was high , and the system was reliable . The research was based on PCR - based denaturing high - performance liquid chromatography SORBBS2 gene mutation method was a high - throughput , high - sensitivity , semi - automatic , fast , accurate and economical mutation detection technique .

In recent years , the function of the adaptor protein family has been continuously explored , among which SORBS2 is expressed in large quantities in the heart , and is considered whether it is associated with the formation of congenital heart disease . The pathogenic mutation of SORBS2 gene has not been reported , nor does the SORBS2 gene have been screened for mutation screening . In this study , the mutation screening of Chinese congenital heart disease cases by denaturing high - performance liquid chromatography is not reported , and no new pathogenic mutation is found , which also shows that the mutation rate of the Chinese SORBBS2 gene is relatively low .

Congenital heart disease is a multi - gene disease associated with environmental factors , although more than 40 genes have been reported to be associated with the formation of congenital heart disease , yet we still have only a superficial and preliminary understanding of the pathogenesis of congenital heart disease . It has been reported that a large proportion of the pathogenic genes that may be associated with congenital heart disease have been reported to be found only in sporadic sporadic cases .

At present , the etiology of congenital heart disease at home and abroad is mainly considered to be caused by the mutation of the transcription factor , and the report of other genetic etiology analysis is less . According to the search results of the literature search database such as literature search , there are no reports about congenital heart disease caused by gene mutation of SORBBS2 in Chinese population . Therefore , the study has important significance and value for the study of genetic cause of congenital heart disease .

In conclusion , although SORBS2 is abundantly expressed in the heart , it has little impact on the etiology of simple congenital heart disease . We suspect that SORBS2 may have some degree of impact on the changes in cardiomyopathy and other heart diseases caused by changes in cellular skeleton , which will be an important direction in our subsequent study .

This study not only establishes a simple , economical , rapid , efficient and sensitive detection method for the detection of SORBS2 gene , but also has important reference significance for further clarifying the molecular mechanism of Chinese congenital heart disease , and provides reference for the diagnosis , prevention and treatment of the disease .

【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號】：R725.4

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6 王瑋;杜艷;林國強;孫秉中;;RNA干涉bcr abl融合基因聯(lián)合P27基因克隆對K562細(xì)胞的影響[A];第12屆全國實驗血液學(xué)會議論文摘要[C];2009年

7 方衛(wèi)國;肖月華;冷波;楊星勇;張永軍;裴炎;;一種新的球孢白僵菌幾丁酶Bbchit1的純化和基因克隆[A];首屆中國青年學(xué)者微生物遺傳學(xué)學(xué)術(shù)研討會論文摘要集[C];2002年

8 張志春;張谷豐;羅光華;方繼朝;;小菜蛾嗅覺膜原蛋白SNMP1基因的克隆表達(dá)[A];植保科技創(chuàng)新與病蟲防控專業(yè)化——中國植物保護(hù)學(xué)會2011年學(xué)術(shù)年會論文集[C];2011年

9 王翠;李世軍;李闖;俸艷萍;彭秀麗;龔炎長;;鴨多巴胺受體1(DRD1)基因克隆與多態(tài)性檢測[A];安全優(yōu)質(zhì)的家禽生產(chǎn)——第十五次全國家禽學(xué)術(shù)討論會論文集[C];2011年

10 張上隆;;甜橙辣椒紅／辣椒玉紅素合成酶同源基因的克隆[A];張上隆果樹學(xué)文選[C];2006年

相關(guān)重要報紙文章 前10條

1 記者 李秀萍;石河子大學(xué)轉(zhuǎn)基因克隆綿羊研究取得突破[N];兵團(tuán)日報(漢);2011年

2 劉越西　徐仁元 記者 金姝;世界首例賴氨酸轉(zhuǎn)基因克隆奶牛在吉大農(nóng)學(xué)部培育成功[N];吉林日報;2011年

3 黃勇娣;世界首例轉(zhuǎn)基因克隆兔在滬誕生[N];解放日報;2007年

4 許沈華;什么是基因克隆[N];家庭醫(yī)生報;2007年

5 王婷婷;我國完成世界首例轉(zhuǎn)基因克隆兔實驗[N];科技日報;2007年

6 曹斌;血癌新病毒基因克隆成功[N];團(tuán)結(jié)報;2000年

7 王有佳;全球首例轉(zhuǎn)基因克隆兔在滬誕生[N];人民日報;2007年

8 李建平;首例熒光轉(zhuǎn)基因克隆豬所產(chǎn)豬崽再次被確認(rèn)具有熒光特征[N];大眾科技報;2008年

9 記者 王中宙;25只轉(zhuǎn)基因克隆綿羊在內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)誕生[N];呼和浩特日報(漢);2010年

10 吳一福;四軍醫(yī)大構(gòu)建HBV全基因克隆質(zhì)粒細(xì)胞系[N];中國醫(yī)藥報;2006年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 李志勇;調(diào)控玉米大斑病菌生長發(fā)育和致病性的CaM基因的克隆與功能分析[D];河北農(nóng)業(yè)大學(xué);2008年

2 謝科;水稻W(wǎng)RKY10基因的功能研究[D];浙江大學(xué);2005年

3 邢繼紅;擬南芥抗灰葡萄孢相關(guān)基因的克隆和功能分析[D];河北農(nóng)業(yè)大學(xué);2006年

4 魏繼承;白樺花期抑制性消減文庫的構(gòu)建及花發(fā)育相關(guān)基因的克隆[D];東北林業(yè)大學(xué);2006年

5 趙明蓮;食線蟲真菌侵染性胞外蛋白酶的基因克隆與表達(dá)[D];云南大學(xué);2003年

6 郭虹;弓形蟲侵入相關(guān)分子ROP1基因的克隆及其DNA免疫研究[D];中山醫(yī)科大學(xué);1999年

7 王昕;巨噬細(xì)胞集落刺激因子可溶性受體的克隆表達(dá)及其相關(guān)性研究[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué);1998年

8 李偉;圓錐小麥地方品種遺傳多樣性研究[D];四川農(nóng)業(yè)大學(xué);2006年

9 段冷昕;梅花鹿茸多肽的化學(xué)結(jié)構(gòu)及其抗肝纖維化作用[D];吉林大學(xué);2007年

10 倪多嬌;櫛孔扇貝抗氧化酶基因的克隆與表達(dá)分析[D];中國科學(xué)院研究生院（海洋研究所）;2007年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 趙穎;用DHPLC技術(shù)進(jìn)行單純性先天性心臟病易感基因SORBS2的突變分析[D];南方醫(yī)科大學(xué);2012年

2 鮑鳴;雞IFN-γ基因的克隆與原核表達(dá)[D];安徽農(nóng)業(yè)大學(xué);2005年

3 劉占通;豬α干擾素基因克隆、原核表達(dá)及抗病毒活性研究[D];河南農(nóng)業(yè)大學(xué);2005年

4 張怡;重組鼠抗人CD19單鏈抗體的構(gòu)建和表達(dá)[D];浙江大學(xué);2006年

5 郝敏;玉米與大斑病菌構(gòu)成的不同互作中基因表達(dá)的研究[D];河北農(nóng)業(yè)大學(xué);2006年

6 黃志強;產(chǎn)堿性蛋白酶海洋細(xì)菌的篩選及其基因克隆[D];福建農(nóng)林大學(xué);2006年

7 武鴻;嗜熱脂肪地芽孢桿菌脂肪酶基因的克隆、表達(dá)及酶學(xué)性質(zhì)研究[D];浙江大學(xué);2007年

8 余國武;臘梅脂轉(zhuǎn)移蛋白基因克隆與功能的初步分析[D];西南大學(xué);2007年

9 趙秀振;蓖麻蠶體液胰凝乳蛋白酶抑制劑調(diào)查及其基因克隆[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2007年

10 馬維;辣椒疫病抗性相關(guān)基因的克隆與分析[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2007年

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本文編號：1712585