本研究旨在基于對細菌次級代謝產(chǎn)物的篩選,尋找新型非核糖體肽類抗菌物質(zhì)。通過對煙臺沿海地區(qū)的土壤、海水及近海常見海洋生物中的細菌進行培養(yǎng),分離純化得到細菌的單克隆,以大腸桿菌（E.coli） ATCC 25922和金黃色葡萄球菌ATCC 29213為指示菌進行初步篩選,以耐多黏菌素和碳青霉烯E.coli B2 (bla_NDM-5+mcr-1)和耐甲氧西林金黃色葡萄球菌（MRSA） T144作為指示菌對有活性的細菌進行二次篩選。通過提取基因組進行PCR擴增產(chǎn)物測序比對,確定活性菌種屬。采用有機萃取法對細菌的次級代謝產(chǎn)物進行萃取,通過凝膠層析和制備液相色譜進行純化,利用分析型液相色譜進行純度檢測,進—步利用質(zhì)譜對純化后的抗菌活性物質(zhì)進行結構鑒定。測序結果表明,活性菌屬于解淀粉酶芽孢桿菌種,將其命名為解淀粉酶芽孢桿菌9-14（活性菌9-14）。抑菌試驗結果表明,活性菌9-14的代謝產(chǎn)物對金黃色葡萄球菌ATCC 29213、MRSA T144、E.coli ATCC 25922和E.coli B2均具有高效抑制作用�；钚跃�9-14代謝產(chǎn)物是由氨基酸鏈組成的環(huán)狀脂肽,屬于伊枯... 

【文章來源】：中國畜牧獸醫(yī). 2020,47(12)北大核心

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【部分圖文】：

16S rRNA PCR擴增電泳圖

采用分光光度法測定波長為600 nm時活性菌的D值,繪制其生長曲線,確定最佳產(chǎn)抗菌物質(zhì)的時間。由圖2可知,活性菌9-14在1～3 h內(nèi)生長速度較慢,處于生長遲緩期,4～10 h生長速度較快,細菌大量繁殖,處于生長對數(shù)期,11～20 h內(nèi),生長都比較平緩,屬于生長穩(wěn)定期,20 h吸光度達到最大值,之后開始下降。細菌生長穩(wěn)定期為獲得細菌代謝產(chǎn)物的最佳時期,因此,活性菌9-14培養(yǎng)20 h為萃取代謝產(chǎn)物最佳時間。2.3 粗提物的分離純化

由圖6可知,4號(6.8～8 min)所對應的峰的洗脫液有抑菌活性。將4號洗脫液配制濃度為50 μg/mL,在4 ℃、12 000 r/min離心10 min后取上清,使用分析液相檢測純度。由圖7可知,抗菌活性物質(zhì)出峰時間為7.84 min,經(jīng)過制備液相更加精細的純化,活性物質(zhì)的濃度能滿足質(zhì)譜鑒定的要求。圖4 活性菌9-14粗提物凝膠過濾層析紫外吸收圖譜

【參考文獻】：
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本文編號：3406485