本文關(guān)鍵詞：籽鵝Clock基因的克隆及其在不同繁殖階段的組織表達(dá)研究

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【摘要】：動物機(jī)體內(nèi)各種生理活動都具有由生物鐘調(diào)節(jié)的內(nèi)源性節(jié)律變化。生物鐘中樞位于SCN,發(fā)出信息控制全身的節(jié)律活動;而在全身各處組織細(xì)胞內(nèi)也存在著外周生物鐘,調(diào)控著細(xì)胞內(nèi)各種基因、蛋白的周期性變化,受到神經(jīng)、體液及其它信號分子等內(nèi)環(huán)境的調(diào)節(jié)。Clock基因處于動物生物鐘系統(tǒng)的核心地位,直接或間接地調(diào)節(jié)若干鐘控基因。鵝是典型的季節(jié)性繁殖家禽,以年為周期,遵循休產(chǎn)期-產(chǎn)蛋前期-產(chǎn)蛋高峰期-產(chǎn)蛋末期的繁殖節(jié)律,因此Clock基因?qū)Z的繁殖節(jié)律具有重要的調(diào)控作用。為研究Clock基因在鵝繁殖過程中的功能,首先克隆了籽鵝Clock基因;其次為探索籽鵝繁殖周期中不同繁殖階段下丘腦和卵巢中Clock對籽鵝繁殖節(jié)律的影響,選取休產(chǎn)期(2015年1月7日)、產(chǎn)蛋前期(2015年3月28日)、產(chǎn)蛋高峰期(2015年4月27日)、產(chǎn)蛋末期(2015年6月30日)的成年健康籽鵝各6只,采集下丘腦和卵巢組織樣品用于抽提總RNA,經(jīng)反轉(zhuǎn)錄后進(jìn)行實(shí)時熒光定量PCR�？寺～@得了Clock基因的全部CDS區(qū)序列,為2 574 bp,共編碼857個氨基酸,與鴨、火雞、雞、斑胸草雀、馬、牛、人、駱駝、鼠和豬的同源性分別為98.2%、96.4%、96.3%、95.6%、87.7%、87.6%、87.6%、87.1%、86.3%和83.9%。將克隆得到的核苷酸序列翻譯成氨基酸序列,經(jīng)軟件分析證實(shí)CLOCK蛋白屬于bHLH-PAS轉(zhuǎn)錄因子家族,存在三個功能域,分別是bHLH結(jié)構(gòu)域、PAS結(jié)構(gòu)域和位于C端的谷氨酰胺富含域。Clock基因在籽鵝不同繁殖階段下丘腦和卵巢中均有表達(dá),下丘腦和卵巢中Clock mRNA表達(dá)水平具有波動性,呈現(xiàn)規(guī)律性變化。從1月初的休產(chǎn)期到3月初產(chǎn)蛋前期再到4月末的產(chǎn)蛋高峰期,Clock基因在下丘腦和卵巢組織中表達(dá)水平由低到高,呈現(xiàn)逐漸提高的趨勢,而到產(chǎn)蛋末期卻快速下降。下丘腦中Clock基因在產(chǎn)蛋高峰期時的表達(dá)水平(0.02454±0.01172)顯著(P0.05)高于產(chǎn)蛋末期的表達(dá)水平(0.00205±0.00061),但與休產(chǎn)期的表達(dá)水平(0.01104±0.00442)和產(chǎn)蛋前期的表達(dá)水平(0.01223±0.00462)無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。在卵巢排卵節(jié)律最快的產(chǎn)蛋高峰期,卵巢組織中Clock基因的表達(dá)水平(0.01990±0.00302)極顯著(P0.01)高于休產(chǎn)期的表達(dá)水平(0.00416±0.00098)、產(chǎn)蛋前期的表達(dá)水平(0.00768±0.00325)和產(chǎn)蛋末期的表達(dá)水平(0.00559±0.00237)。Clock基因在下丘腦和卵巢組織中表達(dá)水平的高低同卵巢排卵節(jié)律的快慢變化保持一致。這一研究結(jié)果可為闡述Clock基因調(diào)控籽鵝繁殖節(jié)律的分子機(jī)制提供理論參考。
【關(guān)鍵詞】：籽鵝 Clock基因 繁殖節(jié)律 實(shí)時熒光定量PCR
【學(xué)位授予單位】：黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：S835
【目錄】：

• 摘要4-6
• abstract6-11
• 第一章 文獻(xiàn)綜述11-19
• 1.1 我國鵝的生產(chǎn)現(xiàn)狀及其繁殖特點(diǎn)11-14
• 1.1.1 籽鵝的生產(chǎn)性能11-12
• 1.1.2 籽鵝的繁殖特點(diǎn)12-13
• 1.1.3 鵝的基因組生物信息學(xué)發(fā)展情況13-14
• 1.2 Clock基因結(jié)構(gòu)及其表達(dá)分析的研究進(jìn)展14-16
• 1.2.1 Clock基因的結(jié)構(gòu)14-15
• 1.2.2 Clock基因的表達(dá)調(diào)控15
• 1.2.3 Clock基因的功能及其參與的信號調(diào)控15-16
• 1.3 實(shí)時熒光定量PCR16-17
• 1.3.1 實(shí)時熒光定量PCR的原理17
• 1.3.2 SYBR Green Ⅰ 法和TaqMan探針法17
• 1.4 研究目的和意義17-19
• 第二章 Clock基因的克隆19-39
• 2.1 材料與方法19-26
• 2.1.1 材料19-20
• 2.1.2 方法20-26
• 2.2 結(jié)果與分析26-36
• 2.2.1 總RNA的提取26-27
• 2.2.2 Clock基因電泳27
• 2.2.3 菌液鑒定27-28
• 2.2.4 測序結(jié)果28-32
• 2.2.5 生物信息學(xué)分析32-36
• 2.3 討論36-39
• 第三章 籽鵝不同繁殖階段Clock及繁殖調(diào)控相關(guān)基因的表達(dá)研究39-51
• 3.1 材料與方法39-42
• 3.1.1 材料39
• 3.1.2 方法39-42
• 3.2 結(jié)果42-49
• 3.2.1 總RNA的提取42
• 3.2.2 目的及內(nèi)參基因的PCR擴(kuò)增42-43
• 3.2.3 不同時期籽鵝Clock、VIP、GnRH、LHR、FSHR和PRL基因表達(dá)情況43-49
• 3.3 討論49-51
• 第四章 結(jié)論51-53
• 參考文獻(xiàn)53-61
• 致謝61-63
• 作者簡歷63

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：695541