本文關(guān)鍵詞： Rho激酶 法舒地爾 肺血管平滑肌 增殖　出處：《瀘州醫(yī)學院》2013年碩士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：目的：建立左肺切除+野百合堿誘導的大鼠肺動脈高壓模型。探討Rho激酶選擇性抑制劑法舒地爾（fasudil）對該模型肺血管平滑肌細胞增殖的影響。 方法：采取左側(cè)肺切除與1%野百合堿（60mg/kg）皮下注射的方法建立大鼠肺動脈高壓模型。健康雄性SD大鼠48只，隨機分為4組：空白對照組（不作任何處理）、模型組（左肺切除+野百合堿誘導）和藥物干預組[左肺切除7d后給予fasudil2mg/(kg.d)進行干預]、藥物逆轉(zhuǎn)組[左肺切除21d后給予fasudil2mg/(kg.d)]。用多導生理記錄儀檢測平均肺動脈壓力(mPAP)；計算心臟RV/（LV+S）比值；采用免疫組織化學染色方法檢測各組肺組織中腫瘤增殖抗原（Ki67）、微型染色體維持蛋白（MCM2）、細胞周期蛋白依賴性激酶抑制蛋白（P27Kip1）及SM-α-actin的表達；采用WesternBlot檢測各組肺組織中的P27Kip1的表達，觀察fasudil對左肺切除+野百合堿誘導的肺動脈高壓大鼠模型肺血管重構(gòu)的影響。 結(jié)果：（1）實驗前后體重變化比較：總共48只大鼠42只存活至35d藥物干預結(jié)束。模型組動物在注射MCT后28d出現(xiàn)松毛、活動減少、呼吸急促、舌黏膜發(fā)紺、肝腫大等表現(xiàn)，最終死亡5只。其它組上述表現(xiàn)相對輕微，治療組死亡0只，逆轉(zhuǎn)組死亡1只。模型組動物在注射MCT后約1周出現(xiàn)體重不增，與對照組比較，模型組大鼠體重下降明顯[（310±13vs.472±11）g，P 0.01]；與模型組比較，干預組和逆轉(zhuǎn)組大鼠體重有不同程度增加（[448±10vs.310±13）g，，P 0.01；（356±12vs.310±13）g，P0.05]，且干預組增加更加明顯，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。（2）血流動力學改變：肺切除術(shù)后第35d，與對照組比較，模型組mPAP顯著增加[（58.3±4.0vs.17.18±1.5）mmHg，P0.01]；與模型組比較，給予fasudil進行干預后，干預組及逆轉(zhuǎn)組mPAP有不同程度下降[（36.6±3.1vs.58.3±4.0）mmHg，P0.01；(51.2±3.6vs.58.3±4.0) mmHg，P0.05]，且干預組下降更明顯（P＜0.05）。（3）右心厚度百分比：手術(shù)建立模型后第35d，與對照組相比，肺動脈高壓模型組RV（/LV+S）比值明顯升高（0.643±0.046vs.0.325±0.028，P0.01）。給予fasudil后，與模型組相比，干預組及逆轉(zhuǎn)組RV/（LV+S）比值有不同程度的下降（0.447±0.029vs.0.643±0.046，P0.01；0.578±0.033vs.0.643±0.046，P0.05），且干預組下降更明顯（P＜0.05）。（4）肺小動脈中膜增厚程度：手術(shù)建立模型后第35d，與對照組比較，模型組肺小動脈中膜厚度比率（WT％）顯著增加（63.4±5.5vs.15.2±1.3，P0.01）；給予fasudil后，與模型組比較，干預組及逆轉(zhuǎn)組肺小動脈中膜厚度比率（WT％）均有不同程度下降（30.8±2.9vs.63.4±5.5，P0.01；54.7±5.3vs.63.4±5.5，P0.05），且干預組下降更明顯（P＜0.05）。（5）非肌性血管肌化程度：手術(shù)造模后第35d，與對照組比較，模型組非肌性血管肌化程度顯著增加（84.7±8.5vs.19.3±2.5，P0.01）；與模型組比較，干預組及逆轉(zhuǎn)組非肌性血管及化程度均有不同程度下降（68.6±6.3vs.84.7±8.5，P0.01；73.2±6.9vs.84.7±8.5，P0.05），且干預組下降更明顯（P＜0.05）。（6）各組大鼠免疫組化結(jié)果的比較：與對照組比較，模型組肺血管平滑肌細胞增殖標志物Ki67、MCM2及細胞周期蛋白cyclin B1、cyclin E1、α平滑肌肌動蛋白SM-α-actin抗體染色陽性細胞明顯增加，細胞周期蛋白抑制因子（CDI）P27kip1抗體染色陽性細胞明顯減少；給予fasudil后，與模型組比較，干預組、逆轉(zhuǎn)組肺血管平滑肌細胞Ki67、MCM2、cyclin B1、cyclin E1、SM-α-actin抗體染色陽性細胞均有不同程度降低，且干預組降低更明顯；P27kip1抗體染色陽性細胞均有不同程度升高，且干預組升高更明顯。（7）Western Blot檢測各組大鼠肺組織P27kip1蛋白的表達結(jié)果顯示，手術(shù)造模后第35d，模型組P27kip1蛋白的OD值較對照組顯著降低（627.9±285.8vs.2483.4±511.2，P0.01）；與模型組比較，干預組及逆轉(zhuǎn)組P27kip1蛋白的OD值均有不同程度升高（1962.7±674.5vs.627.9±285.8， P0.01；917.8±264.3vs.627.9±285.8，P0.01），且干預組升高更明顯（P＜0.01）。 結(jié)論：1、左肺切除合并野百合堿能成功建立大鼠梗阻性肺動脈高壓模型。2、Fasudil能緩解大鼠梗阻性肺動脈高壓，可能是通過抑制ROCK來參與上調(diào)P27Kip1從而抑制肺動脈高壓大鼠模型的肺動脈平滑肌細胞的增殖。3、Fasudil能有效緩解或阻滯PAH肺血管重構(gòu)。
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【學位授予單位】：瀘州醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R725.4

【參考文獻】

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1 劉斌;王獻民;魏麗;周同甫;劉瀚e

本文編號：1529291