本文關(guān)鍵詞： 非霍奇金淋巴瘤 量子點(diǎn) 免疫熒光法 免疫酶組織化學(xué) 快速特異　出處：《華中科技大學(xué)》2013年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：目的兒童淋巴瘤是小兒血液系統(tǒng)疾病中僅次于白血病的第二大惡性腫瘤，早期診斷對其治療及預(yù)后起著非常重要的作用。量子點(diǎn)是近年來發(fā)展起來的一種新型熒光納米微粒，具有激發(fā)光譜寬而連續(xù)、發(fā)射光譜窄而對稱、熒光強(qiáng)度高、光化學(xué)穩(wěn)定性好、耐光漂白等優(yōu)點(diǎn)。本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用量子點(diǎn)(quantum dots, QDs)免疫熒光技術(shù)在石蠟包埋的非霍奇金淋巴瘤組織切片上同時(shí)檢測兩種抗原的表達(dá)，并與免疫酶組織化學(xué)方法相比較，探討基于量子點(diǎn)診斷的快速特異性及優(yōu)越性，以期擴(kuò)展到其他病種的輔助診斷。 方法（1）在溫和的水相條件下制備出水溶性的巰基乙酸量子點(diǎn)，并利用不同發(fā)射波長量子點(diǎn)（525nm、605nm）標(biāo)記的鏈霉親和素復(fù)合物（QDs-SA）為基礎(chǔ)的免疫熒光技術(shù)，分別檢測T淋巴母細(xì)胞淋巴瘤、彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤病例組織表面TDT、CD3和CD19、CD20兩種抗原的共同表達(dá)；（2）利用免疫酶標(biāo)技術(shù)在連續(xù)切片上依次標(biāo)記上述抗原，比較兩種方法的抗原定位效果，并評估量子點(diǎn)免疫熒光法的光學(xué)強(qiáng)度及穩(wěn)定性。 結(jié)果經(jīng)修飾后的QDs-SA復(fù)合物與巰基乙酸量子點(diǎn)的光學(xué)特性變化不大，且實(shí)驗(yàn)中并未影響到組織細(xì)胞形態(tài)學(xué)特征。熒光顯微鏡下觀察到幾乎所有T淋巴母細(xì)胞淋巴瘤（17/20）都有TdT、CD3抗原的共同表達(dá)，，大多數(shù)彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤（11/20）中也有CD19、CD20的共同表達(dá)，這與免疫酶組織化學(xué)技術(shù)檢測結(jié)果定位完全一致，前者的陽性信號更強(qiáng)，有更高的光學(xué)穩(wěn)定性，且無明顯的熒光顆粒聚集現(xiàn)象，成像更清晰。 結(jié)論表面修飾后的量子點(diǎn)有更好的組織相容性，并減少了其表面毒性。利用量子點(diǎn)免疫熒光法可以同時(shí)檢測出組織石蠟切片中兩種抗原的不同表達(dá)，這與免疫酶組織化學(xué)方法標(biāo)記的抗原定位有高度一致性，相比較免疫酶標(biāo)法一張切片僅標(biāo)記一種抗原，可明顯節(jié)約標(biāo)本量，且有很高的陽性信號和強(qiáng)的光學(xué)穩(wěn)定性。因此，量子點(diǎn)作為新型熒光探針，顯示了其快速特異性及優(yōu)越性，有望成為病理學(xué)診斷中的一種新的輔助檢查手段。
[Abstract]:Objective Children's lymphoma is the second largest malignant tumor in children's hematological diseases, and early diagnosis plays an important role in its treatment and prognosis. Quantum dots (QDs) are a new type of fluorescent nanoparticles developed in recent years. The excitation spectrum is wide and continuous, the emission spectrum is narrow and symmetrical, the fluorescence intensity is high, the photochemical stability is good, In this experiment, quantum dot quantum dots (QDs) immunofluorescence technique was used to detect the expression of two kinds of antigens in paraffin-embedded non-Hodgkin 's lymphoma tissue sections, and compared with the immunohistochemical method. To explore the rapid specificity and superiority of quantum dot diagnosis (QDs) in order to extend to other auxiliary diagnosis. Methods 1) the water-soluble thioglycolic acid quantum dots were prepared under mild water phase conditions, and the immunofluorescence technique based on streptomycin complex QDs-SAwas used to label Streptomycin complex (QDs-SA) at different emission wavelengths. To detect the co-expression of TDTCD3 and CD19 CD20 on the tissue surface of T lymphoblastic lymphoma and diffuse large B cell lymphoma respectively. The antigen-localization effects of the two methods were compared, and the optical intensity and stability of the quantum dot immunofluorescence method were evaluated. Results the optical properties of modified QDs-SA complex and thioglycolic acid quantum dots changed little. Almost all T-lymphoblastic lymphomas (T-lymphoblastic lymphoma) were observed to have co-expression of TdTnCD3 antigen under fluorescence microscope, and CD19 / CD20 was also co-expressed in most diffuse large B-cell lymphomas (11 / 20). The positive signal of the former is stronger, the optical stability is higher, there is no obvious fluorescence particle aggregation, and the imaging is clearer. Conclusion the modified QDs have better histocompatibility and less surface toxicity. The different expression of two antigens in paraffin sections can be detected by using QDs immunofluorescence method. This is highly consistent with the localization of antigen labeled by immunohistochemical method. Compared with the immuno-labeled method, a section labeled with only one antigen can significantly save the sample size, and has a high positive signal and strong optical stability. As a new fluorescent probe, quantum dots (QDs) show its rapid specificity and superiority, which is expected to be a new auxiliary examination method in pathological diagnosis.
【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R733.1

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號：1510062