卵母細(xì)胞的體外成熟(in vitro Maturation, IVM)技術(shù)和胚胎體外培養(yǎng)(in vitro Culture, IVC)是生殖生物學(xué)中的關(guān)鍵技術(shù),在畜牧業(yè)生產(chǎn)中有廣泛的應(yīng)用。為了提高牛卵母細(xì)胞體外成熟質(zhì)量以及提高早期胚胎發(fā)育的質(zhì)量,本論文研究了減數(shù)分裂抑制劑C型鈉肽(C-type natriuretic peptide, CNP)預(yù)處理牛卵母細(xì)胞后對(duì)卵母細(xì)胞的成熟質(zhì)量的影響,同時(shí)研究了不同氧氣濃度對(duì)胚胎細(xì)胞凋亡的影響以及父源與母源性印記基因在牛早期胚胎體外發(fā)育過(guò)程中的差異性表達(dá)。 本研究得到以下幾點(diǎn)結(jié)論： 1、以常規(guī)的牛卵母細(xì)胞體外成熟24h為對(duì)照,研究了CNP預(yù)處理牛卵母細(xì)胞6h,再進(jìn)行成熟培養(yǎng)28h后的成熟情況。發(fā)現(xiàn)經(jīng)CNP預(yù)處理組獲得的成熟卵母細(xì)胞,從線粒體分布、線粒體DNA拷貝數(shù)水平以及受精后胚胎發(fā)育成囊胚的質(zhì)量均優(yōu)于常規(guī)成熟的卵母細(xì)胞,表明C型鈉鈦預(yù)處理可以有效改善牛卵母細(xì)胞體外成熟的質(zhì)量。 2、分別檢測(cè)了常規(guī)方法成熟卵母細(xì)胞和CNP預(yù)處理組的成熟卵母細(xì)胞的ROS水平和GSH濃度,結(jié)果顯示利用C-型鈉肽對(duì)牛卵母細(xì)胞預(yù)處理6h然后體外成熟28h會(huì)導(dǎo)致牛卵母細(xì)胞內(nèi)R...

【文章頁(yè)數(shù)】：107 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
插圖及附表清單
縮略語(yǔ)表
1 引言
    1.1 卵母細(xì)胞成熟
        1.1.1 卵子發(fā)生
        1.1.2 牛卵母細(xì)胞的體外成熟
        1.1.3 卵母細(xì)胞體外成熟的研究進(jìn)展
    1.2 CNP對(duì)家畜繁殖的作用機(jī)制
        1.2.1 C-型鈉肽
        1.2.2 CNP與動(dòng)物生殖
        1.2.3 CNP作用機(jī)制
    1.3 卵母細(xì)胞中和胚胎中的線粒體
        1.3.1 卵母細(xì)胞和胚胎中線粒體的產(chǎn)生及分布
        1.3.2 線粒體在卵母細(xì)胞中分布模式的研究
        1.3.3 卵細(xì)胞和胚胎中線粒體與ATP的關(guān)系
        1.3.4 卵母細(xì)胞和胚胎中線粒體與氧化還原代謝的關(guān)系
        1.3.5 線粒體活性對(duì)卵母細(xì)胞發(fā)育成熟和胚胎發(fā)育的重要性
    1.4 哺乳動(dòng)物卵母細(xì)胞中的mtDNA
        1.4.1 卵母細(xì)胞中線粒體DNA拷貝數(shù)的研究
        1.4.2 線粒體DNA拷貝數(shù)與ATP
    1.5 哺乳動(dòng)物基因組印記的研究進(jìn)展
        1.5.1 基因組印記的發(fā)現(xiàn)
        1.5.2 基因組印記的特點(diǎn)
            1.5.2.1 父系和母系基因組DNA不同步復(fù)制
            1.5.2.2 印記基因在染色體特定區(qū)域聚集
            1.5.2.3 印記基因遺傳印記具有組織特異性
            1.5.2.4 印記基因轉(zhuǎn)錄和翻譯方式不同
        1.5.3 基因組印記的印記機(jī)制
        1.5.4 印記基因的表達(dá)調(diào)控
        1.5.5 基因組印記與胚胎發(fā)育的關(guān)系
    1.6 早期胚胎細(xì)胞凋亡
        1.6.1 胚胎生產(chǎn)與細(xì)胞凋亡
        1.6.2 胚胎細(xì)胞的凋亡與胚胎發(fā)育
        1.6.3 凋亡的途徑
        1.6.4 胚胎細(xì)胞凋亡的影響因素
            1.6.4.1 精子質(zhì)量對(duì)胚胎細(xì)胞凋亡的影響
            1.6.4.2 卵母細(xì)胞質(zhì)量對(duì)胚胎細(xì)胞凋亡的影響
            1.6.4.3 培養(yǎng)環(huán)境對(duì)胚胎細(xì)胞凋亡的影響
    1.7 影響胚胎發(fā)育的因素
    1.8 本研究的目的、意義及主要研究?jī)?nèi)容
        1.8.1 研究目的和意義
        1.8.2 研究的主要研究?jī)?nèi)容及技術(shù)路線
            1.8.2.1 研究?jī)?nèi)容
            1.8.2.2 技術(shù)路線
2 C型鈉肽處理對(duì)牛體外成熟卵母細(xì)胞線粒體分布的影響
    2.1 材料
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.2 主要試劑
        2.1.3 主要儀器
        2.1.4 主要溶液配制
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 卵母細(xì)胞的采集
        2.2.2 CNP對(duì)牛卵母細(xì)胞處理及體外成熟培養(yǎng)
        2.2.3 牛卵母細(xì)胞的體外受精及體外培養(yǎng)
        2.2.4 牛卵母細(xì)胞線粒體染色
        2.2.5 卵母細(xì)胞核染色及囊胚計(jì)數(shù)
    2.3 結(jié)果與分析
        2.3.1 體外受精胚胎質(zhì)量及囊胚計(jì)數(shù)
        2.3.2 線粒體分布
    2.4 討論
    2.5 結(jié)論
3 C型鈉肽處理對(duì)牛體外成熟卵母細(xì)胞mtDNA的影響
    3.1 材料與方法
        3.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.2 主要試劑
        3.1.3 主要儀器
        3.1.4 主要溶液配制
    3.2 實(shí)驗(yàn)步驟
        3.2.1 卵母細(xì)胞的采集
        3.2.2 C型鈉肽預(yù)處理及卵母細(xì)胞的體外成熟
        3.2.3 牛卵母細(xì)胞的體外受精及體外培養(yǎng)
        3.2.4 線粒體DNA拷貝數(shù)檢測(cè)
        3.2.5 標(biāo)準(zhǔn)品的制備
            3.2.5.1 組織基因組DNA的提取
            3.2.5.2 目的基因的獲得
            3.2.5.3 連接質(zhì)粒
            3.2.5.4 卵母細(xì)胞DNA的提取
            3.2.5.5 絕對(duì)熒光定量PCR檢測(cè)mtDNA拷貝數(shù)
    3.3 結(jié)果與分析
        3.3.1 體外受精胚胎質(zhì)量及囊胚計(jì)數(shù)
        3.3.2 卵母細(xì)胞的拷貝數(shù)檢測(cè)
    3.4 討論
    3.5 結(jié)論
4 C型鈉肽處理對(duì)牛體外成熟卵母細(xì)胞ROS-GSH水平的影響
    4.1 材料與方法
        4.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
            4.1.1.1 主要試劑
            4.1.1.2 主要儀器
            4.1.1.3 主要溶液配制
    4.2 實(shí)驗(yàn)方法
        4.2.1 卵母細(xì)胞的采集
        4.2.2 C型鈉肽預(yù)處理及卵母細(xì)胞的體外成熟
        4.2.3 牛卵母細(xì)胞的體外受精及體外培養(yǎng)
        4.2.4 卵母細(xì)胞核染色及囊胚計(jì)數(shù)
        4.2.5 牛卵母細(xì)胞ROS-GSH水平檢測(cè)
            4.2.5.1 ROS水平檢測(cè)
            4.2.5.2 GSH水平檢測(cè)
    4.3 結(jié)果與分析
        4.3.1 體外受精胚胎質(zhì)量及囊胚計(jì)數(shù)
        4.3.2 C型鈉肽處理對(duì)牛體外成熟卵母細(xì)胞ROS水平的影響
        4.3.3 C型鈉肽處理對(duì)牛體外成熟卵母細(xì)胞GSH含量的影響
    4.4 討論
    4.5 結(jié)論
5 不同氧氣濃度對(duì)牛體外受精胚胎細(xì)胞凋亡的影響
    5.1 材料
        5.1.1 主要試劑
        5.1.2 主要儀器
        5.1.3 主要溶液配制
    5.2 實(shí)驗(yàn)方法
        5.2.1 卵母細(xì)胞的采集
        5.2.2 卵母細(xì)胞體外成熟
        5.2.3 體外受精
        5.2.4 凋亡檢測(cè)
        5.2.5 凋亡基因表達(dá)量的檢測(cè)
    5.3 結(jié)果與分析
        5.3.1 不同濃度O₂對(duì)牛卵母細(xì)胞成熟的影響
        5.3.2 Mcl-1在牛體外受精胚胎中的表達(dá)
        5.3.3 Bad在牛體外受精胚胎中的表達(dá)
        5.3.4 Bak在牛體外受精胚胎中的表達(dá)
        5.3.5 Bik在牛體外受精胚胎中的表達(dá)
        5.3.6 Caspase-3在牛體外受精胚胎中的表達(dá)
    5.4 討論
    5.5 結(jié)論
6 印記基因在牛早期胚胎中的表達(dá)
    6.1 實(shí)驗(yàn)材料及試劑
    6.2 實(shí)驗(yàn)方法
        6.2.1 卵母細(xì)胞的采集
        6.2.2 卵母細(xì)胞的孤雌激活與重構(gòu)胚的培養(yǎng)
        6.2.3 體外受精及受精胚胎的收集
        6.2.4 印記基因表達(dá)量的檢測(cè)
    6.3 結(jié)果與分析
        6.3.1 總RNA提取與克隆測(cè)序
        6.3.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線結(jié)果
        6.3.3 各基因熒光定量PCR結(jié)果
    6.4 討論
    6.5 結(jié)論
7 全文總體結(jié)論及創(chuàng)新點(diǎn)
    7.1 結(jié)論
    7.2 創(chuàng)新點(diǎn)
致謝
參考文獻(xiàn)
作者簡(jiǎn)介



本文編號(hào)：3829144