本文選題：γ-谷氨酰水解酶基因　切入點(diǎn)：單核苷酸多態(tài)性　出處：《遵義醫(yī)學(xué)院》2012年碩士論文

【摘要】：目的：γ-谷氨酰水解酶(GGH)是甲氨蝶呤(MTX)聚谷氨酸化的一種關(guān)鍵酶,是一種溶酶體酶,通過(guò)裂解MTX多聚谷氨酸鹽(MTXPGs)的谷氨酸殘基使MTX重新流出細(xì)胞,從而使MTX在細(xì)胞內(nèi)的作用減弱,高水平的GGH與MTX的耐藥有關(guān)。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)研究GGH基因全編碼區(qū)單核苷酸多態(tài)性(cSNPs)在急性白血病(AL)患兒和正常兒童中的分布情況,并以期發(fā)現(xiàn)新的多態(tài)性位點(diǎn),分析各基因型在兩組之間的分布差異。 方法：從92例AL患兒的骨髓和124例正常兒童的外周血中提取總RNA,逆轉(zhuǎn)錄制備cDNA。采用RT-PCR-變性梯度凝膠電泳(RT-PCR-DGGE)結(jié)合DNA直接測(cè)序技術(shù)對(duì)以上cDNA標(biāo)本進(jìn)行GGH基因cSNPs及基因突變的篩查與鑒定。 結(jié)果：首次在中國(guó)漢族兒童中鑒定了GGH基因4個(gè)國(guó)外已篩查到的cSNPs,即T16C(Cys6Arg)、G91A (Ala31Thr)、A268G (He90Val)和C452T (Thrl51He),并確定了AL患兒和正常兒童中GGH各cSNP位點(diǎn)的等位基因頻率和基因型分布特征在AL組及正常兒童組中,GGH452位點(diǎn)T等位基因頻率分別為8.7%和10.1%,16位點(diǎn)C等位基因頻率分別為20%和17.1%,91位點(diǎn)A等位基因頻率分別為20%和16.7%,268位點(diǎn)G等位基因頻率分別為1.1%和0.8%。這些cSNPs在兩組人群的等位基因頻率及基因型頻率的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,表明這些多態(tài)性與白血病的易感性無(wú)相關(guān)性。此外發(fā)現(xiàn)中國(guó)漢族兒童與日本、非裔-美洲及墨西哥人群的GGH452位點(diǎn)T等位基因頻率差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。并發(fā)現(xiàn)兩個(gè)新的錯(cuò)義突變：在正常對(duì)照組中發(fā)現(xiàn)GGH的第2外顯子191位點(diǎn)存在T→G堿基替代,導(dǎo)致第64位氨基酸由亮氨酸(Leu)被色氨酸(Trp)替代；在白血病患兒中發(fā)現(xiàn)GGH基因第8外顯子779位點(diǎn)存在A→G堿基替代,即第260位氨基酸由組氨酸(His)變?yōu)榫彼?Arg),產(chǎn)生另一新的錯(cuò)義突變雜合子。 結(jié)論：在中國(guó)漢族人群中利用PCR-DGGE結(jié)合DNA直接測(cè)序技術(shù)對(duì)GGH基因進(jìn)行大規(guī)模cSNPs篩查,發(fā)現(xiàn)4個(gè)國(guó)外已報(bào)道到的cSNPs,即T16C (Cys6Arg)、G91A(Ala31Thr)、A268G (Ile90Val)、C452T (Thrl51He),并初步確定了中國(guó)AL患兒和正常兒童中GGH各SNP位點(diǎn)的等位基因頻率和基因型分布特征；在國(guó)內(nèi)用統(tǒng)計(jì)學(xué)方法證實(shí)不同種族人群GGHC452Tl的等位基因頻率存在明顯差異,說(shuō)明GGH C452T基因多態(tài)性存在種族差異性,提示MTX藥效在種族間也可能存在較大差別；在GGH中發(fā)現(xiàn)2個(gè)新的錯(cuò)義突變,即T191G (Leu64Trp)和A779G (His60Arg),為國(guó)際首次報(bào)道。
[Abstract]:Objective : To study the distribution of single nucleotide polymorphism ( cSNPs ) in acute leukemia ( AL ) and normal children by means of glutamic acid residues of MTX polyglutamic acid salt ( MTXPGs ) , and to investigate the distribution of single nucleotide polymorphism ( cSNPs ) of GGH gene in acute leukemia ( AL ) children and normal children .

Methods : Total RNA was extracted from the peripheral blood of 92 patients with AL and 124 normal children . cDNA was prepared by RT - PCR - DGGE combined with DNA direct sequencing . The cSNPs of GGH gene and gene mutation were screened and identified by RT - PCR - DGGE .

Results : The frequencies of allele frequencies and genotype frequencies of GGH452 loci in AL and normal children were respectively 8 . 7 % and 10 . 1 % , respectively . The frequencies of allele frequencies and genotype frequencies of GGH452 loci were 8 . 7 % and 10 . 1 % , respectively .
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本文編號(hào)：1698618