【摘要】：內(nèi)毒素血癥是獸醫(yī)臨床上常發(fā)生且高死亡率的全身感染性疾病,探尋有效防治藥物及闡明關(guān)鍵藥效機(jī)制是該領(lǐng)域的研究焦點(diǎn)。以往對內(nèi)毒素血癥的研究主要集中在肺臟和腎臟上,作為機(jī)體重要解毒器官,肝臟在內(nèi)毒素血癥中發(fā)揮著重要的作用。內(nèi)毒素血癥屬于一種炎癥,炎癥致急性肝損傷(Septic acute liver injury,SALI)的病理生理學(xué)機(jī)制研究多集中在炎癥反應(yīng)方面,近年來研究的關(guān)注點(diǎn)開始向氧化應(yīng)激損傷及肝細(xì)胞凋亡方面轉(zhuǎn)移。右美托咪定(Dexmedetomidine,DEX)是一種小動物臨床上常用的麻前鎮(zhèn)痛、鎮(zhèn)靜藥,除此之外還具有抗炎抗氧化及抗凋亡的作用。本試驗(yàn)選取48只健康雄性SD大鼠,隨機(jī)均分為8組,分別為C組、M組、D組、A組、G組、CD組、CA組、CS組。M、D、A、G四組按大鼠體重腹腔注射10 mg/kg濃度為10 mg/mL的脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)。在LPS注射前30 min,D、A組按大鼠體重腹腔注射30μg/kg濃度為30μg/mL的DEX,G組按大鼠體重腹腔注射10 mg/kg濃度為10 mg/mL的GSK-3β抑制劑SB216763。在DEX注射前30 min,A組按大鼠體重腹腔注射250μg/kg濃度為250μg/mL的阿替美唑(Atipamezole,ATI),C組不做任何處理,CD組按大鼠體重腹腔注射30μg/kg濃度為30μg/mL的DEX,CA組按大鼠體重腹腔注射250μg/kg濃度為250μg/mL的ATI,CS組按大鼠體重腹腔注射10 mg/kg濃度為10 mg/mL的GSK-3β抑制劑SB216763的溶劑。藥物作用4 h后對大鼠進(jìn)行吸入麻醉,之后心臟采血,取出肝臟備用。通過以下三部分:大鼠肝功能檢測及肝臟病理組織學(xué)觀察、肝組織氧化應(yīng)激指標(biāo)檢測及血清中相關(guān)炎性細(xì)胞因子檢測、DEX可能的保護(hù)機(jī)制中相關(guān)分子標(biāo)志物mRNA及蛋白表達(dá)量變化等一系列檢測。探討DEX對大鼠SALI的保護(hù)作用機(jī)制及藥效靶位。(1)肝功能指標(biāo)檢測結(jié)果表明,各組間相比,C組ALT含量最低,M組ALT含量最高,D組的ALT水平較M組有所下降,差異極顯著,A組ALT水平較D組相比幾乎無差異,G組ALT較M組有所升高。AST的變化趨勢與ALT基本一致,但A組較D組有所上升且差異顯著。HE染色后觀察肝臟病理組織學(xué)切片時發(fā)現(xiàn),C組肝小葉結(jié)構(gòu)清晰,無肝細(xì)胞變性或壞死,無炎性細(xì)胞浸潤,M組和A組肝組織中肝細(xì)胞壞死,少量空泡變性,肝竇內(nèi)少量炎性細(xì)胞浸潤,肝組織充血,D組和G組都有所改善,CD,CA和CS組基本無明顯損傷。(2)氧化應(yīng)激指標(biāo)檢測結(jié)果如下,各組間相比,M和A兩組MDA和ROS含量高于其余各組,且差異極顯著,其余各組MDA和ROS水平較低,具有統(tǒng)計學(xué)意義,SOD和GSH各組間變化趨勢與MDA和ROS的趨勢完全相反。血清中炎性因子結(jié)果顯示,C組的TNF-α含量最低,M組極顯著上升,D組與M組相比顯著下降,A組與D組相比極顯著上升,G組與M組相比顯著下降。IL-6的整體趨勢與TNF-α一致,不同的是D組與M組相比極顯著下降。IL-1β及IL-18的趨勢及差異顯著性與IL-6一致。(3)免疫組織化學(xué)定位的切片結(jié)果顯示Nrf2蛋白確實(shí)為入核發(fā)揮作用,M組與C組相比蛋白表達(dá)量極顯著下降,D組與M組相比蛋白表達(dá)量極顯著上升,A組與D組相比蛋白表達(dá)量極顯著下降,G組與M組相比蛋白表達(dá)量極顯著上升。P53與c-caspase-3的免疫組化的切片結(jié)果也顯示為入核發(fā)揮作用并且趨勢與Nrf2相反。RT-PCR中Nrf2與P53的變化趨勢與免疫組化趨勢一致。WB結(jié)果顯示,LPS對抗氧化和抗凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)具有抑制作用,DEX和GSK-3β抑制劑SB216763對抗氧化和抗凋亡相關(guān)蛋白具有上調(diào)作用,ATI可以逆轉(zhuǎn)DEX的保護(hù)作用。LPS對促凋亡蛋白具有促進(jìn)表達(dá)作用,DEX和SB216763對促凋亡蛋白具有下調(diào)作用,ATI仍然可以逆轉(zhuǎn)DEX的保護(hù)作用。綜合分析試驗(yàn)數(shù)據(jù)可知α_2腎上腺素受體(Alpha 2 adrenergic receptor,α_2-AR)在DEX對肝臟氧化應(yīng)激和細(xì)胞凋亡的保護(hù)作用中起重要拮抗作用,并且DEX通過調(diào)節(jié)GSK-3β/MKP-1/Nrf2途徑產(chǎn)生抗氧化和抗凋亡的作用。得出結(jié)論DEX對SALI具有保護(hù)作用且通過α_2-AR調(diào)控GSK-3β而發(fā)揮作用。
【學(xué)位授予單位】：東北農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：S857.124
【圖文】：

結(jié) 果3 結(jié)果3.1 肝功能檢測結(jié)果ALT、AST、TBIL 是檢測肝功能的主要指標(biāo)（SD 大鼠的正常 ALT 和 AST 范圍并無國際標(biāo)準(zhǔn)，ALT 大致在 35-69IU/L，AST 在 64.6-187.49IU/L）。圖 3-1 表明，M 組 ALT 含量均值為 78.33IU/L，已超出正常范圍，高于 C 組且差異極顯著（p<0.01），D 組 ALT 含量均值為 48.67IU/L，已恢復(fù)正常范圍，低于 M 組且差異極顯著（p<0.01），A 組 ALT 含量均值為 46.33IU/L，與 D 組相比差異不顯著（p>0.05），G 組 ALT 含量均值為 51.67 IU/L，低于 M 組且差異極顯著（p<0.01），CD，CA，CS 組與 C 組相比均無顯著性差異（p>0.05）。M 組 AST 含量高于 C 組且差異極顯著（p<0.01），D 組 AST 含量低于 M 組且差異極顯著（p<0.01），A 組 AST 含量高于 D 組且差異顯著（p<0.05），G 組 AST 含量低于 M 組且差異極顯著（p<0.01），CD，CA，CS 三組與 C 組相比仍無顯著性差異。TBIL 的整體趨勢與 AST 一致，M 組與 C 組差異顯著（p<0.05），D 組與 M 組差異極顯著（p<0.01），A 組與 D 組差異顯著（p<0.05），G 組與 M 組差異極顯著（p<0.01），CD，CA，CS 三組與 C 組相比依然無顯著性差異（p>0.05），但是所有數(shù)據(jù)均在正常范圍內(nèi)發(fā)生改變。

東北農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)學(xué)碩士學(xué)位論文3-2 顯示，C 組，CD 組，CA 組，CS 組肝組織結(jié)構(gòu)正常，肝小葉結(jié)構(gòu)清晰，肝細(xì)胞無變性壞死，無炎性細(xì)胞浸潤；M 組肝組織發(fā)生病理改變，包括黑色箭頭所指的肝細(xì)胞壞死，白色箭頭所指的少量空泡變性，黃色箭頭所指的少量炎性細(xì)胞浸潤，紅色剪頭所指的肝竇，肝細(xì)胞充血。D 組應(yīng)用 DEX 后顯著減少 LPS 誘導(dǎo)的肝細(xì)胞壞死，空泡變性和炎性細(xì)胞浸潤，但仍有如紅色剪頭所指的出血點(diǎn)。A 組的病理組織學(xué)結(jié)果與 M 組相似，有黃色箭頭所指的少量炎性細(xì)胞浸潤，紅色箭頭所指的出血點(diǎn)，白色箭頭所指的少量空泡變性，G 組觀察結(jié)果與 D 組類似，如紅色箭頭所指仍有少量出血點(diǎn)。每組切片隨機(jī)選取三個視野按照標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行肝臟病理組織學(xué)評分，出血點(diǎn) 1 分，炎性細(xì)胞浸潤 1 分，細(xì)胞壞死 1 分，空泡變性 1 分[74]。

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1 宋歌;呂月濤;狄林林;宗文納;陳伯旺;;早期腸內(nèi)營養(yǎng)對重癥肺炎大鼠免疫功能的影響分析[J];中國醫(yī)學(xué)前沿雜志(電子版);2017年01期

2 葉敏;陳達(dá)柔;陳宇中;杜少冰;杜展鑫;李玉鳳;唐s鉈

本文編號：2723940