隨著牛人工授精技術(shù)的廣泛推廣,種公牛對奶牛群體遺傳進展貢獻達70%以上,使得高質(zhì)量的精液品質(zhì)與經(jīng)濟效益直接相關(guān)。正常的精子鞭毛對于精子運動和受精能力必不可少,它涉及到多個具有細胞時空特異性的基因協(xié)同表達。因此,鑒定新生公牛與成年公牛睪丸中特異表達的基因及其分子調(diào)控機理對于闡明睪丸發(fā)育及精子發(fā)生的機理至關(guān)重要。已有研究表明,SPEF2(Sperm flagella 2.)基因與精子鞭毛的正常發(fā)育和男性生殖力密切相關(guān)。本試驗通過研究SPEF2基因在中國荷斯坦公牛睪丸、附睪和精子中表達,功能性SNPs的鑒定及啟動子區(qū)甲基化水平分析,以增加對SPEF2基因表達調(diào)控機理及其與公牛精液品質(zhì)的關(guān)系的了解,豐富對公牛高繁殖性狀形成的分子機理的認識。一中國荷斯坦公牛SPEF2基因可變剪接體鑒定利用RT-PCR、克隆測序在公牛睪丸組織中檢測到4種新的SPEF2可變剪接體,分別命名為SPEF2-SV1、SPEF2、SV2、SPEF2-SV3和SPEF2-SV4。Western blot技術(shù)檢測到SPEF2蛋白在新生公牛和成年公牛心、肝、脾、肺、腎和睪丸組織的表達。IHC揭示了SPEF2蛋白在睪丸的初級精母細...

【文章頁數(shù)】：90 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
英文縮寫
第一部分 文獻綜述
    第一章 中國荷斯坦公牛精液品質(zhì)研究現(xiàn)狀
        1 研究種公牛高繁殖性狀形成分子機理的重要性
        2 種公牛精液品質(zhì)相關(guān)指標
        3 影響種公牛精液品質(zhì)的因素
        4 公牛育種中候選基因法的應(yīng)用
        5 SPEF2基因研究進展
    第二章 基因選擇性剪接和表觀遺傳修飾在雄性繁殖中的作用
        1 可變剪接
            1.1 可變剪接的常見模式
            1.2 可變剪接的調(diào)控
            1.3 可變剪接與雄性繁殖
        2 表觀遺傳修飾
            2.1 表觀遺傳學(xué)
            2.2 基因表達調(diào)控的表觀遺傳機制
            2.3 生殖細胞發(fā)育過程中的表觀遺傳調(diào)控
            2.4 DNA甲基化與雄性不育
        3 研究目的及意義
    參考文獻
第二部分 實驗研究
    第一章 中國荷斯坦公牛SPEF2基因可變剪接體分析
        1 材料與方法
            1.1 試驗材料
            1.2 試驗方法
        2 結(jié)果與分析
            2.1 公牛各組織總RNA提取
            2.2 牛SPEF2基因編碼區(qū)克隆及可變剪切體的鑒定
            2.3 牛SPEF2基因在公牛組織及精子中的表達分析
            2.4 牛SPEF2基因可變剪接體生物信息學(xué)分析
            2.5 牛SPEF2基因蛋白表達及定位
            2.6 牛SPEF2-SV1轉(zhuǎn)錄本在精子中的相對表達
        3 討論
        4 小結(jié)
    第二章 與SPEF2基因可變剪接體相關(guān)的SNPs鑒定
        1 材料與方法
            1.1 試驗材料
            1.2 試驗方法
        2 結(jié)果與分析
            2.1 功能性SNP的鑒定
            2.2 SNPs與可變剪接體的關(guān)系
            2.3 牛SPEF2基因SNPs分型及遺傳分析
            2.4 牛SPEF2基因SNPs與公牛精液品質(zhì)的相關(guān)性分析
        3 討論
            3.1 F-SNPs與可變剪接的關(guān)系
            3.2 牛SPEF2基因多態(tài)性與公牛精液品質(zhì)相關(guān)性
        4 小結(jié)
    第三章 中國荷斯坦公牛SPEF2基因啟動子區(qū)甲基化研究
        1 材料與方法
            1.1 試驗材料
            1.2 試驗方法
        2 結(jié)果與分析
            2.1 牛SPEF2基因啟動子生物信息學(xué)分析
            2.2 牛SPEF2基因5’側(cè)翼區(qū)啟動子克隆分析
            2.3 啟動子真核表達載體的構(gòu)建
            2.4 牛SPEF2基因啟動子活性分析
            2.5 牛SPEF2基因5’側(cè)翼區(qū)啟動子區(qū)甲基化分析
        3 討論
            3.1 啟動子活性與甲基化水平分析
            3.2 公牛精液中SPEF2基因5’側(cè)翼區(qū)啟動子低甲基化狀態(tài)與精液品質(zhì)的相關(guān)性
        4 小結(jié)
    參考文獻
全文結(jié)論
全文創(chuàng)新點
致謝
攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的論文
附錄



本文編號：3913946