本文選題：泡球蚴 + Em18重組蛋白��； 參考：《新疆醫(yī)科大學》2006年碩士論文

【摘要】：目的：構建三種截短的泡球蚴18(Em18)基因的原核表達質粒，獲得高效表達、有生物活性的三種重組蛋白并對其進行初步鑒定。方法：DNAman軟件設計引物，，PCR法擴增并構建三種截短的pET41a-Em18.1，Em18.2，Em18.3原核表達質粒，測序鑒定插入序列正確性。IPTG誘導、表達和純化rEm18.1，rEm18.2，rEm18.3，-GST重組蛋白，運用Western免疫印跡法和ELISA方法對其進行初步鑒定。結果：成功構建三種截短的pET41a-Em18.1，Em18.2，Em18.3，SDS-PAGE檢測表明rEm18.(1，．2，．3)-GST重組蛋白得到成功表達，在相對分子量為41kDa，45.5kDa，45.5kDa處有表達條帶。Western blot結果顯示三種重組蛋白均能被AE病人血清識別。對56例多房棘球蚴病(AE)、88例細粒棘球蚴病(CE)、24例肝硬化、24例其他病、6例肺吸蟲病、6例肝吸蟲病、6例血吸蟲病、6例囊蟲病、24名健康人共236份血清進行ELISA檢測，結果顯示rEm18.1-GST、rEm18.2-GST對AE血清診斷的敏感性分別為19.6％、73.2％，特異性分別為98.9％、98.3％，陽性預測值分別為84.6％、93.2％，陰性預測值分別為79.8％、92.2％。結論：成功構建了三種截短的pET41a-Em18.1，Em18.2，Em18.3原核表達質粒，表達的三種重組蛋白中rEm18.2-GST ELISA結果顯示Em18抗原的優(yōu)勢抗原表位可能位于Em18抗原的第81位-120位氨基酸中，為Em18抗原表位分析奠定了基礎。
[Abstract]:Aim: to construct the prokaryotic expression plasmids of three truncated Elastoc 18 (E18) genes and to obtain three recombinant proteins with high expression and bioactivity. Methods three kinds of truncated prokaryotic expression plasmids pET41a-Em18.1Em18.2Em18.2Em18.3 were amplified and constructed by PCR with specific primers designed by the software: DNAman software. The inserted sequences were confirmed by sequencing and induced by IPTG. The recombinant proteins were expressed and purified. The recombinant proteins were preliminarily identified by Western Western blot and ELISA. Results: three kinds of truncated pET41a-Em18.1- Em18.2Em18.2- Em18.3- blot were successfully constructed. The results of SDS-PAGE showed that the recombinant proteins were successfully expressed and expressed at the relative molecular weight of 45.5kDa of 45.5kDa. The results of Western blot showed that the three recombinant proteins could be recognized by the serum of AE patients. A total of 236 serum samples from 56 patients with multilocular echinococcosis, 88 patients with echinococcosis, 24 patients with liver cirrhosis, 24 patients with liver clonorchiasis, 6 patients with paragonimiasis, 6 patients with schistosomiasis and 6 patients with cysticercosis were detected by ELISA. The results showed that the sensitivity of rEm18.1-GST-rEm18.2-GST to the diagnosis of AE serum was 19.6 and 73.2, the specificity was 98.9 and 98.3, the positive predictive value was 84.6and the positive predictive value was 99.82.The negative predictive value was 79.8 and 92.2respectively.The results showed that the sensitivity of rEm18.1-GST-rEm18.2-GST to the diagnosis of AE serum was 19.6and the specificity was 98.93.2, respectively. Conclusion: three truncated prokaryotic expression plasmids pET41a-Em18.1Em18.2Em18.2Em18.3 were successfully constructed. The results of rEm18.2-GST ELISA showed that the dominant epitopes of Em18 antigen might be located in the 81-120 amino acids of Em18 antigen. The results laid a foundation for the epitope analysis of Em18 antigen.
【學位授予單位】：新疆醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2006
【分類號】：R392

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本文編號：1794032