本文關(guān)鍵詞：磷酸肌酸鈉對(duì)窒息缺氧幼鼠腎組織HIF-1α和VEGF表達(dá)的影響

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【摘要】：背景和目的 新生兒窒息(Asphyxia of newborn)是造成小兒死亡及傷殘的重要原因之一,窒息缺氧導(dǎo)致機(jī)體內(nèi)環(huán)境發(fā)生一系列的變化,可引起心、腦、腎等多個(gè)重要臟器產(chǎn)生不同程度的損害,發(fā)生率可高達(dá)82%。又因新生兒腎組織結(jié)構(gòu)及功能發(fā)育尚不成熟,對(duì)內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)的調(diào)節(jié)范圍狹窄,因此,極易受到窒息缺氧所導(dǎo)致的原發(fā)性損傷和再灌注損傷。新生兒窒息腎功能損害的觀察與研究,已經(jīng)引起國(guó)內(nèi)外很多學(xué)者和臨床醫(yī)師的廣泛關(guān)注,但至今仍缺乏分子水平深入探索。 缺氧誘導(dǎo)因子-1(Hypoxia inducible factor-1, HIF-1)是介導(dǎo)細(xì)胞缺氧適應(yīng)的關(guān)鍵性轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子,其a亞基(HIF-1α)受到缺氧信號(hào)的影響,可以通過(guò)調(diào)控下游一系列靶基因的表達(dá),參與缺氧細(xì)胞的能量代謝和氧利用障礙的發(fā)生機(jī)制,具有許多重要的生物學(xué)效應(yīng)。VEGF (Vascular endothelial growth factor,VEGF)是調(diào)節(jié)血管發(fā)生的基本因子,又是HIF-1a下游重要的靶基因之一,腎臟的毛細(xì)血管網(wǎng)非常豐富,其缺氧缺血性疾病常伴隨有微血管損害,因此,推測(cè)VEGF在腎臟缺氧性疾病中可能發(fā)揮著重要作用。這些都有待我們進(jìn)一步研究。 磷酸肌酸是人體內(nèi)自有的活性物質(zhì),于1927年由Eggleton P等發(fā)現(xiàn),是參與細(xì)胞能量代謝的重要物質(zhì)之一,其主要的功能是即可作為高耗能細(xì)胞ATP濃度恒定的“緩沖劑”,又可作為細(xì)胞內(nèi)的能量載體。磷酸肌酸鈉(CreatinePhosphate Sodium, PCr)是目前常用的人工合成的高效低毒的心肌保護(hù)藥,已廣泛應(yīng)用于心臟多種疾病的治療中且有較好療效。而腎臟也是對(duì)缺氧缺血最敏感的器官之一,其對(duì)腎臟的缺氧缺血性疾病是否有保護(hù)作用很少有文獻(xiàn)報(bào)道,本實(shí)驗(yàn)通過(guò)觀察PCr對(duì)窒息缺氧幼鼠腎組織形態(tài)結(jié)構(gòu)的變化及對(duì)HIF-1a和VEGF表達(dá)的影響,探討缺氧對(duì)腎臟的影響及PCr對(duì)腎臟缺氧性損傷的保護(hù)作用,為腎臟的缺氧性疾病的臨床用藥提供實(shí)驗(yàn)室依據(jù)。 材料和方法 1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和分組 3-4周齡的健康SD幼鼠24只,體重70-85g,雌雄不限,隨機(jī)分為三組：即窒息缺氧+生理鹽水組(模型組)、窒息缺氧+磷酸肌酸鈉組(PCr組)和正常對(duì)照組(正常組),每組8只。其中模型組和PCr組制作為窒息缺氧模型,正常組不作窒息缺氧處理。 2藥物應(yīng)用 PCr組在制作窒息缺氧模型前0.5h、窒息缺氧后即刻腹腔注射1.4mg/g的磷酸肌酸鈉,模型組在相同的時(shí)間點(diǎn)腹腔內(nèi)注射等量的生理鹽水,正常對(duì)照組不作任何藥物處理。 3標(biāo)本采集及處理 分別于窒息缺氧后6h取各組幼鼠8只,稱重后采用腹腔注射麻醉,切取一側(cè)腎臟,將腎臟沿長(zhǎng)軸縱向剖為兩半,一半固定于4%中性甲醛溶液中,24小時(shí)后脫水石蠟包埋,4。C冰箱保存,供病理切片和免疫組織化學(xué)染色(SP)備用。剩余腎組織于液態(tài)氮中冷凍1小時(shí)后,再置于-80。C冰箱內(nèi)保存?zhèn)溆?采用反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(reverse transcription-polymerase chain reactionanalyses, RT-PCR)檢測(cè)HIF-la和VEGF mRNA的相對(duì)表達(dá)量。 4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件,HIF-Ia和VEGF mRNA、HIF-la和VEGF蛋白的相對(duì)表達(dá)量分別采用單因素方差分析(One-way ANONA)方法,組間兩兩比較采用最小顯著法(least significant difference,LSD-t)檢驗(yàn),方差不齊時(shí)采用非參數(shù)統(tǒng)計(jì),模型組HIF-la和VEGF mRNA、HIF-la和、EGF蛋白兩者表達(dá)的關(guān)聯(lián)性分析采用Pearson相關(guān)分析,P0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)果 1HE染色觀察,模型組和PCr組均可見(jiàn)腎組織的病理學(xué)改變,模型組損傷最為嚴(yán)重,PCr組較模型組相比,腎小管上皮細(xì)胞腫脹減輕,腎小球結(jié)構(gòu)基本接近正常,但與正常組相比仍可見(jiàn)不同程度的病理改變。 2模型組和PCr組較正常組相比腎組織的HIF-la mRNA (F=1196.805P0.001), VEGF mRNA (F=32484.734P0.001)均有明顯升高,較模型組HIF-1a mRNA (0.731±0.007)、VEGF mRNA (0.821±0.006)相比,PCr組HIF-1a mRNA (0.522±0.012)、VEGF mRNA(0.601±0.007)的表達(dá)有所降低(均為P0.001)。 3模型組和PCr組較正常組相比腎組織HIF-1a蛋白(F=90.410P0.001)和VEGF蛋白(F=79.329P0.001)的表達(dá)均明顯升高,較模型組HIF-1a蛋白(124.45±5.58)、VEGF蛋白(116.72±3.61)相比,PCr組HIF-1a蛋白(115.78±4.66)、VEGF蛋白(106.794-2.95)表達(dá)有所降低(均為P0.001)。 4模型組相關(guān)分析結(jié)果顯示,HIF-la和VEGF mRNA、HIF-la和VEGF蛋白的相對(duì)表達(dá)量均呈正相關(guān)關(guān)系(r分別為0.934和0.928,P0.01)。 結(jié)論 1幼鼠在窒息缺氧后腎組織形態(tài)結(jié)構(gòu)發(fā)生病理學(xué)改變,HIF-1a和VEGF表達(dá)明顯升高,且兩者的相對(duì)表達(dá)量呈正相關(guān)關(guān)系。提示HIF-1a和VEGF參與了腎組織的缺氧缺血的發(fā)展過(guò)程。 2外源性磷酸肌酸鈉能夠通過(guò)釋放高能磷酸鍵,合成ATP,快速補(bǔ)充缺氧組織所需要的能量,增加缺氧組織對(duì)氧的利用,減輕過(guò)氧化損傷,能夠減輕窒息幼鼠腎組織的病理學(xué)改變,下調(diào)HIF-1a、VEGF的表達(dá),對(duì)窒息缺氧幼鼠的腎損傷起到保護(hù)作用。
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R722.1

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