產(chǎn)肉品質(zhì)一直是我國家畜生產(chǎn)的重要經(jīng)濟(jì)指標(biāo),而肌纖維作為構(gòu)成肌肉的基本單位與肉品質(zhì)有著密切的聯(lián)系。肌纖維是由單核肌細(xì)胞向多核肌細(xì)胞融合最終形成的,因此研究肌細(xì)胞分子發(fā)育機(jī)制對(duì)于改善肌肉品質(zhì)有重要意義。繼發(fā)現(xiàn)microRNA參與多種調(diào)節(jié)機(jī)制后,另一種新型RNA-長鏈非編碼RNA （LncRNA）開始進(jìn)入人們視角,研究表明,它的調(diào)控機(jī)制比microRNA更加多樣和復(fù)雜,參與的調(diào)控范圍也更加廣泛。在整個(gè)基因組中長鏈非編碼RNA （LncRNA）大量存在,編碼蛋白的基因只占很少的一部分,這也間接說明大量的LncRNA是以非編碼的形式發(fā)揮對(duì)編碼蛋白基因的調(diào)控。目前,針對(duì)LncRNA-Meg3（maternally expressed3）的研究主要集中在腫瘤中,研究表明,該基因表達(dá)量的增加能有效抑制癌細(xì)胞增殖,但Meg3基因?qū)〖?xì)胞的影響還沒有相關(guān)報(bào)道。雖然對(duì)LncRNA的研究日益增多,但是相關(guān)的機(jī)制仍不是很清楚,因此,研究LncRNA具體的功能機(jī)制就顯得尤為重要。本文采用注射蛇毒的方法構(gòu)建肌肉損傷模型,通過組織切片和real time PCR對(duì)肌肉的修復(fù)過程進(jìn)行分析。由于轉(zhuǎn)錄本數(shù)量過多,所以針對(duì)不... 

【文章來源】：中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京市

【文章頁數(shù)】：65 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略表
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 骨骼肌生長發(fā)育的研究現(xiàn)狀
        1.1.1 骨骼肌生長發(fā)育概述
        1.1.2 參與調(diào)控肌肉發(fā)育的重要基因
    1.2 IncRNA的簡介
        1.2.1 LncRNA概述
        1.2.2 LncRNA生物學(xué)功能
            1.2.2.1 LncRNA參與染色體重塑
            1.2.2.2 LncRNA參與轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)
        1.2.3 LncRNA與疾病
            1.2.3.1 與腫瘤相關(guān)的LncRNA
            1.2.3.2 與神經(jīng)系統(tǒng)疾病相關(guān)的LncRNA
    1.3 LncRNA-Meg3的簡介
        1.3.1 LncRNA-Meg3的概述
        1.3.2 LncRNA-Meg3的研究進(jìn)展
    1.4 非編碼RNA在肌肉發(fā)育中的研究進(jìn)展
    1.5 本研究的技術(shù)路線和目的、意義
        1.5.1 本實(shí)驗(yàn)的技術(shù)路線
        1.5.2 研究目的與意義
第二章 小鼠肌肉損傷與肌肉重建的分析
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及樣品
        2.1.2 主要儀器和設(shè)備
        2.1.3 主要試劑耗材
        2.1.4 所用引物序列
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 樣品準(zhǔn)備及采集
        2.2.2 HE染色石蠟切片制作
        2.2.3 組織RNA提取、純化及反轉(zhuǎn)錄
        2.2.4 熒光定量PCR
    2.3 結(jié)果與分析
        2.3.1 小鼠肌肉損傷切片結(jié)果分析
        2.3.2 定量結(jié)果分析
    2.4 討論
第三章 LncRNA-Meg3的鑒定與分子功能的分析
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.1 實(shí)驗(yàn)樣品
        3.1.2 主要儀器和設(shè)備
        3.1.3 主要試劑和耗材
        3.1.4 所用引物序列
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 樣品準(zhǔn)備
        3.2.2 核心轉(zhuǎn)錄本篩選確定
        3.2.3 過表達(dá)載體構(gòu)建
        3.2.4 敲低片段設(shè)計(jì)
        3.2.5 細(xì)胞轉(zhuǎn)染
    3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    3.4 討論
第四章 LncRNA-Meg3在肌肉發(fā)育中功能初步分析
    4.1 實(shí)驗(yàn)材料
        4.1.1 細(xì)胞樣品準(zhǔn)備
        4.1.2 主要儀器和設(shè)備
        4.1.3 主要試劑和耗材
        4.1.4 所用引物序列
    4.2 實(shí)驗(yàn)方法
        4.2.1 細(xì)胞樣品培養(yǎng)
        4.2.2 目的片段準(zhǔn)備
        4.2.3 體外轉(zhuǎn)錄
        4.2.4 FISH原位雜交
        4.2.5 Pulldown調(diào)取相關(guān)蛋白
        4.2.6 Pulldown調(diào)取相關(guān)蛋白
    4.3 結(jié)果與分析
    4.4 討論
第五章 小結(jié)
    5.1 本研究的主要結(jié)論
    5.2 下一步研究計(jì)劃
參考文獻(xiàn)
致謝
作者簡歷



本文編號(hào)：3634839