【摘要】：偽狂犬病(Pseudorabies,PR)是一種由偽狂犬病毒感染引起的,呈散發(fā)性或地方疫源性流行的急性、接觸性動物傳染病。豬作為PRV的唯一儲藏宿主,仔豬感染后致死率可達(dá)100%,是危害養(yǎng)豬業(yè)的重要疫病之一,給養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。為了更進(jìn)一步了解PRV在我國的流行情況,分析PRV的流行趨勢及變異特點,本研究應(yīng)用PCR的方法對我國多個省市的PRV感染情況進(jìn)行檢測。對PCR陽性的病料樣本,進(jìn)一步用PCR的方法特異性擴增病毒的中和抗原編碼基因gB和gC,以及毒力基因gE和TK,得到病毒的基因序列。運用生物信息學(xué)分析軟件DNAStar對gB、gC及gE的同源性進(jìn)行分析,運用MEGA 5.0軟件的Clustal W算法對gB、gC、gE及TK蛋白的氨基酸序列進(jìn)行比對,構(gòu)建病毒蛋白變異的進(jìn)化樹。本研究中共檢測了2014年來自全國流行21個省市185家豬場的1005份病料及本實驗室保存的2012和2013年的病料。并擴增得到了病毒的毒力基因gE和TK,以及中和抗原基因gB和gC的核苷酸序列,分析了這些我國感染毒株之間的同源性、并構(gòu)建了氨基酸序列變異的進(jìn)化樹。研究結(jié)果顯示,檢測出樣本陽性的豬場為22.2%,樣本的陽性率為12.4%。并獲得了22株P(guān)RV的gB基因,16株P(guān)RV的gC基因,15株P(guān)RV的gE基因以及10株P(guān)RV的TK基因,并分析了這些病毒基因在不同省市的分布情況。序列比對結(jié)果發(fā)現(xiàn),獲得的22個毒株的gB基因,有20個編碼915個氨基酸,這些氨基酸與Bartha株相比,在280-282位和93-95位有氨基酸的插入,在74-78位有3個氨基酸的缺失,他們與Bartha株的氨基酸相似性為96.8%-97.0%,核苷酸相似性為97.9%-98.0%,且與Bartha株處于不同的分支中;獲得的16個PRV gC基因,編碼的488個氨基酸,這些氨基酸在62-70位氨基酸位點處有7個氨基酸的插入,與Bartha株的氨基酸序列相似性為93.1%,核苷酸的相似性為95.8%-95.9%,且與Bartha株處于不同的分支中;15株P(guān)RV的gE基因,編碼580個氨基酸,與Ea株相比在1488-1490位氨基酸處有3個氨基酸的插入,與Ea株的氨基酸序列的相似性為99.1%-99.5%,核苷酸序列的相似性為99.6%-99.8%,與Ea株、Fa株、La、Min-A株等流行毒株處于不同的分支中;10個PRV TK基因,編碼321個氨基酸,與Bartha株TK基因的氨基酸序列的相似性為99.1%-99.4%,核苷酸序列的相似性為99.6%-99.7%,與Bartha、La和Min-A流行株處于不同的分支中。流行病學(xué)調(diào)查表明,PRV在我國的流行依然很廣泛,病毒的變異較大,與核苷酸序列相比,氨基酸的變異程度更大,在研究的這4個病毒蛋白中,中和抗原基因gB和gC的變異與毒力基因gE和TK相比更大一些,但這些差異對病毒感染力和致病力否會產(chǎn)生影響,以及影響的程度仍然有待今后進(jìn)一步研究證實。
【學(xué)位授予單位】：山東農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：S858.28

【參考文獻(xiàn)】

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