本文關(guān)鍵詞：柯薩奇病毒A16 VP4蛋白的克隆表達(dá)及其抗體中和效應(yīng)的初步分析

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【摘要】：柯薩奇A16型病毒(Coxsackie virus A16, CA16)感染是引起手足口病(hand foot and mouth disease, HFMD)最主要的致病原之一。手足口病是五歲以下兒童感染該病毒后的常見傳染病,一旦感染則常常會導(dǎo)致嚴(yán)重的中樞神經(jīng)系統(tǒng)并發(fā)癥,死亡率極高。然而,據(jù)報道到目前為止,針對同為手足口病另一重要致病原EV71病毒的滅活疫苗已經(jīng)完成了三期臨床試驗,而EV71滅活疫苗的實(shí)驗研究表明對CAl6病毒引起的感染交叉保護(hù)力低,為了擴(kuò)大對手足口病的保護(hù)效率,研發(fā)CA16的安全有效的疫苗勢在必行。CA16的結(jié)構(gòu)蛋白VP1-3暴露在病毒的外表面,構(gòu)成病毒的衣殼,是抗原決定簇的存在部位,帶有中和抗原活性和特異性抗原位點(diǎn),是非常重要的抗原表位研究對象；而VP4包埋在衣殼內(nèi)部,與核心緊密相連,同時序列也較為保守,在病毒VP1蛋白與受體結(jié)合后,衣殼松動,VP4蛋白即脫落,病毒基因組完成脫殼穿入過程,在現(xiàn)有研究成果的基礎(chǔ)上,如果能加深對VP4蛋白的研究,或許能夠找到更好的亞單位疫苗研制途徑。 本研究選取CA16病毒G20株作為研究對象,構(gòu)建了谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶標(biāo)記的VP4融合蛋白(Gst-VP4)的表達(dá)基因,并將其轉(zhuǎn)入原核表達(dá)系統(tǒng)進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá),表達(dá)后的菌液經(jīng)超聲,離心取上清,采用谷胱甘肽瓊脂糖(Glutathione Sepharose4B)親和吸附,純化后獲得純度較高的目的蛋白。 在動物免疫效果評價研究中,以家兔作為實(shí)驗動物,以0,、14、28、36天的免疫時間點(diǎn),采取初次免疫之后進(jìn)行三次加強(qiáng)免疫的免疫程序免疫3-4月齡家兔；隨后western blot實(shí)驗證明有病毒結(jié)構(gòu)蛋白VP4的成功表達(dá)以及實(shí)驗動物體內(nèi)產(chǎn)生特異性免疫反應(yīng)并產(chǎn)生相應(yīng)特異性抗體。 體外抗體中和實(shí)驗中,采用適用于病毒疫苗研制的非洲綠猴腎細(xì)胞(Vero細(xì)胞)體外培養(yǎng)與血清中的特異性抗體進(jìn)行中和反應(yīng)檢測,,尤其體外中和反應(yīng)初步證實(shí),在免疫血清稀釋度1：1-1：8時,CA16G20株在Vero細(xì)胞中的增殖受到了明顯的抑制。結(jié)果初步證明表達(dá)蛋白能誘發(fā)機(jī)體產(chǎn)生一定的保護(hù)性中和抗體
【學(xué)位授予單位】：昆明醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R725.1

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：1213087