【摘要】：為分析致林麝肺炎的病原菌,從發(fā)病死亡的林麝肺臟進行細菌分離,對分離所得細菌進行微生物學和生化特性鑒定及動物試驗。細菌分離結果顯示,病死林麝肺臟主要為2種不同菌落形態(tài)的細菌,經挑純后,測定其16 S rRNA序列,發(fā)現2株細菌均為大腸埃希菌,菌株1與Escherichia coli O104:H4序列同源性均為100%,菌株2與Escherichia coli O_(78)序列同源性為100%。用2株菌進行動物試驗,發(fā)現2株大腸埃希菌對小鼠的致死率均為75%;藥敏試驗結果表明,頭孢類(頭孢唑啉、頭孢曲松)和單環(huán)β內酰胺類(氨曲南)對2株林麝肺部致病性大腸埃希菌均敏感;氨基糖苷類(鏈霉素)對其均中度敏感;對其他類別抗生素均呈現不同程度的耐藥性。
【圖文】：

箱內培養(yǎng)２４ｈ后，觀察菌落種類及相對數量，記錄菌落特征。挑取單個菌落進行革蘭染色并鏡檢，，觀察疑似病原菌菌體的形態(tài)，并劃線接種于普通瓊脂、麥康凱瓊脂和鮮血瓊脂，３７℃恒溫培養(yǎng)箱內培養(yǎng)２４ｈ后，觀察并記錄菌落特征，同時挑取單菌落進行革蘭染色鏡檢，觀察其菌體形態(tài)。將分離培養(yǎng)得到的典型菌落，挑取單菌落劃線接種于三糖鐵瓊脂斜面，進行純化培養(yǎng)，取單菌落接于于ＬＢ液體培養(yǎng)基，３７℃、２００ｒ／ｍｉｎ搖床進行過夜培養(yǎng)增菌，保菌備用。１．２．２．２生化試驗將菌液接種于普通培養(yǎng)基和麥康凱培養(yǎng)基，３７℃恒溫培養(yǎng)箱內培養(yǎng)２４ｈ后，挑取單菌落分別進行糖發(fā)酵試驗（葡萄糖、蔗糖、芽糖、乳糖）、ＭＲ試驗、ＶＰ試驗、靛基質試驗、檸檬酸鹽利用試驗，每個試驗分別重復３次。根據《伯杰氏細菌鑒定手冊》判定試驗結果［７］。１．２．２．３１６ＳｒＲＮＡＰＣＲ鑒定�。保恚叹�，沸水加熱１０ｍｉｎ，冷卻１５ｍｉｎ，１２０００ｒ／ｍｉｎ離心２ｍｉｎ，取上清液作為ＰＣＲ反應的ＤＮＡ模板。依據羅燕等報道的用１６ＳｒＲＮＡＰＣＲ的通用引物２７Ｆ和１４９２Ｒ進行ＰＣＲ擴增［８］。ＰＣＲ產物送西安擎科澤西生物科技有限責任公司進行測序。１．２．３動物試驗將試驗小鼠分為３組，對照組（Ｃ組）、試驗組（Ｇ１）和試驗組（Ｇ２）。試驗前禁食、禁水２４ｈ。Ｇ１組小鼠腹腔注射菌株１菌液１ｍＬ／只（約含細菌２×１０９ＣＦＵ）。Ｇ２組小鼠同方法同劑量注射菌株２菌液。Ｃ組小鼠同方法注射生理鹽水１ｍＬ／只。攻菌后，各組分籠

表１分離菌株的生理生化鑒定結果Ｔａｂｌｅ１Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓｏｆ２ｉｓｏｌａｔｅｓｉｎｍｕｓｋｄｅｅｒ菌株編號Ｓｔｒａｉｎｎｕｍｂｅｒ糖發(fā)酵試驗Ｐｅｎｔａｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎｔｅｓｔ葡萄糖ＧＬＵ蔗糖ＳＡＣ麥芽糖ＭＡＬ乳糖ＬＡＣＭＲ試驗ＭＲＶＰ試驗ＶＰ靛基質試驗Ｉｎｄｏｌｅ檸檬酸鹽利用試驗Ｃｉｔｒａｔｅ１＋＋＋＋＋－＋－２＋＋＋＋＋－＋－注：糖發(fā)酵試驗：“＋”表示產酸產氣；“－”表示不發(fā)酵。其他試驗：“＋”表示陽性；“－”表示陰性。Ｎｏｔｅ：Ｉｎｐｅｎｔａｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎｔｅｓｔ，“＋”ｓｔａｎｄｓｆｏｒｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｏｆｇａｓａｎｄａｃｉｄ；“－”ｓｔａｎｄｓｆｏｒｎｏｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ．Ｉｎｏｔｈｅｒｔｅｓｔｓ，“＋”ｓｔａｎｄｓｆｏｒｐｏｓｉｔｉｖｅ；ａｎｄ“－”ｓｔａｎｄｓｆｏｒｎｅｇａｔｉｖｅ．Ｍ．ＤＮＡ標準ＤＬ２０００；１、２．菌株１；３．陰性對照；４、５．菌株２Ｍ．ＤＮＡＭａｒｋｅｒＤＬ２０００；１，２．Ｓｔｒａｉｎ１；３．Ｎｅｇａｔｉｖｅｃｏｎｔｒｏｌ；４，５．Ｓｔｒａｉｎ２圖２分離菌株的１６ＳｒＲＮＡＰＣＲ產物電泳結果Ｆｉｇ．２Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓｐｒｏｄｕｃｔｓｏｆ１６ＳｒＲＮＡＰＣＲｒｅｓｕｌｔｓｏｆｉｓｏｌａｔｅｄｓｔｒａｉｎｓ將所測得的基因序列與ＧｅｎＢａｎｋ中已有的序列進行比對，選取同源性高的菌株并結合菌株的生理生化特性對所測菌株進行鑒定。菌株１
【作者單位】： 西北農林科技大學動物醫(yī)學院;
【分類號】：S858.94

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本文編號：2527997