本文關(guān)鍵詞：miRNA-708在兒童普通急性淋巴細(xì)胞性白血病中的表達(dá)及調(diào)控機(jī)制的研究

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【摘要】：背景急性淋巴細(xì)胞性白血病(ALL)是最常見的兒童惡性血液腫瘤,約占兒童急性白血病的75%-80%。多數(shù)ALL患者通過規(guī)范治療可以達(dá)到長(zhǎng)期無病生存,然而仍有一部分ALL患兒,特別是高危型患兒,復(fù)發(fā)或難以達(dá)到緩解。微小RNA (miRNA)與白血病的發(fā)生、發(fā)展、臨床表現(xiàn)和預(yù)后有密切聯(lián)系,在其發(fā)生中起促癌或抑癌的作用,在靶向分子治療和預(yù)后評(píng)價(jià)方面具有良好的應(yīng)用前景。 目的檢測(cè)兒童普通急性淋巴細(xì)胞性白血病(common-ALL)中niRNA的差異性表達(dá),進(jìn)一步研究差異性表達(dá)的miRNA-708調(diào)控的靶基因。 方法研究對(duì)象為34例普通急性淋巴細(xì)胞性白血病患兒及5例行骨骼矯正手術(shù)并排除腫瘤和血液系統(tǒng)疾病患兒的骨髓樣本,采用中國(guó)兒童血液病研究組2008(CCLG-2008)方案對(duì)其進(jìn)行治療及臨床危險(xiǎn)度分型。 1.應(yīng)用miRNA微陣列基因芯片技術(shù)篩選common-ALL患兒樣本中miRNA的差異性表達(dá),應(yīng)用莖環(huán)實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈反應(yīng)(stem-loop RT-PCR)技術(shù)驗(yàn)證差異性表達(dá)的miRNA。 2.應(yīng)用生物信息學(xué)方法預(yù)測(cè)miRNA-708調(diào)控的靶基因,利用雙報(bào)告基因檢測(cè)技術(shù)鑒定miRNA-708調(diào)控的靶基因,通過實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)和蛋白質(zhì)印跡(Western blot)等方法在淋巴細(xì)胞和白血病細(xì)胞中進(jìn)一步驗(yàn)證miRNA-708是否調(diào)控靶基因的表達(dá)。 3.利用基因點(diǎn)突變和雙報(bào)告基因檢測(cè)技術(shù)驗(yàn)證miRNA-708與CNTFR的結(jié)合位點(diǎn)。 結(jié)果 1. miRNA微陣列芯片結(jié)果示：同正常對(duì)照組相比,在兒童普通急性淋巴細(xì)胞性白血病樣本中檢測(cè)的2006個(gè)niRNA中,miR-708、miR-210、miR-181b、 miR-345、miR-324-5p、miR-125b、miR-324-3p和miR-106b表達(dá)顯著上調(diào);miR-23、miR-27a和miR-23b表達(dá)顯著下調(diào)。莖環(huán)實(shí)時(shí)定量PCR進(jìn)一步驗(yàn)證示,miR-708、miR-210和miR-181b表達(dá)量為16.886±16.854、5.710±4.652及9.789±1.178,與正常對(duì)照組(1.872±0.339、1.276±0.531及1.005±0.080)相比表達(dá)均上調(diào),差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。miR-27a和miR-345表達(dá)量為0.524±0.085及0.675±0.086,與正常對(duì)照組(1.123±0.066及1.204±0.143)相比均下調(diào),差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。miR-708和miR-181b在高危組中表達(dá)水平為44.990±6.379和12.980±1.889,高于中危組和標(biāo)危組(P0.05)。 2.通過生物信息學(xué)技術(shù)預(yù)測(cè)miR-708的靶基因,篩選出CNTFR、NNAT和GNG12三個(gè)預(yù)測(cè)靶基因進(jìn)行驗(yàn)證。雙報(bào)告基因檢測(cè)結(jié)果示：轉(zhuǎn)染miR-708模擬物(miR-708mimics)的人胚胎腎239細(xì)胞中CNTFR、NNAT和GNG12的表達(dá)水平均下降,而轉(zhuǎn)染miR-708抑制劑其表達(dá)升高。在普通急性淋巴細(xì)胞白血病樣本中,CNTFR、NNAT的mRNA表達(dá)水平較對(duì)照組相比顯著下降,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。在Jurkat細(xì)胞中,同陰性對(duì)照組相比,轉(zhuǎn)染miR-708mimics組CNTFR、NNAT和GNG12蛋白水平均有不同程度的下降,而轉(zhuǎn)染]miR-708抑制劑(miR-708inhibitor)組CNTFR、NNAT和GNG12蛋白水平表達(dá)有不同程度的升高。 3.通過點(diǎn)突變技術(shù)和雙報(bào)告基因檢測(cè)驗(yàn)證結(jié)合位點(diǎn),結(jié)果示：miR-708與CNTFR的結(jié)合區(qū)域位于CNTFR mRNA3'-UTR端394～400bp。 結(jié)論miRNAs的差異性表達(dá)在兒童普通型急性淋巴細(xì)胞性白血病發(fā)生發(fā)展過程中及其不同的臨床分型的發(fā)生機(jī)制中存在重要的作用,其中niRNA-708是高危型common-ALL重要的調(diào)控因子。miRNA-708在白血病細(xì)胞中通過結(jié)合靶基因CNTFR、NNAT和GNG12的3'-UTR端,降低靶基因的表達(dá)水平。
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R733.71

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前3條

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2 張華;陳月琴;;白血病microRNA的研究進(jìn)展[J];中國(guó)科學(xué)(C輯:生命科學(xué));2009年01期

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本文編號(hào)：1252340