目的探討縫隙連接蛋白(Cx)43對(duì)成纖維細(xì)胞中Ⅰ型膠原蛋白(COL-Ⅰ)的調(diào)控作用。方法利用Cx43-siRNA及其相關(guān)miRNA的抑制劑下調(diào)或上調(diào)人皮膚成纖維細(xì)胞(hDFBs)中Cx43的水平,利用Western印跡法和免疫熒光染色法檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)COL-Ⅰ的表達(dá);采用實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(qRT-PCR)和Western印跡法評(píng)估Cx43水平下降后COL-Ⅰ、基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP)-1和MMP-9的mRNA和蛋白表達(dá)水平;用免疫共沉淀(Co-IP)法檢測(cè)Cx43分別與MMP-1、MMP-9或蛋白激酶(PK)D1的結(jié)合情況。結(jié)果 COL-Ⅰ表達(dá)水平與Cx43水平呈負(fù)相關(guān)(P<0.001);Cx43水平降低導(dǎo)致MMP-1、MMP-9在mRNA及蛋白水平均顯著增加(P<0.001,P<0.01,P<0.05);且PKD1表達(dá)也明顯降低。結(jié)論 Cx43參與hDFBs中COL-Ⅰ的調(diào)控并發(fā)揮重要作用,其機(jī)制很可能與PKD1密切相關(guān)。

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
    1.2 hDFBs的培養(yǎng)
    1.3 瞬時(shí)轉(zhuǎn)染siRNA或miRNA抑制劑
    1.4 免疫熒光染色法
    1.5 實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(qRT-PCR)
    1.6 Western印跡法
    1.7 免疫共沉淀(Co-IP)法
    1.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
2 結(jié) 果
    2.1 Cx43 siRNA對(duì)hDFBs中Cx43表達(dá)的沉默效果
    2.2 COL-Ⅰ的表達(dá)與Cx43的相關(guān)性
    2.3 Cx43對(duì)COL-Ⅰ及其相關(guān)酶MMP-1、MMP-9的影響
    2.4 Cx43參與調(diào)解COL-Ⅰ的可能機(jī)制
3 討 論



本文編號(hào)：4043493