本文關(guān)鍵詞：鹽酸氨溴索對宮內(nèi)感染所致新生鼠支氣管肺發(fā)育不良中ROS、NF-κBp65、TGF-β1表達(dá)的影響　出處：《南昌大學(xué)》2014年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：目的： 1.參考BELL[1]所建立的宮內(nèi)感染模型，觀察孕鼠宮內(nèi)感染后所產(chǎn)新生大鼠的肺組織病理變化情況。 2.研究宮內(nèi)感染致新生大鼠支氣管肺發(fā)育不良（BPD）肺組織中ROS、NF-κBp65以及TGF-β1的表達(dá)，探討三者在宮內(nèi)感染致新生大鼠BPD中的作用。 3.研究鹽酸氨溴索（AMB）對宮內(nèi)感染致新生大鼠BPD中ROS、NF-κBp65以及TGF-β1表達(dá)的影響，并初步探討其可能的作用機(jī)制，為AMB成為早期防治BPD的藥物提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法： 1.實(shí)驗(yàn)分組：將30只孕第15d的大鼠隨機(jī)分為以下3組（每組n=10）：生理鹽水對照組（NS組）、脂多糖組（LPS組）和鹽酸氨溴索干預(yù)組（AMB組）。 2.模型制作及藥物干預(yù)：參照Bell[1]等人的方法，通過給孕鼠腹腔內(nèi)注射脂多糖（lip polysaccharide，LPS）造成孕鼠宮內(nèi)感染模型。AMB組于孕15、16d連續(xù)2天腹腔內(nèi)注射脂多糖LPS200μg/kg，，并在注射LPS后1h、孕17、18d連續(xù)3天腹腔內(nèi)注射鹽酸氨溴索（ambroxol，AMB）100mg/kg；LPS組于孕15、16d連續(xù)2天腹腔內(nèi)注射LPS200μg/kg，并在注射LPS后1h、孕17、18d連續(xù)3天腹腔內(nèi)注射與AMB等容積的生理鹽水；NS組在相同的時(shí)間點(diǎn)腹腔注射等容積的生理鹽水。 3.標(biāo)本的采集：造模完成后分別從三組中隨機(jī)取出1只孕鼠處死，取出胎盤、子宮并置于4%中性甲醛中固定，用于HE染色。足月新生大鼠娩出后，分別于生后4個(gè)時(shí)間點(diǎn)(1d、3d、7d、14d)稱重后斷頭處死，迅速取出肺組織，使用生理鹽水洗凈，置于濾紙吸干肺組織表面水分后稱重，然后將部分肺組織置于液氮中速凍，用以測定肺組織中ROS含量；剩余部分肺組織進(jìn)行常規(guī)脫水、石蠟包埋，用于HE和免疫組化染色(每組每個(gè)時(shí)間點(diǎn)8只)。 4.觀測指標(biāo)：觀察各組孕鼠注藥后的一般情況，是否有死亡及流產(chǎn)的現(xiàn)象；通過HE染色觀察各組孕鼠胎盤及子宮的病理變化情況；測量新生大鼠的肺重、體重，肺指數(shù)(肺重/體重)；HE染色觀察肺組織病理形態(tài)學(xué)改變，并顯微鏡下計(jì)算生后第3d、7d、14d輻射狀肺泡計(jì)數(shù)（radial alveolar count，RAC）；Elisa法測定肺組織中活性氧（ROS）的表達(dá)，免疫組織化學(xué)染色法測定肺組織中核因子-κBp65（NF-κBp65）以及轉(zhuǎn)化生長因子-β1（TGF-β1）蛋白的表達(dá)。 結(jié)果： 1.孕鼠一般情況及分娩情況：三組孕鼠注藥后均進(jìn)食、活動(dòng)正常，皮毛顏色未見明顯變化，LPS組有1例孕鼠發(fā)生死亡、1例孕鼠出現(xiàn)陰道流血，NS組及AMB組孕鼠無死亡及流產(chǎn)發(fā)生。NS組孕鼠共獲得72（72/74）只新生大鼠，LPS組共獲得61（61/67）只新生大鼠，AMB組共獲得62（62/65）只新生大鼠。 2.各組肺重和體重的變化：新生大鼠生后第1d、3d、7d：LPS組與NS組比較肺重及體重均減小（P0.05）；AMB組與LPS組比較肺重及體重均增加（P0.05），與NS組比較肺重及體重仍有所減少，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。新生大鼠生后第14d：各組間肺重、體重比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。 3.胎盤及子宮的病理形態(tài)改變：LPS組孕鼠胎盤及子宮壁內(nèi)血管充血、水腫，可見大量的中性粒細(xì)胞浸潤；AMB組胎盤及子宮內(nèi)充血、水腫及炎性浸潤均較LPS組明顯減輕；NS組胎盤及子宮內(nèi)未見明顯炎癥反應(yīng)。 4.肺組織的病理形態(tài)改變：LPS組新生大鼠生后第1d肺組織內(nèi)囊泡樣結(jié)構(gòu)少于NS組，AMB組與LPS組比較囊泡數(shù)有所增加，但較NS組仍少；生后第7d肺組織中，LPS組可見肺泡數(shù)及肺泡膈均少于NS組，肺泡結(jié)構(gòu)簡單化；生后14d，LPS組肺泡數(shù)目較NS組明顯減少，肺泡膈厚度卻明顯增加，AMB組肺組織中出現(xiàn)較LPS組大致類似的病理改變，但程度減輕。 5.新生大鼠RAC的變化：生后第3d的三組肺組織RAC之間比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。LPS組新生大鼠生后第7d、14dRAC較NS組減少（P0.05），AMB組新生大鼠生后第7d、14dRAC較LPS組增加（P0.05）。 6.LPS組新生大鼠生后第1d、3d、7d肺組織中ROS、NF-κBp65、TGF-β1表達(dá)明顯高于NS組(P0.01)，生后14d三組間比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)；ROS、NF-κBp65、TGF-β1三者之間兩兩比較均成正相關(guān)。 7.AMB組新生大鼠生后第1d、3d、7d肺組織中ROS、NF-κBp65、TGF-β1表達(dá)較LPS組明顯下降（P0.01）。 結(jié)論： 1.通過腹腔內(nèi)注射LPS建立的宮內(nèi)感染孕鼠模型導(dǎo)致新生大鼠肺重和體重的降低，肺組織病理可見肺泡數(shù)目減少、肺泡膈減少及增厚等表現(xiàn)，提示宮內(nèi)感染可導(dǎo)致BPD的發(fā)生。 2.宮內(nèi)感染后新生大鼠肺組織內(nèi)ROS、NF-κBp65及TGF-β1的表達(dá)均增加，提示宮內(nèi)感染致新生大鼠BPD的發(fā)生發(fā)展與氧化應(yīng)激反應(yīng)、NF-κBp65及TGF-β1的上升有關(guān)。 3.宮內(nèi)感染后ROS、NF-κBp65及TGF-β1兩兩比較均呈正相關(guān)，提示宮內(nèi)感染后ROS、NF-κBp65及TGF-β1可能共同促進(jìn)新生大鼠BPD的發(fā)生與發(fā)展。 4.AMB可通過抑制ROS的產(chǎn)生，降低NF-κBp65的轉(zhuǎn)錄活性，并最終減少TGF-β1的表達(dá)，從而發(fā)揮對宮內(nèi)感染致新生大鼠支氣管肺發(fā)育不良的保護(hù)作用。
[Abstract]:Objective:
1. the intrauterine infection model established by BELL[1] was used to observe the pathological changes of the lung tissue of the newborn rats after intrauterine infection.
2., we studied the expression of ROS, NF- Bp65 and TGF- beta 1 in the lung tissues of neonatal rats with intrauterine infection, and explored the role of the three in the BPD induced by intrauterine infection in BPD rats.
3., we studied the effect of ambroxol (AMB) on the expression of ROS, NF- Bp65 and TGF- beta 1 in BPD of neonatal rats, and explored the possible mechanism of AMB, so as to provide experimental evidence for AMB to become an early drug against BPD.
Method錛

本文編號：1378897