本文關(guān)鍵詞：內(nèi)毒素耐受幼鼠肝臟Myd88及Tollip蛋白表達(dá)變化的研究

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【摘要】：目的：建立內(nèi)毒素耐受幼鼠模型，研究內(nèi)毒素耐受幼鼠肝臟組織TLR4（Toll樣受體4）/Myd88通路上正性因子髓樣分化蛋白88(Myeloid differentiation factor88，Myd88)及負(fù)性因子Toll反應(yīng)蛋白（Toll interacting protein，Tollip）的表達(dá)情況。方法：1、實(shí)驗(yàn)分組：將96只ICR幼鼠（日齡40±2天）隨機(jī)分為3組，每組32只幼鼠。第一組為實(shí)驗(yàn)組(預(yù)先刺激組)，第二組為實(shí)驗(yàn)對照組（非預(yù)先刺激組），第三組為空白對照組。2、建立內(nèi)毒素耐受模型：（1）采用腹腔注入脂多糖的方法，對實(shí)驗(yàn)組幼鼠經(jīng)腹腔注入0.5mg/kg脂多糖，對實(shí)驗(yàn)對照組及空白對照組幼鼠經(jīng)腹腔注入等容量的生理鹽水。（2）24小時(shí)后對實(shí)驗(yàn)組及實(shí)驗(yàn)對照組幼鼠經(jīng)腹腔注入5mg/kg脂多糖，對空白對照組幼鼠經(jīng)腹腔注入等容量的生理鹽水。3、指標(biāo)檢測：（1）分別在第二次注射0h(第二次注射前)，3h，8h，，24h每組隨機(jī)選取幼鼠8只，采用眼球摘除法取幼鼠外周血，分離血清，采用酶聯(lián)免疫分析法檢測各組各時(shí)間點(diǎn)幼鼠血清晚期細(xì)胞因子高遷移率組蛋白B-1（High mobility group protein B-1，HMGB-1）的表達(dá)情況。（2）取血后在無菌操作下取幼鼠肝臟組織，并放在4%多聚甲醛固定液中保存，石蠟固定切片，采用免疫組織化學(xué)法檢測各組各時(shí)間點(diǎn)幼鼠肝臟Myd88及Tollip蛋白的表達(dá)情況，同時(shí)觀察病理改變。結(jié)果：1、幼鼠行為變化：小劑量及大劑量脂多糖刺激后幼鼠均出現(xiàn)少吃、少喝、少動(dòng)、嗜睡及毛發(fā)散亂等表現(xiàn)，大劑量脂多糖刺激后上訴癥狀尤為明顯，生理鹽水刺激后幼鼠無明顯變化。2、幼鼠血清HMGB-1表達(dá)情況：（1）對第二次注射0h、3h幼鼠血清HMGB-1表達(dá)量進(jìn)行組間比較，各組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05，P0h=0.686、P3h=0.356)。（2）對第二次注射8h、24h幼鼠血清HMGB-1表達(dá)量進(jìn)行組間比較，實(shí)驗(yàn)組幼鼠血清HMGB-1表達(dá)量明顯低于實(shí)驗(yàn)對照組，組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05），提示內(nèi)毒素耐受模型建立成功；實(shí)驗(yàn)組及實(shí)驗(yàn)對照組幼鼠血清HMGB-1表達(dá)量均明顯高于空白對照組，組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）。（3）在實(shí)驗(yàn)組及實(shí)驗(yàn)對照組中幼鼠血清HMGB-1出現(xiàn)表達(dá)的時(shí)間在第二次注射3h--8h時(shí)刻之間，在24h時(shí)刻時(shí)表達(dá)并未恢復(fù)至原有基礎(chǔ)水平。3、實(shí)驗(yàn)組幼鼠肝臟組織病理損傷明顯輕于實(shí)驗(yàn)對照組，進(jìn)一步提示內(nèi)毒素耐受模型建立成功。4、幼鼠肝臟組織Myd88表達(dá)情況：（1）對第二次注射前0h幼鼠肝臟組織Myd88表達(dá)量進(jìn)行組間比較，各組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05，P0h=0.956）。（2）對第二次注射3h、8h幼鼠肝臟組織Myd88表達(dá)量進(jìn)行組間比較，實(shí)驗(yàn)對照組幼鼠肝臟組織Myd88表達(dá)量高于實(shí)驗(yàn)組及空白對照組，組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）；實(shí)驗(yàn)組幼鼠肝臟組織Myd88表達(dá)量高于空白對照組，組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）。（3）對第二次注射24h幼鼠肝臟組織Myd88表達(dá)量進(jìn)行組間比較，實(shí)驗(yàn)對照組幼鼠肝臟組織Myd88表達(dá)量高于實(shí)驗(yàn)組及空白對照組，組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）；實(shí)驗(yàn)組幼鼠肝臟組織Myd88表達(dá)量與空白對照組比較，組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05，P24h=0.08)。（4）在實(shí)驗(yàn)對照組中幼鼠肝臟組織Myd88的表達(dá)在第二次注射3h時(shí)刻已經(jīng)出現(xiàn)，8h時(shí)刻最高，24h時(shí)刻仍然存在。5、幼鼠肝臟組織Tollip表達(dá)情況：（1）對第二次注射0h幼鼠肝臟組織Tollip表達(dá)量進(jìn)行組間比較，各組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05，P0h=0.98)。（2）對第二次注射3h、8h幼鼠肝臟組織Tollip表達(dá)量進(jìn)行組間比較，實(shí)驗(yàn)組幼鼠肝臟組織Tollip表達(dá)量高于實(shí)驗(yàn)對照組及空白對照組，組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）；實(shí)驗(yàn)對照組幼鼠肝臟組織Tollip表達(dá)量高于空白對照組，組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）。（3）對第二次注射24h幼鼠肝臟組織Tollip表達(dá)量進(jìn)行組間比較，實(shí)驗(yàn)組幼鼠肝臟組織Tollip表達(dá)量略低于實(shí)驗(yàn)對照組，組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）；實(shí)驗(yàn)組及實(shí)驗(yàn)對照組幼鼠肝臟組織Tollip表達(dá)量均明顯高于空白對照組，組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）。（4）在實(shí)驗(yàn)組及實(shí)驗(yàn)對照組中幼鼠肝臟組織Tollip的表達(dá)在第二次注射3h時(shí)刻已經(jīng)出現(xiàn)，8h時(shí)刻最高，24h時(shí)刻仍然存在。6、在第二次脂多糖注射后的8h、24h時(shí)刻，Myd88與HMGB-1的表達(dá)水平呈正相關(guān)（r8h=0.912，P8h0.05；r24h=0.907，P24h0.05）；Tollip與HMGB-1的表達(dá)水平呈負(fù)相關(guān)（r8h=－0.950，P8h0.05；r24h=－0.829，P24h0.05）。7、在第二次脂多糖注射后的3h、8h、24h時(shí)刻，Myd88與Tollip的表達(dá)水平呈正相關(guān)（r3h=0.960，P3h0.05；r8h=0.844，P8h0.05；r24h=0.895，P24h0.05）。結(jié)論：1、采用經(jīng)腹腔注入0.5mg/kg脂多糖，24小時(shí)后再次注入5mg/kg脂多糖的方法建立幼鼠內(nèi)毒素耐受模型是可行的。2、內(nèi)毒素耐受后血清晚期細(xì)胞因子HMGB-1表達(dá)減少，肝臟組織病理損傷減輕。3、TLR4/Myd88通路上正性因子Myd88表達(dá)降低，負(fù)性因子Tollip表達(dá)升高，可能是內(nèi)毒素耐受的機(jī)制之一。
【學(xué)位授予單位】：瀘州醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R720.597

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前4條

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本文編號：1161481