本文關鍵詞：重組人白介素-11對壞死性小腸結(jié)腸炎的保護作用及其機制研究

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【摘要】：第一部分重組人白介素-11對新生大鼠壞死性小腸結(jié)腸炎模型腸道損傷的保護作用及機制研究目的： 新生兒壞死性小腸結(jié)腸炎(neonatal necrotizing enterocolitis, NEC)是新生兒期最常見的胃腸道疾病,近年來,隨著圍產(chǎn)醫(yī)學和兒科學的發(fā)展以及新生兒重癥監(jiān)護病房(neonatal intensive care unit, NICU)的建立,早產(chǎn)兒、極低出生體重兒存活率明顯升高,NEC的發(fā)病率也逐年上升,另一方面,盡管對NEC已經(jīng)進行了幾十年的研究,但其發(fā)病機制仍不十分明確,也缺乏確實有效的預防措施和治療方法,其致死率幾十年來未見明顯降低。而大量研究證實在多種原因?qū)е履c道損傷時IL-11可發(fā)揮保護作用。為此,本研究旨在了解IL-11對壞死性小腸結(jié)腸炎大鼠腸上皮的保護作用及可能的保護機制,為尋找新的防治措施奠定理論基礎。 方法： 2日齡新生SD大鼠隨機分為對照組(20只)、NEC組(32只)、IL-11組(32只)；對照組大鼠與母鼠同籠,鼠乳喂養(yǎng),NEC組大鼠和IL-11組大鼠置于新生兒培育箱內(nèi),予人工喂養(yǎng)+缺氧90s+胃注4mg/kg脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)處理,連續(xù)2天,復制NEC動物模型；NEC模型建立完成后,將NEC組和IL-11組新生大鼠送回與母鼠同籠,鼠乳喂養(yǎng),IL-11組大鼠分別在NEC造模結(jié)束后即刻、12小時、36小時腹腔注射400μg/kg重組人白介素-11(recombinant human interleukin-11, rhIL-11),此時,NEC組和對照組大鼠注射等劑量生理鹽水替代；選取rhIL-11治療結(jié)束后12小時、36小時、72小時、120小時共四個時間點活殺取材,采用HE染色、免疫組化等技術研究IL-11對大鼠腸道病理形態(tài)及對IL-11受體a鏈(interleukin-11receptor alpha chain,IL-11Ra)表達的影響。結(jié)果： 1.一般情況 NEC時大鼠主要表現(xiàn)為懶動、皮膚青紫或蒼白、排黃綠色稀便、喂養(yǎng)困難、嘔吐等,大鼠體重明顯降低,與對照組存在差異(p0.01)；給予rhIL-11治療后,IL-11組大鼠NEC的臨床表現(xiàn)逐漸減輕,且體重增長較NEC組大鼠快,但在整個實驗過程中,其體重在同一時間點始終低于對照組,兩組間存在差異(p0.05)。 2.大鼠腸道組織大體形態(tài)改變 NEC組大鼠腸道主要表現(xiàn)為胃潴留、腸壁積氣、積液,腹腔內(nèi)可見較多炎性滲出物,IL-11組在同一時間點腸道損傷程度較NEC組輕。 3.大鼠腸道組織病理學改變 (1)人工喂養(yǎng)+缺氧90s+胃注4mg/kg旨多糖2天建立NEC模型,結(jié)腸損傷最為嚴重,回腸次之,空腸損傷輕； (2)NEC組大鼠腸組織絨毛上皮細胞變性,絨毛壞死脫落,隱窩數(shù)目明顯減少,部分隱窩裸露,伴炎性細胞浸潤,重者可見固有層與肌層分離,腸壁滲出、充血、出血；定量分析顯示,rhIL-11療程結(jié)束后12h、36h,與對照組相比,NEC組回腸絨毛高度和隱窩數(shù)目均明顯減少(P0.01)； (3)IL-11組大鼠腸道損傷程度較同時NNEC組輕,上皮及隱窩數(shù)目較相同時間點NEC組多,絨毛高度及隱窩數(shù)目逐漸恢復,至120h與對照組無差異(P0.05)。 4.IL-11及IL-11Ra在大鼠腸道損傷中的表達變化 (1)IL-11及IL-11Rα于正常腸絨毛及隱窩上皮細胞胞漿呈強陽性表達； (2)rhIL-11療程結(jié)束后12h、36h, IL-11及IL-11Ra在NEC組腸道表達下降； (3)IL-11組IL-11表達水平在治療療程結(jié)束后12h-72h表達增強,120h表達恢復正常；IL-11Ra在治療療程結(jié)束后12h-72h表達較對照組減弱,但卻強于NEC組,120h表達恢復正常。 結(jié)論： (1)人工喂養(yǎng)+缺氧90s+胃注4mg/kgj脂多糖2天可成功建立新生大鼠NEC模型； (2)NEC病變以腸黏膜上皮細胞變性、壞死為主,伴隱窩數(shù)目減少；IL-11腸道病變較NEC組輕,其機制可能是通過減少上皮細胞及隱窩細胞破壞,促進隱窩細胞增殖再生及絨毛結(jié)構(gòu)恢復。 (3)在NEC的腸道損傷期,腸道內(nèi)源性IL-11、IL-11Rα水平明顯降低,rhIL-11可增加損傷后腸道IL-11的表達水平,抑制IL-11Rα的表達下調(diào),提示外源性給予IL-11可能通過上調(diào)腸上皮IL-11及其受體的表達,而參與NEC后的腸道修復過程,可能對腸道具有保護作用。 第二部分重組人白介素-11對脂多糖致IEC-6細胞損傷的影響 目的： 探討重組人白介素-11(recombinant human interleukin-11, rhIL-11)對大鼠空腸上皮細胞系-6(intestinal epithelial cell-6, IEC-6)增殖和凋亡的影響。 方法： 實驗分為空白對照組、模型對照組、IL-11治療組。通過脂多糖(Lipopolysaccharide, LPS)作用于正常IEC-6細胞,建立NEC體外模型,模型建立后不予rhIL-11治療者稱為模型對照組,予rhIL-11治療者則為IL-11治療組,空白對照組為正常IEC-6細胞,在實驗過程中不予藥物處理,而加入等劑量的生理鹽水替代；其中,模型對照組依據(jù)LPS加入劑量,分為5μg/ml、10μg/ml、50μg/ml、100μg/ml、200μg/ml劑量組,MTT比色法檢測以上不同劑量組在加入LPS后1h、3h、6h、12h、24hIEC-6細胞的增殖活力。體外模型建立后,IL-11組予100ng/ml rhIL-11治療,而空白對照組、模型對照組加入等劑量生理鹽水,MTT比色法檢測rhIL-11加入后3h、6h、9h、12h三組細胞的增殖活力。流式細胞術檢測空白對照組、模型對照組、IL-11治療組的凋亡率和壞死率。結(jié)果： 以上不同劑量LPS均可在不同時間點降低IEC-6細胞的增殖活力(P0.05),增加細胞凋亡率和壞死率,與空白對照組存在明顯差異(P0.05)；IL-11治療組在100ng/ml rhIL-11作用9h后,其細胞增殖活力顯著提高,與空白對照組無差異(P0.05)；另外,該組IEC-6細胞的凋亡率和壞死率較模型對照組降低(P0.01),但仍高于空白對照組(P0.05)。結(jié)論： rhIL-11可促進LPS損傷后的IEC-6細胞增殖及活力的恢復,降低凋亡和壞死率,提示rhIL-11對LPS損傷后的IEC-6細胞具有保護作用。
【學位授予單位】：南方醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R722.1

【參考文獻】

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本文編號：1301947