本文選題：先天性心臟病　切入點(diǎn)：CITED2　出處：《新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院》2012年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：背景先天性心臟病(congenital heart disease, CHD)是胎兒時(shí)期心臟血管發(fā)育異常所致的心血管畸形,也是小兒最常見的心臟病。其臨床后果極為嚴(yán)重,通常導(dǎo)致流產(chǎn)、死胎、死產(chǎn)、新生兒死亡,以及兒童、青少年和成人殘疾。CHD發(fā)生率在城市地區(qū)一直高居首位,在農(nóng)村地區(qū)僅次于神經(jīng)管畸形,位于第二位,給家庭和社會(huì)造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)和精神等方面的負(fù)擔(dān)。雖然目前CHD遺傳基礎(chǔ)的研究已取得了很多進(jìn)展,但是由于CHD種類繁多、病因復(fù)雜,大多數(shù)CHD的病因尚未清楚,急需人們多層次、多水平、深入全面綜合地探討。 目的分析CHD患兒的CITED2基因編碼鏈突變的情況；檢測(cè)CHD患兒22q11微缺失的發(fā)病及分布情況,探討多重連接依賴式探針擴(kuò)增技術(shù)(multiplex ligation-dependent probe amplification, MLPA)用于診斷CHD22q11微缺失的可行性。 方法以2010～2011年河南省胸科醫(yī)院及鄭州市兒童醫(yī)院收集的300例散發(fā)型CHD患兒為研究對(duì)象。300例患兒均為漢族,且均經(jīng)臨床、心臟彩超、手術(shù)確診。50例正常男童及50例正常女童作為本研究的正常對(duì)照,均無CHD病史及家族史。使用非試劑盒方法提取外周血基因組DNA,對(duì)CITED2基因進(jìn)行聚合酶鏈反應(yīng)并測(cè)序,測(cè)序結(jié)果與GeneBank數(shù)據(jù)庫公布的CITED2基因序列(NM006079.3)進(jìn)行比較以識(shí)別基因突變。用Clustal X軟件分析突變氨基酸的保守性。 采用MLPA P250試劑盒(共48對(duì)探針)對(duì)120例CHD患兒進(jìn)行22q11微缺失檢測(cè)。所有反應(yīng)在PCR儀上進(jìn)行：DNA樣品與48對(duì)探針雜交16h,然后用連接酶連接半探針,最后用統(tǒng)一的SALSA PCR引物對(duì)連接的半探針進(jìn)行PCR擴(kuò)增。使用毛細(xì)管電泳儀(CEQ8800)和與之配套的軟件(CEQ system)來分離和分析PCR產(chǎn)物。將CEQ system分析后的數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換為Excel格式,最后使用MRC-Holland公司提供的分析軟件Coffalyser v9.4來分析數(shù)據(jù)。10例正常兒童作為分析對(duì)照。 結(jié)果 1.300例CHD患兒中,有5例(1.67%)檢測(cè)出CITED2基因突變。其余295例(98.33%)沒有檢測(cè)出突變。新發(fā)現(xiàn)了兩種新的突變(c.481-483delAGC, c.574-579delAGCGGC)。 2.120例CHD患兒中,檢出22q11微缺失10例(8.33%),重復(fù)1例(0.83%),其余109例(90.84%)沒有檢測(cè)到缺失或重復(fù)。10例缺失中,3Mb缺失9例,2Mb缺失1例,包括室間隔缺損3例,法洛四聯(lián)癥5例,肺動(dòng)脈狹窄1例,右室雙出口1例。1例重復(fù)CHD類型為肺動(dòng)脈狹窄。 結(jié)論 1.在CHD患兒CITED2基因中發(fā)現(xiàn)兩種突變,兩種突變均為國際首次報(bào)道。多物種序列對(duì)比分析表明CITED2第161、192和193位氨基酸呈現(xiàn)一定的保守性,提示這兩種新突變可能通過改變SGJ區(qū)蛋白構(gòu)象導(dǎo)致人類CHD的發(fā)生。 2.CHD患兒中存在一定比例的22q11微缺失。MLPA是一種快速、簡便且準(zhǔn)確的檢測(cè)22q11微缺失的方法
[Abstract]:Background congenital heart disease (CHD) is a cardiovascular malformation caused by abnormal cardiac vascular development during fetal period, and is also the most common heart disease in children. Its clinical consequences are extremely serious, usually leading to miscarriage, stillbirth, stillbirth and neonatal death. And the incidence of disability in children, adolescents and adults has always been the highest in urban areas, second only to neural tube abnormalities in rural areas, Although much progress has been made in the study of the genetic basis of CHD, because of the wide variety of CHD and the complicated etiology, the etiology of most CHD remains unclear. People in urgent need of multi-level, multi-level, in-depth comprehensive discussion. Objective to analyze the mutation of CITED2 gene coding chain in children with CHD, to detect the occurrence and distribution of 22q11 microdeletion in children with CHD, and to explore the feasibility of multiplex ligation-dependent probe amplification (MLPA) in the diagnosis of CHD22q11 microdeletion. Methods from 2010 to 2011, 300 cases of sporadic CHD were collected from Henan chest Hospital and Zhengzhou Children's Hospital. In this study, 50 normal boys and 50 normal girls had no history of CHD or family history. The genomic DNA of peripheral blood was extracted by non-kit method, and the CITED2 gene was sequenced by polymerase chain reaction (PCR). The results of sequencing were compared with the sequence of CITED2 gene (NM006079.3) published in GeneBank database to identify the mutation. The conserved amino acids of the mutation were analyzed by Clustal X software. MLPA P250 kit (48 pairs of probes) was used to detect 22q11 microdeletion in 120 cases of CHD. Finally, the connected semi-probe was amplified by PCR with a uniform SALSA PCR primer. The PCR product was separated and analyzed by capillary electrophoresis apparatus CEQ8800) and the accompanying software CEQ system. The data analyzed by CEQ system was converted into Excel format. Finally, data were analyzed using Coffalyser v9.4, an analytical software provided by MRC-Holland, to analyze 10 normal children as an analysis control. Results. Of the 1.300 cases of CHD, 5 cases (1.67) were detected CITED2 gene mutation, and the other 295 cases (98.33) were not detected. Two new mutations, c.481-483delAGC, c.574-579delCGCG, were found. 2. Of the 120 cases of CHD, 10 cases with 22q11 microdeletion were found to be 8. 33%, 1 case was repeated with 0. 83% of them, the remaining 10 cases were not detected deletion or repetition. Of 10 cases, 9 cases were missing or duplicated, 9 cases were missing 2 Mb, including 3 cases of ventricular septal defect and 5 cases of tetralogy of Fallot. The results showed that there were 3 cases of ventricular septal defect, 5 cases of tetralogy of Fallot, and 5 cases of Tetralogy of Fallot. Pulmonary artery stenosis in 1 case, double outlet of right ventricle in 1 case, repeat CHD type in 1 case. Conclusion. 1. Two mutations were found in the CITED2 gene of children with CHD, both of which were reported for the first time in the world. The comparative analysis of multiple species sequences showed that the amino acids at position 161,192 and 193 of CITED2 were conserved to some extent. These two new mutations may lead to the occurrence of human CHD by changing the conformation of SGJ domain proteins. 2.There is a certain proportion of 22q11 microdeletions in children with CHD. MLPA is a rapid, simple and accurate method for detecting 22q11 microdeletions.
【學(xué)位授予單位】：新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號(hào)】：R725.4

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 傅俊江,李麓蕓,鐘昌高,李秀蓉,朱文兵,胡亮,譚躍球,范立青,盧光t;特發(fā)性無精癥和嚴(yán)重少精癥患者Y染色體微缺失的分子檢測(cè)[J];生殖與避孕;2001年01期

2 任晨春;Y染色體缺失分析的預(yù)后價(jià)值——Y微缺失的范圍對(duì)精子發(fā)生和支持細(xì)胞成熟的預(yù)后作用[J];國外醫(yī)學(xué).計(jì)劃生育分冊(cè);2002年01期

3 于叢一,莊廣倫,周燦權(quán),閆宗合,李巍,高華,芮德蓉;男性不育病人Y染色體AZFc/DAZ微缺失的實(shí)時(shí)熒光PCR篩查[J];中華男科學(xué);2003年06期

4 戴汝琳;劉睿智;;Y染色體微缺失與男性不育臨床表現(xiàn)的關(guān)系[J];中國計(jì)劃生育學(xué)雜志;2008年03期

5 于叢一,莊廣倫,周燦權(quán),閆宗合,李巍,高華,芮德蓉;男性不育患者Y染色體微缺失篩查方法的建立和初步應(yīng)用[J];中華醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)雜志;2003年04期

6 楊元,張思仲,彭黎明,丁顯平,林立,王軍;中國人原發(fā)無精與嚴(yán)重少精癥Y染色體AZF區(qū)域微缺失的分子流行病學(xué)研究[J];中華醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)雜志;2003年05期

7 劉鋒 ,鄧志華 ,鄒彥 ,羅開玲 ,丘映 ,蘭玲 ,陳芳 ,謝小薰 ,羅國容;Y染色體微缺失與男性不育的關(guān)系分析[J];中國男科學(xué)雜志;2005年03期

8 楊菊先,金潤銘,何美娟,孟浦,肖燕,付平,林雯,劉樹茂,費(fèi)洪寶;熒光原位雜交法檢測(cè)先天性心臟錐干畸形患者22號(hào)染色體長臂微缺失[J];中華醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)雜志;1999年01期

9 金杰,任亮,楊學(xué)貞,郭應(yīng)祿;精子發(fā)生障礙患者Y染色體AZF區(qū)微缺失的篩查及意義[J];中華泌尿外科雜志;2004年03期

10 黃健初,鄭立新,張清健,唐立新,陳平樂,李銘臻;無精與嚴(yán)重少精癥Y染色體AZF區(qū)域微缺失的分子遺傳學(xué)分析[J];廣東醫(yī)學(xué);2004年08期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 吳芳;白曉紅;宋學(xué)茹;楊琳;;251例不育男性Y染色體微缺失及生殖激素水平的研究[A];2011中國婦產(chǎn)科學(xué)術(shù)會(huì)議暨浙江省計(jì)劃生育與生殖醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)年會(huì)暨生殖健康講習(xí)班論文匯編[C];2011年

2 王科;李文燦;王慧君;鄭楓蕓;陳龍;王國民;馬端;;MLPA技術(shù)檢測(cè)22q11染色體微缺失[A];第八次全國醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議(中華醫(yī)學(xué)會(huì)2009年醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)年會(huì))論文摘要匯編[C];2009年

3 趙永平;王曉峰;沈浣;白文俊;李青;徐濤;朱積川;;Y染色體微缺失和反復(fù)性流產(chǎn)[A];第十七屆全國泌尿外科學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2010年

4 王科;王國民;鄭楓蕓;王慧均;萬騰;馬端;;MLPA技術(shù)檢測(cè)22q11.2染色體微缺失[A];第七屆全國唇腭裂學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2009年

5 丁顯平;鐘影;魏霞;吳東;謝婷婷;李建平;;成都地區(qū)男性原發(fā)無精癥患者Y染色體AZF區(qū)域微缺失基因診斷的研究[A];中國優(yōu)生科學(xué)協(xié)會(huì)2004年優(yōu)生科學(xué)學(xué)術(shù)交流大會(huì)論文集[C];2004年

6 李冬水;馮亮;王共先;鐘柯兆;孫庭;;無精子癥患者Y染色體微缺失分析[A];第七次全國中西醫(yī)結(jié)合男科學(xué)術(shù)會(huì)議及全國中西醫(yī)結(jié)合男科提高班論文匯編及講義[C];2011年

7 桂俊豪;王瑞;劉鴻春;袁蘭;楊柳;黃國香;鄒紅云;余伍忠;;多重PCR技術(shù)在Y染色體微缺失快速篩查中的應(yīng)用[A];中國的遺傳學(xué)研究——遺傳學(xué)進(jìn)步推動(dòng)中國西部經(jīng)濟(jì)與社會(huì)發(fā)展——2011年中國遺傳學(xué)會(huì)大會(huì)論文摘要匯編[C];2011年

8 徐晨明;葉英輝;金帆;;無精癥患者Y染色體微缺失的快速篩查[A];全國中西醫(yī)結(jié)合生殖健康學(xué)術(shù)研討會(huì)論文及摘要集[C];2004年

9 王睿;周燦權(quán);胡斌;詹前勝;徐艷文;謝春雨;李穗萍;;多重PCR檢測(cè)外周血Y染色體微缺失和單細(xì)胞巢式PCR檢測(cè)胚胎Y染色體微缺失的研究[A];澳門、香港、內(nèi)地生殖健康研討會(huì)論文集[C];2004年

10 付莉;丁顯平;沈夢(mèng)捷;李創(chuàng);聶雙雙;權(quán)強(qiáng);;不育男性Y染色體微缺失的分子與臨床特征:六年研究回顧[A];中國的遺傳學(xué)研究——遺傳學(xué)進(jìn)步推動(dòng)中國西部經(jīng)濟(jì)與社會(huì)發(fā)展——2011年中國遺傳學(xué)會(huì)大會(huì)論文摘要匯編[C];2011年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前10條

1 本報(bào)記者 湯江峰 本報(bào) 通訊員 鄒永華;Y染色體微缺失導(dǎo)致男性不育[N];大眾衛(wèi)生報(bào);2005年

2 張中橋;男性少精癥與y染色體微缺失相關(guān)[N];中國醫(yī)藥報(bào);2002年

3 ;中國人原發(fā)無精與少精癥Y染色體無精癥因子區(qū)域微缺失的臨床基因診斷研究[N];中國醫(yī)藥報(bào);2003年

4 冀民;河北啟動(dòng)“慈善關(guān)愛行動(dòng)”救助重大疾病貧困患兒[N];中國社會(huì)報(bào);2009年

5 記者 張虎林　通訊員 許春林;農(nóng)村大病患兒報(bào)銷比例提高[N];泰州日?qǐng)?bào);2010年

6 記者 殷珂;大冶兩名患兒獲救治[N];黃石日?qǐng)?bào);2010年

7 通訊員 王芳　記者 呂s，

本文編號(hào)：1640340