本文選題：泛素蛋白酶體途徑　切入點：內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激　出處：《江蘇大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：目的建立早產(chǎn)大鼠肺泡Ⅱ型上皮細胞(Alveolar type Ⅱ Epithelial Cell,AECerⅡ)原代培養(yǎng)高氧細胞損傷模型,研究泛素蛋白酶體途徑(Ubiquitin Proteasome Pathway,UPP)對高氧暴露下內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激(Endoplasmic Reticulum Stress,ERS)誘導(dǎo)AECerⅡ凋亡的影響。方法早產(chǎn)大鼠AECerⅡ原代培養(yǎng),隨機分為空氣組和高氧組,分別用空氣和950mL/L O2進行干預(yù),其中部分高氧組利用蛋白酶體抑制劑MG132進行干預(yù),以DMSO作為對照�？諝饣蚋哐醣┞�24、48和72 h后,于倒置相差顯微鏡下觀察細胞形態(tài)變化;采用異硫氰酸熒光素標(biāo)記的膜聯(lián)素V/碘化丙啶(annexin V-FITC/PI)雙染法結(jié)合流式細胞術(shù)檢測細胞凋亡;特異性熒光底物檢測20s蛋白酶體活性,實時熒光定量PCR(Real-Time PCR,RT-PCR)檢測GRP78、CHOP和泛素(Ubiquitin,Ub)mRNA表達;Western blot法檢測細胞內(nèi)GRP78、CHOP、總泛素化蛋白及凋亡相關(guān)蛋白Bax、Bcl-2和Caspase-3的表達;免疫熒光染色后熒光顯微鏡下觀察Caspase-3的表達。結(jié)果(1)空氣或高氧暴露24、48和72h后,與同時間點空氣組相比,高氧組AECerⅡ細胞數(shù)量減少,細胞形態(tài)不規(guī)則且出現(xiàn)空泡樣改變;細胞凋亡檢測顯示高氧組AECerⅡ凋亡增加,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P均0.05);高氧組AECerⅡ中20s蛋白酶體活性降低,而GRP78、CHOP和Ub mRNA的表達增加,同時AECerⅡ中GRP78、CHOP和Caspase-3蛋白表達增加,Bax/Bcl-2比值上升,總泛素化蛋白表達增加,差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P均0.05);(2)與高氧+DMSO組相比,高氧+MG132組AECerⅡ凋亡增加,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);高氧+MG132組AECerⅡ總泛素化蛋白、GRP78、ATF4、CHOP和Caspase-3蛋白表達明顯上調(diào),Bax/Bcl-2比值上調(diào),差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P均0.05);熒光顯微鏡下高氧+MG132組AECerⅡ中FITC標(biāo)記的Caspase-3綠色熒光增多。結(jié)論(1)高氧暴露引起AECerⅡ發(fā)生ERS,使20s蛋白酶體活性降低,泛素化蛋白降解減少,誘導(dǎo)AECerⅡ凋亡。(2)利用MG132抑制蛋白酶體活性,可增強高氧暴露下ERS誘導(dǎo)的AECerⅡ凋亡。
[Abstract]:Objective to establish the injury model of alveolar type 鈪，

本文編號：1695512