發(fā)布時間：2017-11-08 06:15

  本文關鍵詞：磷酸肌酸鈉對窒息缺氧幼鼠腎組織HIF-1α和VEGF表達的影響

  更多相關文章： 磷酸肌酸鈉 窒息缺氧 大鼠 腎組織 缺氧誘導因子-1a 血管內(nèi)皮生長因子

【摘要】：背景和目的 新生兒窒息(Asphyxia of newborn)是造成小兒死亡及傷殘的重要原因之一,窒息缺氧導致機體內(nèi)環(huán)境發(fā)生一系列的變化,可引起心、腦、腎等多個重要臟器產(chǎn)生不同程度的損害,發(fā)生率可高達82%。又因新生兒腎組織結(jié)構(gòu)及功能發(fā)育尚不成熟,對內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)的調(diào)節(jié)范圍狹窄,因此,極易受到窒息缺氧所導致的原發(fā)性損傷和再灌注損傷。新生兒窒息腎功能損害的觀察與研究,已經(jīng)引起國內(nèi)外很多學者和臨床醫(yī)師的廣泛關注,但至今仍缺乏分子水平深入探索。 缺氧誘導因子-1(Hypoxia inducible factor-1, HIF-1)是介導細胞缺氧適應的關鍵性轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子,其a亞基(HIF-1α)受到缺氧信號的影響,可以通過調(diào)控下游一系列靶基因的表達,參與缺氧細胞的能量代謝和氧利用障礙的發(fā)生機制,具有許多重要的生物學效應。VEGF (Vascular endothelial growth factor,VEGF)是調(diào)節(jié)血管發(fā)生的基本因子,又是HIF-1a下游重要的靶基因之一,腎臟的毛細血管網(wǎng)非常豐富,其缺氧缺血性疾病常伴隨有微血管損害,因此,推測VEGF在腎臟缺氧性疾病中可能發(fā)揮著重要作用。這些都有待我們進一步研究。 磷酸肌酸是人體內(nèi)自有的活性物質(zhì),于1927年由Eggleton P等發(fā)現(xiàn),是參與細胞能量代謝的重要物質(zhì)之一,其主要的功能是即可作為高耗能細胞ATP濃度恒定的“緩沖劑”,又可作為細胞內(nèi)的能量載體。磷酸肌酸鈉(CreatinePhosphate Sodium, PCr)是目前常用的人工合成的高效低毒的心肌保護藥,已廣泛應用于心臟多種疾病的治療中且有較好療效。而腎臟也是對缺氧缺血最敏感的器官之一,其對腎臟的缺氧缺血性疾病是否有保護作用很少有文獻報道,本實驗通過觀察PCr對窒息缺氧幼鼠腎組織形態(tài)結(jié)構(gòu)的變化及對HIF-1a和VEGF表達的影響,探討缺氧對腎臟的影響及PCr對腎臟缺氧性損傷的保護作用,為腎臟的缺氧性疾病的臨床用藥提供實驗室依據(jù)。 材料和方法 1實驗動物和分組 3-4周齡的健康SD幼鼠24只,體重70-85g,雌雄不限,隨機分為三組：即窒息缺氧+生理鹽水組(模型組)、窒息缺氧+磷酸肌酸鈉組(PCr組)和正常對照組(正常組),每組8只。其中模型組和PCr組制作為窒息缺氧模型,正常組不作窒息缺氧處理。 2藥物應用 PCr組在制作窒息缺氧模型前0.5h、窒息缺氧后即刻腹腔注射1.4mg/g的磷酸肌酸鈉,模型組在相同的時間點腹腔內(nèi)注射等量的生理鹽水,正常對照組不作任何藥物處理。 3標本采集及處理 分別于窒息缺氧后6h取各組幼鼠8只,稱重后采用腹腔注射麻醉,切取一側(cè)腎臟,將腎臟沿長軸縱向剖為兩半,一半固定于4%中性甲醛溶液中,24小時后脫水石蠟包埋,4。C冰箱保存,供病理切片和免疫組織化學染色(SP)備用。剩余腎組織于液態(tài)氮中冷凍1小時后,再置于-80。C冰箱內(nèi)保存?zhèn)溆?采用反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈式反應(reverse transcription-polymerase chain reactionanalyses, RT-PCR)檢測HIF-la和VEGF mRNA的相對表達量。 4統(tǒng)計學處理 采用SPSS17.0統(tǒng)計軟件,HIF-Ia和VEGF mRNA、HIF-la和VEGF蛋白的相對表達量分別采用單因素方差分析(One-way ANONA)方法,組間兩兩比較采用最小顯著法(least significant difference,LSD-t)檢驗,方差不齊時采用非參數(shù)統(tǒng)計,模型組HIF-la和VEGF mRNA、HIF-la和、EGF蛋白兩者表達的關聯(lián)性分析采用Pearson相關分析,P0.05為差異有統(tǒng)計學意義。 結(jié)果 1HE染色觀察,模型組和PCr組均可見腎組織的病理學改變,模型組損傷最為嚴重,PCr組較模型組相比,腎小管上皮細胞腫脹減輕,腎小球結(jié)構(gòu)基本接近正常,但與正常組相比仍可見不同程度的病理改變。 2模型組和PCr組較正常組相比腎組織的HIF-la mRNA (F=1196.805P0.001), VEGF mRNA (F=32484.734P0.001)均有明顯升高,較模型組HIF-1a mRNA (0.731±0.007)、VEGF mRNA (0.821±0.006)相比,PCr組HIF-1a mRNA (0.522±0.012)、VEGF mRNA(0.601±0.007)的表達有所降低(均為P0.001)。 3模型組和PCr組較正常組相比腎組織HIF-1a蛋白(F=90.410P0.001)和VEGF蛋白(F=79.329P0.001)的表達均明顯升高,較模型組HIF-1a蛋白(124.45±5.58)、VEGF蛋白(116.72±3.61)相比,PCr組HIF-1a蛋白(115.78±4.66)、VEGF蛋白(106.794-2.95)表達有所降低(均為P0.001)。 4模型組相關分析結(jié)果顯示,HIF-la和VEGF mRNA、HIF-la和VEGF蛋白的相對表達量均呈正相關關系(r分別為0.934和0.928,P0.01)。 結(jié)論 1幼鼠在窒息缺氧后腎組織形態(tài)結(jié)構(gòu)發(fā)生病理學改變,HIF-1a和VEGF表達明顯升高,且兩者的相對表達量呈正相關關系。提示HIF-1a和VEGF參與了腎組織的缺氧缺血的發(fā)展過程。 2外源性磷酸肌酸鈉能夠通過釋放高能磷酸鍵,合成ATP,快速補充缺氧組織所需要的能量,增加缺氧組織對氧的利用,減輕過氧化損傷,能夠減輕窒息幼鼠腎組織的病理學改變,下調(diào)HIF-1a、VEGF的表達,對窒息缺氧幼鼠的腎損傷起到保護作用。
【學位授予單位】：鄭州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R722.1

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 毛瑞明;杜中波;高衛(wèi)民;米麗;朱寶利;;大鼠急性心肌缺血后血管內(nèi)皮生長因子的表達變化[J];法醫(yī)學雜志;2012年03期

2 劉桂君;陳國江;黎燕;石艷春;;血管內(nèi)皮生長因子在腫瘤生長轉(zhuǎn)移中的作用機制研究進展[J];國際藥學研究雜志;2012年05期

3 張素芝;杜麗榮;韓宏偉;李國正;韓省華;劉效群;趙邦榮;張亦心;;反復自然流產(chǎn)患者妊娠組織中Survivin、VEGF及Stat3的表達及相關性[J];河北醫(yī)藥;2012年11期

4 桂靜;陳瑩;李永鳳;劉春艷;;磷酸肌酸鈉對缺氧幼鼠腦組織中鈣調(diào)蛋白、一氧化氮水平的影響[J];鄭州大學學報(醫(yī)學版);2012年01期

5 劉茂林;;血管內(nèi)皮生長因子及其受體與IgA腎病[J];健康研究;2012年02期

6 孫麗娜;符麗娟;李洪秀;孟慶蕓;;VEGF及CTGF在糖尿病大鼠腎臟中表達及作用的觀察[J];遼寧醫(yī)學院學報;2012年02期

7 鄒艷紅;李靜;聶磊;王禹;遲瑛嬌;趙塔娜;趙冬梅;李春玉;;血管內(nèi)皮生長因子在腎病大鼠中的表達及意義[J];黑龍江醫(yī)藥科學;2011年01期

8 李曉維;沈捷;張麗;袁浪;郭穎;黃敏;李奮;;VEGF-A基因在漢族先天性房室間隔缺損患兒中的突變分析[J];臨床兒科雜志;2012年07期

9 李曉虹;楊蒲芳;戚紅霞;陳范嶸;;血清TGF-β_1及VEGF在慢性乙肝、肝纖維化、肝硬化患者的臨床變化及其意義[J];臨床消化病雜志;2011年03期

10 王輝;林松娟;劉源;;慢性阻塞性肺疾病患者血清血管內(nèi)皮生長因子水平變化及其臨床意義[J];臨床合理用藥雜志;2012年07期

中國博士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 孫勝;缺氧誘導因子及其調(diào)節(jié)基因在化學缺氧預處理保護中的作用研究[D];第三軍醫(yī)大學;2007年

2 郭曉明;外源性磷酸肌酸對低氧大鼠心臟的保護作用[D];中國人民解放軍軍醫(yī)進修學院;2009年

中國碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前5條

1 賈帥;VEGF及其受體在慢性缺血性腎損傷早、晚期的表達研究[D];昆明醫(yī)學院;2005年

2 李蘇童;缺血后處理對缺血再灌注大鼠腎臟HIF-1α和HO-1的影響[D];第四軍醫(yī)大學;2008年

3 王亞娟;缺氧誘導因子-1α在幼鼠腎間質(zhì)損傷中的表達及意義[D];山西醫(yī)科大學;2010年

4 趙東家;來氟米特對糖尿病腎病大鼠腎臟VEGF表達的研究[D];山西醫(yī)科大學;2010年

5 陳圣鋒;模擬高原訓練及恢復方法對大鼠腎臟影響的組織學研究[D];陜西師范大學;2010年

，

本文編號：1155923