本文關(guān)鍵詞：促紅細(xì)胞生成素對新生大鼠缺氧缺血性腦病保護(hù)作用的研究

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【摘要】：研究背景缺氧缺血性腦病(hypoxic-ischemic encephalopathy, HIE)是新生兒死亡和嬰幼兒神經(jīng)系統(tǒng)功能障礙的主要原因。目前對HIE急性期的治療強調(diào)完善的支持療法和積極對癥處理,挽救了大多數(shù)患兒的生命,但相應(yīng)的后遺癥如腦性癱瘓、癲癇、智力低下、學(xué)習(xí)困難、視聽障礙等發(fā)生率明顯提高,且恢復(fù)并不理想,所以探求臨床上安全、有效的治療方法是目前研究的熱點。近年來人們越來越關(guān)注細(xì)胞因子在缺氧缺血性腦病中的作用。有些細(xì)胞因子如白介素1(IL-1)、白介素6(IL-6)、白介素8(IL-8)和腫瘤壞死因子-α(TNF-α)等與HIE的腦損傷有關(guān),而有些細(xì)胞因子如轉(zhuǎn)化生長因子-p1(TGF-β1)與HIE的腦修復(fù)有關(guān)。 重組人促紅細(xì)胞生成素(recombinant human erythropoietin, rhEPO)是一種含唾液酸的酸性糖蛋白,可以促進(jìn)造血祖細(xì)胞的增殖與分化。近年來越來越多的研究顯示rhEPO可以通過多種機制發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)作用,且人們對rhEPO與IL-1、IL-6、TNF-α等在HIE中起損害作用的細(xì)胞因子的關(guān)系進(jìn)行了相關(guān)研究,而對rhEPO與TGF-β1在新生兒及嬰幼兒HIE中的關(guān)系尚未見相關(guān)報道,本實驗觀察了rhEPO對HIE的保護(hù)作用并研究了其對TGF-β1的影響。 目的選擇7日齡新生SD大鼠,通過缺氧缺血建立HIE動物模型,治療組給予腹腔注射重組人促紅細(xì)胞生成素(rhEPO),觀察缺氧缺血后以及經(jīng)rhEPO治療后大鼠腦組織的病理改變、神經(jīng)細(xì)胞凋亡情況以及后期大鼠學(xué)習(xí)記憶能力的變化,了解rhEPO的神經(jīng)保護(hù)作用,并觀察缺氧缺血后腦組織中TGF-β1的表達(dá)變化情況以及rhEPO對TGF-β1表達(dá)的影響,探討rhEPO對新生大鼠HIE保護(hù)作用的可能機制,為臨床治療缺氧缺血性腦病提供有力的理論依據(jù)。 方法7日齡新生SD大鼠220只,隨機分為假手術(shù)組(55只)、模型組(55只)、小劑量rhEPO：55只)組和大劑量rhEPO組(55只)。假手術(shù)組大鼠僅對其左側(cè)頸總動脈進(jìn)行分離,不予結(jié)扎及低氧處理；模型組、小劑量和大劑量rhEPO組大鼠均對其左側(cè)頸總動脈進(jìn)行雙重結(jié)扎,缺血后置于原母鼠籠中恢復(fù)2h,然后置于2000ml常溫常壓低氧倉內(nèi),以2L/min的速度輸入含8%氧氣和92%氮氣的混合氣體,持續(xù)2h,建立HIE的動物模型,小劑量rhEPO組在缺氧后即刻腹腔注射1000IU/Kg的rhEPO,大劑量rhEPO組在缺氧后即刻腹腔注射5000IU/Kg的rhEPO,均稀釋到0.5ml。每組大鼠在模型制備后6h、24h、72h、7d分別測量體重。每組大鼠于造模后72h各處死1只,其腦組織行TTC染色；然后每組每個時間點隨機處死6只大鼠,取其腦組織制作石蠟切片,用以進(jìn)行腦組織常規(guī)病理觀察、Tunel法檢測腦組織的細(xì)胞凋亡情況以及用免疫組織化學(xué)方法檢測腦組織TGF-β1蛋白的表達(dá)變化；每組每個時間點再各隨機處死6只大鼠,取其腦組織的左側(cè)皮層及海馬置于液氮中保存?zhèn)溆?用Western-blot方法檢測缺氧后大腦皮層和海馬的TGF-β1蛋白的表達(dá)情況；最后對每組6只28天大鼠,進(jìn)行簡化Morris水迷宮測試觀察其學(xué)習(xí)記憶能力。SPSS16.0進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析,P0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。 結(jié)果1.模型組、小劑量rhEPO及大劑量rhEPO組大鼠在缺氧過程中出現(xiàn)了行為異常,假手術(shù)組大鼠無行為改變；腦組織TTC染色顯示,模型組、小劑量及大劑量rhEPO組大鼠損傷側(cè)腦組織呈現(xiàn)白色,為腦缺氧缺血梗死表現(xiàn),假手術(shù)組腦組織無梗死表現(xiàn)；與假手術(shù)組比較,模型組、小劑量及大劑量rhEPO組大鼠體重在造模后24h、72h、7d增長較慢(P0.05),各時間點腦組織細(xì)胞凋亡數(shù)目百分比均明顯偏高(P0.05),損傷側(cè)腦組織病理改變嚴(yán)重,水迷宮測試平均逃逸潛伏期均延長(P0.05),差異均有統(tǒng)計學(xué)意義。 2.大劑量與小劑量rhEPO治療組大鼠各時間點的體重較模型組同時間點體重增長快(P0.05),腦組織細(xì)胞凋亡數(shù)目百分比較模型組明顯減低(P0.05),腦組織病理改變較模型組改變輕,大劑量rhEPO組大鼠水迷宮測試平均逃逸潛伏期較模型組明顯縮短(P0.05),差異均有統(tǒng)計學(xué)意義,小劑量rhEPO組平均逃逸潛伏期較模型組無明顯變化(P0.05),差異無統(tǒng)計學(xué)意義；大劑量rhEPO治療組大鼠與小劑量rhEPO治療組大鼠比較,各時間點體重增長較快(P0.05),腦組織細(xì)胞凋亡數(shù)目百分比較低(P0.05),腦組織病理改變較輕,平均逃逸潛伏時間明顯縮短(P0.05),差異均有統(tǒng)計學(xué)意義。 3.免疫組織化學(xué)染色顯示TGF-β1主要在腦缺氧缺血損傷側(cè)的皮層和海馬表達(dá),主要表達(dá)于缺血半暗帶的神經(jīng)元、膠質(zhì)細(xì)胞及血管內(nèi)皮細(xì)胞的胞漿,免疫組織化學(xué)與Western-blot半定量分析顯示假手術(shù)組僅有微量表達(dá),各時間點變化無統(tǒng)計學(xué)差異,模型組、小劑量及大劑量rhEPO組TGF-β1陽性表達(dá)于6h出現(xiàn),24h表達(dá)增多,胞漿著色加深,顆粒增粗,72h表達(dá)達(dá)到峰值,7d時陽性細(xì)胞表達(dá)較前減少,整個表達(dá)過程呈先上升后下降趨勢,高峰在72h,與假手術(shù)組同時間點相比(P0.05)差異有統(tǒng)計學(xué)意義；大劑量及小劑量rhEPO治療組各時間點TGF-β1蛋白表達(dá)較模型組明顯增高(P0.05),大劑量rhEPO組各時間點TGF-β1蛋白表達(dá)較小劑量rhEPO治療組高(P0.05),差異均有統(tǒng)計學(xué)意義。 結(jié)論1. rhEPO有一定的神經(jīng)保護(hù)作用,且大劑量rhEPO較小劑量rhEPO具有更好的神經(jīng)保護(hù)作用； 2. rhEPO可以上調(diào)缺氧缺血后腦組織TGF-β1的表達(dá),rhEPO上調(diào)TGF-β1的表達(dá)可能是其神經(jīng)保護(hù)的作用機制之一。
【關(guān)鍵詞】：缺氧缺血 促紅細(xì)胞生成素 轉(zhuǎn)化生長因子-β1 新生大鼠 細(xì)胞凋亡
【學(xué)位授予單位】：新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R722.1
【目錄】：

• 目錄3-4
• 中文摘要4-7
• Abstract7-12
• 前言12-14
• 1 材料與方法14-26
• 1.1 材料14-18
• 1.2 實驗方法18-25
• 1.3 統(tǒng)計分析25-26
• 2 結(jié)果26-37
• 2.1 行為學(xué)改變及體重變化26-27
• 2.2 腦組織大體形態(tài)及病理形態(tài)學(xué)改變27-29
• 2.3 Tunel法檢測大鼠腦組織凋亡陽性細(xì)胞百分比29-31
• 2.4 水迷宮測試結(jié)果31-32
• 2.5 免疫組化法檢測腦組織中TGF-β1蛋白的表達(dá)32-35
• 2.6 Western-blot檢測腦組織TGF-β1蛋白的表達(dá)35-37
• 3 討論37-46
• 3.1 新生大鼠缺氧缺血性腦病模型的建立37-38
• 3.2 rhEPO的神經(jīng)保護(hù)作用38-41
• 3.3 缺氧缺血后腦組織TGF-β1的表達(dá)及rhEPO對TGF-β1的影響41-46
• 4 結(jié)論46-47
• 附圖47-57
• 參考文獻(xiàn)57-62
• 綜述62-81
• 參考文獻(xiàn)73-81
• 主要中英文縮寫詞一覽表81-82
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表文章情況82-83
• 致謝83-84
• 個人簡歷84

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前7條

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7 吳婉芳;;新生兒缺氧缺血性腦病動物實驗研究[J];中國實用兒科雜志;1995年02期

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 賈強;促紅細(xì)胞生成素對創(chuàng)傷性腦損傷神經(jīng)保護(hù)的實驗研究[D];天津醫(yī)科大學(xué);2009年

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本文編號：1028292