本文關鍵詞：熱性驚厥患兒血清硫化氫含量變化及其相關性研究

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【摘要】：研究背景 熱性驚厥(Febrile Seizures,FS)是兒童發(fā)育過程中常見的疾病,其定義目前尚未統(tǒng)一。美國國立衛(wèi)生院指出發(fā)生于3個月～5歲之間,在上感或其他感染性疾病初期,當體溫在38℃以上時突然出現(xiàn)驚厥,排除顱內(nèi)感染和其他器質(zhì)性或代謝性異常疾病,既往無無熱驚厥史可診斷為FS。我國多數(shù)學者則認為FS是指6個月～5歲間的兒童在急性發(fā)熱中發(fā)生的癲癇樣發(fā)作性疾病。1985年的國際癲癇及癲癇綜合癥分類中將FS歸為特殊類型的癲癇。該病臨床上多見于急性上呼吸道感染,中耳炎或幼兒急疹之后,是小兒時期最常見的發(fā)作性急癥之一,具有顯著的年齡依賴性和遺傳易感性。通常好發(fā)于生后6個月至6歲之間,在各類小兒驚厥中占30%,男孩稍多于女孩,5歲以下發(fā)病率是2%～5%,7歲以后者少見。中國發(fā)病率為3%-5%,美國、西歐發(fā)病率為2%～5%,日本為6%～9%,西太平洋馬亞群島為11.4%,30%～40%可能復發(fā),首次發(fā)作后FS的復發(fā)率高達1/3。FS患兒通常預后均良好,對反復驚厥發(fā)作者可造成腦損傷,遺留神經(jīng)-精神異常。目前其發(fā)病機制尚未明確,臨床上也缺乏有效的干預手段。近年來,關于FS的發(fā)病機制正處于廣泛的研究當中。 一直以來,人們對硫化氫(hudrogen sulfide,H2S)的研究僅限于它的毒性作用,直至1989年Goodwin等人相繼在大鼠、牛和人等腦組織中均發(fā)現(xiàn)含有一種相對較高濃度的內(nèi)源性H2S,且推測該物質(zhì)可能參與了哺乳動物(含人類)機體內(nèi)多個系統(tǒng)疾病的病理生理過程。20世紀90年代Abe等首次通過實驗證實了內(nèi)源性H2S作為一種神經(jīng)活性物質(zhì)存在于人體內(nèi)。之后在過去的10年內(nèi),關于H2S的生理和病理學作用,尤其是在中樞神經(jīng)系統(tǒng)和心血管系統(tǒng)方面,已經(jīng)進行了大量的研究。有資料表明內(nèi)源性H2S與阿爾茨海默病(AD)、FS、缺血再灌注腦損傷(GIRI)及Down's綜合癥等疾病存在密切的聯(lián)系。如Han Y等研究發(fā)現(xiàn)氣體信號分子H2S外源性供體NaHS可明顯減輕反復FS所造成的大鼠海馬神經(jīng)元的損傷,而CBS抑制劑羥胺(HA)則明顯加重了大鼠海馬神經(jīng)元的損傷。隨著研究的不斷深入,內(nèi)源性H2S已被視為繼一氧化氮(N0)和一氧化碳(C0)之后的另一新型氣體信號介質(zhì),在中樞神經(jīng)系統(tǒng)功能方面起著重要的調(diào)節(jié)作用,如調(diào)節(jié)突觸活動,誘發(fā)海馬長時程增強等。目前,內(nèi)源性H2S已然成為醫(yī)學領域研究的熱點,其與腦損傷的關系更是引起醫(yī)學研究者極大的關注。 神經(jīng)元特異性烯醇化酶(neuron-specific enolase,NSE)作為一種含二聚體蛋白的神經(jīng)肽,特異性的存在于神經(jīng)元和神經(jīng)內(nèi)分泌細胞胞漿中,占腦內(nèi)可溶性蛋白的1.5%,是糖酵解途徑中的關鍵酶是,也是目前較為公認的反應腦損傷及嚴重情況的特異性指標之一。腦損傷時,神經(jīng)細胞受損,導致細胞壞死溶解,胞內(nèi)NSE進入腦脊液中使腦脊液NSE濃度發(fā)生改變,同時,血腦屏障破壞,細胞通透性增加,NSE從細胞釋放至血液,血清NSE濃度也增高。根據(jù)文獻報道智利學者觀察到FS發(fā)作后1h檢測得出的腦脊液NSE濃度,與正常兒童比較無明顯差異。也有學者報道,FS發(fā)作24h內(nèi)血清和CSF中的血NSE水平均顯著高于對照組,提示驚厥發(fā)作后可導致神經(jīng)元功能損傷。 腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(BDNF)是1982年德國神經(jīng)生物學家Barde等首次從豬腦提取液中獲得的一種神經(jīng)營養(yǎng)因子,廣泛存在于中樞神經(jīng)系統(tǒng)組織中,具有重要的生物學作用。接下來的研究發(fā)現(xiàn)BDNF可促進神經(jīng)元存活、分化和生長,抵抗有害刺激,維持其正常的生理功能。目前大量研究表明BDNF在FS過程中具有重要的神經(jīng)保護作用。但目前國內(nèi)外關于BDNF在驚厥性疾病中的研究還存在其他意義,如興奮毒性。Scharfman等提出內(nèi)源性BDNF具有雙重意義,不僅具有神經(jīng)元保護作用,還可能與人類顳葉癲癇形成有關。有學者向成年大鼠鞘內(nèi)注射BDNF,3h后能在脊髓背角表面觀察到早期基因c-fos表達顯著增加,而c-fos是神經(jīng)元興奮性損傷的敏感指標。 高遷移率族蛋白1(HMGB1)廣泛存在于真核生物細胞內(nèi)的非組蛋白染色質(zhì)核蛋白。通常儲存于核內(nèi),機體感染時能通過固有免疫細胞主動分泌和壞死細胞被動釋放至胞外介導炎癥反應,是一種重要的晚期炎癥因子,參與了多種炎癥性疾病的發(fā)生發(fā)展過程。有學者從人腦癲癇組織中發(fā)現(xiàn)了高表達的HMGB1,使用HMGB1、TLR4拮抗劑能防止或延緩驚厥發(fā)生,減少癲癇的急性和慢性再發(fā),提示HMGB在癲癇中具有促進驚厥發(fā)作的作用。因此,推測出HMGB1在FS的發(fā)生過程中可能存在共同的病理學作用。也有研究發(fā)現(xiàn)HMGB1參與了腦損傷的病理生理過程,但該方面研究報道較少。IL-6是一種細胞因子,由腦內(nèi)神經(jīng)元及神經(jīng)膠質(zhì)細胞合成,具有廣泛的調(diào)節(jié)作用。對中樞神經(jīng)系統(tǒng)存在雙重作用，并在動物實驗中已經(jīng)證實。既往研究表明小鼠體內(nèi)過度表達的IL-6,能使神經(jīng)元興奮性物質(zhì)釋放增加,而相應增強小鼠驚厥易感性。其中原因可能是介導神經(jīng)元抑制作用的GABA受體活動降低,抑制作用減弱。另外,IL-6也能使發(fā)育期小鼠延緩驚厥發(fā)生,縮短驚厥持續(xù)時間,具有重要的抗驚厥作用。C反應蛋白水平、白細胞計數(shù)和降鈣素原是反映機體炎癥嚴重程度的常用實驗室指標。FS患兒發(fā)作早期通常伴有此類炎癥因子的升高。 基于以上理論,本研究采用ELISA法檢測FS后患兒血清H2S、NSE、BDNF、 HMGB1、IL-6、WBC、CRP及PCT濃度,并結合腦電圖及兒心量表,探討此類指標對FS發(fā)作后腦損傷的臨床意義,為FS腦神經(jīng)保護治療提供理論依據(jù),也為其臨床診斷、治療和預后判斷提供幫助。 目的 本實驗采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測定實驗各組血清H2S含量和血清NSE、BDNF、HMGB1、IL-6濃度,并通過臨床記錄FS患兒驚厥發(fā)作時間和驚厥發(fā)作次數(shù),結合FS患兒腦電圖及智能發(fā)育情況,分析FS各血清指標的水平變化,初步探討血清H2S、NSE、BDNF、HMGB1、IL-6、WBC、CRP及PCT水平變化在FS發(fā)生發(fā)展過程中的作用及其相關性,為評估和判斷FS早期腦損傷提供一定的理論依據(jù),也為其防治提供新的理念。 方法 選擇自2012年3月15日至2012年11月10日就診南方醫(yī)科大學珠江醫(yī)院兒科中心的76例FS患兒為FS組,其中65例及53例FS患兒為另外實驗的FS組,51例急性上呼吸道感染伴發(fā)熱的患兒為上感對照組組,同期于兒�？企w檢的43例健康兒童為正常對照組。采用酶標儀測定各組兒童血清H2S、NSE、BDNF、 HMGB1.IL-6、WBC、CRP及PCT水平。EEG檢測FS患兒腦電活動,發(fā)育量表評估患兒恢復后智能發(fā)育情況。 結果 (1)三組血清H2S、NSE水平比較FS組、上感組和正常組患兒血清H,S濃度分別為(30.30±13.15)umol/L、(43.38±11.14)umol/L、(45.60±9.98)umol/L；血清NSE濃度分別為(12.22±2.87)ng/ml、(10.93±2.66)ng/ml、(10.00±2.47)ng/m1。FS組較兩對照組血清H2S含量差異均有統(tǒng)計學意義(P0.01),較兩對照組血清NSE差異均有統(tǒng)計學意義(P0.05,P0.01),兩對照組血清H2S、NSE比較差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)。不同EEG血清H2S差異均無統(tǒng)計學意義(P0.05)。 (2)FS組血清BDNF濃度均顯著高于上感組和正常組(P0.01)；EEG異常組血清BDNF濃度均高于EEG正常組(P0.01,P0.05),且EEG發(fā)作性異常有非常顯著性。 (3)三組血清炎癥因子水平比較FS組、上感組與正常對照組血清HGB1、IL-6、WBC、CRP、PCT差異均有統(tǒng)計學意義(HMGB1:P0.01,P=0.0440.05；IL-6：P0.01,P0.01；WBC：P0.01,P0.01；CRP：P0.01,P0.01；PCT：P0.01,P0.01)。FS組與上感組血清HMGB1差異有統(tǒng)計學意義(P=0.040.05),血清IL-6差異無統(tǒng)計學意義(P=0.2190.05),血清WBC差異無統(tǒng)計學意義(P=0.4810.05)；血清CRP差異無統(tǒng)計學意義(P=0.9760.05),血清PCT差異無統(tǒng)計學意義(P=0.9760.05)。 (4)三組血清HMGB1水平比較SFS組、CFS組患兒血清HMGB1與正常組差異有統(tǒng)計學意義(P=0.010.01,P=0.020.01)FS患兒血清HMGB1與CFS組差異無統(tǒng)計學意義(P=0.4960.05)。 (5)一次病程中不同驚厥發(fā)作次數(shù)、驚厥持續(xù)時間血清H2S、NSE水平比較驚厥發(fā)作次數(shù)2次FS患兒血清H2S濃度為(31.88±12.76)umol/L,血清NSE濃度為(11.67±2.78)ng/m1。驚厥發(fā)作次數(shù)≥2次FS患兒血清H2S濃度為(25.01±13.45)umol/L,血清NSE濃度為(14.03±2.47)ng/ml。驚厥發(fā)作時間5min FS患兒血清H2S濃度為(31.82±12.97)umol/L,血清NSE濃度為(11.85±2.99)ng/m1。不同驚厥發(fā)作次數(shù)(2次和≥2次)患兒血清H2S差異無統(tǒng)計學意義(t=1.808,P=0.075),而血清NSE有顯著性差異(t=-2.955,P=0.004)。不同驚厥發(fā)作時間(5min和≥5min)患兒血清H2S、NSE差異無統(tǒng)計學意義(t=1.464,P=0.148,t=-1.629,P=0.108)。 (6)相關性分析FS組患兒驚厥發(fā)作次數(shù)與血清H2S水平呈負相關,相關系數(shù)為r=-0.269,P=0.03,與血清NSE水平呈正相關,相關系數(shù)為r=0.322,P=0.009。雖然總體上統(tǒng)計分析FS組患兒驚厥時間與血清H2S水平及血清NSE水平均無明顯相關(相關系數(shù)分別為r=-0.194,P=0.122,r=0.102,P=0.417)。但分組統(tǒng)計后發(fā)現(xiàn),驚厥發(fā)作時間5min組患兒的發(fā)作時間與血清H2S水平及血清NSE水平均無明顯相關(相關系數(shù)分別為r=0.008,P=0.957,r=-0.177,P=0.240)。而驚厥發(fā)作時間≥5min組患兒發(fā)作時間與血清H2S水平呈負相關,相關系數(shù)為r=-0.532,P=0.019,與血清NSE水平無明顯相關,相關系數(shù)為r=0.246,P=0.310。血清中H2S與NSE水平呈負相關,相關系數(shù)為r=-0.279,P=0.024。小兒發(fā)育商與血清H2S、BDNF無明顯相關(P=0.948；P=0.144)。血清HMGB1與血清H2S存在相關性(r=-0.301,P=0.029),與血清IL-6水平無明顯相關性(r=0.131,P=0.348),與WBC水平存在相關性(r=0.283,P=0.04),與CRP水平存在相關性(r=0.331,P=0.016),與血清PCT水平無明顯相關性(r=0.036,P=0.799)；血清IL-6與WBC水平無明顯相關性(r=0.196,P=0.16),與血清CRP水平存在相關性(r=0.276,P=0.046),與血清PCT無明顯相關性(r=0.131,P=0.348)。 結論 (1)內(nèi)源性H2S、NSE、BDNF、HMGB1等炎癥因子均可能參與了FS的發(fā)生發(fā)展過程,其中血清BDNF、HMGB1及IL-6可能是FS發(fā)生的重要因素； (2)FS患兒早期血清H2S含量明顯降低,并與血清NSE、驚厥發(fā)作時間、’驚厥發(fā)作次數(shù)存在相關性,表明H2S有望作為評估早期FS腦損傷的客觀指標； (3)H2S、BDNF、HMGB1等促炎細胞因子可作為抵御驚厥發(fā)作的潛在治療靶點； (4)血清H2S、BDNF與小兒智能發(fā)育指數(shù)無明顯相關性。
【關鍵詞】：熱性驚厥 H_2S BDNF 炎癥因子 初步探討
【學位授予單位】：南方醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R748
【目錄】：

• 摘要3-9
• ABSTRACT9-17
• 前言17-30
• 參考文獻25-30
• 材料與方法30-39
• 結果39-45
• 討論45-52
• 全文小結52-54
• 參考文獻54-58
• 附錄58-59
• 綜述59-67
• 參考文獻64-67
• 攻讀學位期間成果67-68
• 致謝68-70

【參考文獻】

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本文編號：1028812