產(chǎn)仔數(shù)是評估母豬繁殖性能的重要經(jīng)濟指標,與規(guī)模化豬場的經(jīng)濟效益緊密相連,產(chǎn)仔數(shù)屬于低遺傳力、限性遺傳性狀,受到諸多主效、微效基因的調(diào)控,應(yīng)用常規(guī)育種技術(shù)進展緩慢,需要借助分子標記輔助選育技術(shù),然而是何種原因?qū)е虏煌i品種間的繁殖能力相差甚遠?迄今為止并未明了。本文應(yīng)用轉(zhuǎn)錄組測序技術(shù)對香豬的卵巢轉(zhuǎn)錄組進行測序,從中篩選出9個候選基因,其中3個基因富集于GnRH通路,包括EGFR、Raf1、NRAS等,并采用熒光定量PCR方法,分析這些基因在卵巢和子宮中的差異表達規(guī)律,探討這些基因與香豬產(chǎn)仔數(shù)之間的關(guān)聯(lián)。主要研究結(jié)果如下:1、香豬發(fā)情期卵巢和子宮中候選基因的表達規(guī)律:SERPINE1基因變化不明顯,PTGFR基因僅在發(fā)情期和未發(fā)情期的子宮組織中差異表達,SLPI、INHA、MSMB基因的表達量在兩種組織中的發(fā)情與未發(fā)情時期均有顯著差異;EGFR、FSHR、NRAS、Raf1基因在發(fā)情期和未發(fā)情期的卵巢子宮組織中均有差異表達但未達顯著水平。2、香豬與大白豬卵巢和子宮中候選基因的差異表達:與大白豬未發(fā)情期相比,SLPI、INHA、SERPINE1、MSMB、PTGFR、EGFR、FSHR、NRAS、Raf1基因在子宮組織中均有差異表達;EGFR、FSHR、NRAS、Raf1、SLPI、MSMB基因在香豬子宮組織中的表達量均顯著高于大白豬,但Raf1、MSMB基因的差異不明顯,INHA、SERPINE1、PTGFR基因的表達水平低于大白豬,且SERPINE1基因的表達達到顯著水平;SLPI、INHA、MSMB、EGFR、FSHR、NRAS、Raf1基因在卵巢組織中的表達均顯著高于大白豬,SERPINE1、PTGFR基因在卵巢組織中的表達量極顯著低于大白豬。綜上所述,基于香豬卵巢轉(zhuǎn)錄組測序獲得的9個候選基因確有差異表達,GnRH信號通路對卵巢和子宮的功能起重要的調(diào)節(jié)作用,進一步影響香豬的產(chǎn)仔數(shù)性狀。本文的研究結(jié)果有助于揭示香豬繁殖特性的分子機制,為地方豬種的選育和保護奠定理論基礎(chǔ)。
【學(xué)位單位】：貴州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：S828
【部分圖文】：

圖 3.1 香豬卵巢轉(zhuǎn)錄組基因表達趨勢聚類分析(注：樣品 XL 1、XL3、XL4、XL7、XL8(高產(chǎn))基因的表達趨勢相近；XL2、XL5、XL6(低產(chǎn))相似；q35、q49、q62 為未發(fā)情。)Fig3.1 The clustering pattern of total transcriptome genes expressed in the Xiangpig ovaries(Note: The XL 1,XL3,XL4,XL7 and XL8 (high-yield) gene has similar expression trends;XL2,XL5 and XL6 (low-yield) is similar; q35, q49 and q62 are not estrus.).1.2 GO 和 KEGG 通路數(shù)據(jù)庫富集分析將差異基因進行 KEGG 通路富集分析(表 3.1)，發(fā)現(xiàn)篩選出來的具有差異表達基因集的通路有：FoxO signaling pathway(叉頭框 O 信號通路)是調(diào)節(jié)基因在細胞生理事件的表達，細胞生理事件包括細胞凋亡，細胞周期控制，葡萄糖代謝，氧化應(yīng)激抵抗和壽等。GnRH signaling pathway(促性腺激素釋放激素信號通路)是下丘腦分泌的促性腺

INHA 16277 19796SLPI 15994 921SERPINE1 11776 18641PTGFR 5483 13521MSMB 9425 73418Raf1 360 400NRAS 623 460EGFR 435 421FSHR 556 6979 個候選基因中有 3 個基因富集于 GnRH 信號通路上如(圖 3.2，五角星表示候選基因的富集位置)。從圖可以看出 GnRH 信號通路主要由環(huán)磷酸腺苷(cAMP)途徑，肌醇磷脂途徑和絲裂原活化蛋白激酶(MAPK) 途徑共 3 個途徑組成。本實驗篩選出的差異基因EGFR、Raf1、NRAS 就富集在 MAPK 途徑，此途徑主要是將細胞外刺激信號傳遞到細胞核從而介導(dǎo)促性腺激素類基因的表達與分泌等。

貴州大學(xué)碩士畢業(yè)論文序凝膠膠塊，等待膠塊完全凝固后將 RNA 溶液與 6×Loading混合均勻后點入膠孔中。電泳后在凝膠成像系統(tǒng)觀看到電泳結(jié)夠清楚地分辨出 28S、18S 和 5S rRNA 三條帶清晰明亮，沒有樣品總 RNA 質(zhì)量合格；用微量紫外分光光度計檢測其3次重復(fù))，所測值在 1.80~2.00 之間，平均濃度達 2800 ng/μL，質(zhì)較少，濃度符合試驗要求，可進行下一步實驗。

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本文編號：2832256