本文關(guān)鍵詞：高致病性豬繁殖與呼吸綜合征病理學(xué)研究及其病毒的序列分析，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)》 2010年

高致病性豬繁殖與呼吸綜合征病理學(xué)研究及其病毒的序列分析

劉永宏  

【摘要】： 豬繁殖與呼吸綜合征(Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome, PRRS)是由豬繁殖與呼吸綜合征病毒(Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus, PRRSV)引起豬的一種傳染病,表現(xiàn)為母豬生殖衰竭和仔豬、成年豬呼吸困難,是影響?zhàn)B豬業(yè)最大的傳染病之一。PRRSV屬于動(dòng)脈炎病毒科成員,基因組長度約為15kb～15.5kb,至少含有9個(gè)開放閱讀框架,編碼20種以上成熟的蛋白質(zhì)。根據(jù)基因型和抗原性的差異將PRRSV分為北美洲型和歐洲型兩種,各自代表株分別為VR-2332株和LV株。2006年在中國暴發(fā)了空前規(guī)模巨大的豬高熱癥,感染豬達(dá)200萬頭以上,至少40萬頭死亡,這給中國經(jīng)濟(jì)帶來巨大的損失,也嚴(yán)重威脅了全球養(yǎng)豬業(yè)和世界公共衛(wèi)生。 本研究為了分析豬高熱癥的真正原因,通過對北京各郊區(qū)縣和周邊地區(qū)15個(gè)豬養(yǎng)殖場(戶)55個(gè)病例進(jìn)行發(fā)病情況、流行病學(xué)調(diào)查和臨床癥狀觀察,以及通過對發(fā)病豬和病死豬剖檢、病理組織學(xué)觀察、免疫組化染色和電鏡觀察,同時(shí)對冰凍病料和血清做了核酸和抗體檢測。研究結(jié)果表明:PRRSV核酸陽性率為60%,豬圓環(huán)病毒2型(Porcine Circovirus Type 2, PCV-2)核酸陽性率為32.7%,PRRSV和PCV-2混合感染率為18.2%;此次豬高熱癥的主要病原是PRRSV,發(fā)病特點(diǎn)不同于以往典型的PRRS,同時(shí)有PCV-2的混合感染;PRRS病理組織學(xué)病變?nèi)褐饕獮殚g質(zhì)性肺炎、非化膿性腦炎、出血性壞死性淋巴結(jié)炎、急性炎性脾腫、變質(zhì)性心肌炎、急性間質(zhì)性腎炎伴隨腎病和出血、壞死性扁桃體炎、母豬子宮內(nèi)膜炎、變質(zhì)性肝炎和肝細(xì)胞可見胞漿內(nèi)嗜酸性包涵體;PRRSV陽性臟器為肺臟、脾臟、淋巴結(jié)、扁桃體、腦、肝臟、腎臟、腎上腺、胃腸和心臟;PRRSV陽性細(xì)胞為單核-巨噬細(xì)胞、黏膜上皮細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞、腺上皮細(xì)胞(肺上皮細(xì)胞、肝細(xì)胞、腎小管上皮細(xì)胞等)、杯狀細(xì)胞、纖維細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、心肌細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞、膠質(zhì)細(xì)胞和軟骨細(xì)胞。 為了分析此次疫情高發(fā)病率和高死亡率的原因,本研究將4份沒有接種PRRS疫苗RT-PCR鑒定為單一PRRSV陽性的病料,接種MARC-145細(xì)胞進(jìn)行病毒分離,經(jīng)RT-PCR、IFA和電鏡鑒定,表明分離到4株病毒且均為PRRSV,其TCID50均為10-6.5/0.1mL,命名為BJSY-1、BJPG、BJSD和BJBLZ株。進(jìn)一步設(shè)計(jì)了相互重疊的16段引物,RT-PCR產(chǎn)物直接純化、測序和拼接,得到4株P(guān)RRSV的全基因序列,運(yùn)用分子生物學(xué)軟件進(jìn)行比對和遺傳演化分析,結(jié)果顯示:本研究分離的BJSY-1、BJPG、BJSD和BJBLZ株基因全長分別為15319nt、15315nt、15345nt和15316nt,通過美國國立生物技術(shù)信息中心(NCBI)的審核,GenBank登錄號分別為FJ950744、FJ950746、FJ950747和FJ950745;本研究的4株與北美洲型毒株核苷酸同源性在83.3%～99.4%之間,與歐洲型毒株核苷酸同源性只有58.3%左右,均屬于北美洲型亞群Ⅱ,且屬于HP-PRRSV;ORF6基因與北美洲株同源性和歐洲株同源性均最高,其次是ORF2基因,再次是ORF7、ORF4和ORF5基因,同源性最低的是ORF3基因。 本研究選擇了HP-PRRSV BJSY-1株變異性最小的ORF6基因,設(shè)計(jì)合成了一對特異性引物,擴(kuò)增ORF6基因片段克隆入原核表達(dá)載體pET-32a(+),重組質(zhì)粒pET-ORF6轉(zhuǎn)化BL21宿主菌后,鑒定構(gòu)建成功后摸索合適條件誘導(dǎo)表達(dá)M蛋白,純化回收得到了可溶性的具有免疫學(xué)反應(yīng)活性的融合蛋白HIS-M,分子量約為39kDa。本研究得到了一種穩(wěn)定的、免疫原性好的抗原,為制備單抗或作為檢測抗原奠定了基礎(chǔ)。 考慮到PRRSV抗體和抗原雙陰性豬不易獲得,試圖尋找一種標(biāo)準(zhǔn)的且對PRRSV易感的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物代替豬來研究PRRSV,同時(shí)為了驗(yàn)證致病力增強(qiáng)的HP-PRRSV BJSY-1毒株是否可以感染其它動(dòng)物。本研究對BALB/c小白鼠和日本大耳白兔進(jìn)行了不同劑量的人工感染實(shí)驗(yàn),攻毒后觀察體溫、體重等變化,按照實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)定期剖檢取材進(jìn)行PRRSV核酸檢測和病理學(xué)檢查。結(jié)果顯示:小白鼠和兔體溫、體重等無異常變化,PRRSV核酸檢測陰性,沒有出現(xiàn)PRRSV特異的病理組織學(xué)變化。本研究證實(shí)了HP-PRRSV不感染BALB/c小白鼠和日本大耳白兔。

【關(guān)鍵詞】：
【學(xué)位授予單位】：內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類號】：S858.28
【目錄】：

下載全文 更多同類文獻(xiàn)

CAJ全文下載

(如何獲取全文？ 歡迎：購買知網(wǎng)充值卡、在線充值、在線咨詢)

CAJViewer閱讀器支持CAJ、PDF文件格式

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 陳友貴;;豬繁殖與呼吸障礙綜合征流行及防控[J];內(nèi)江科技;2011年09期

2 吳金梅;胡迎利;鄭保軍;郭良興;;柴胡解毒注射液的制備及體外抗PRRSV作用試驗(yàn)[J];河南畜牧獸醫(yī)(綜合版);2010年06期

3 張磊;韓明遠(yuǎn);王建華;寧宜寶;陳堅(jiān);;感染強(qiáng)、弱PRRSV毒株的Marc-145細(xì)胞差異基因文庫的構(gòu)建[J];西北農(nóng)林科技大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2011年07期

4 許信剛;趙紅妮;童德文;;表達(dá)豬繁殖與呼吸綜合征病毒GP5蛋白減毒鼠傷寒沙門氏菌疫苗株的構(gòu)建及動(dòng)物免疫試驗(yàn)[J];畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào);2011年07期

5 吳金梅;江青東;胡迎利;;柴胡解毒注射液體外抗豬繁殖與呼吸綜合征病毒試驗(yàn)[J];中國獸醫(yī)雜志;2011年06期

6 沙娜瓦爾·塔希;王傳鋒;買買提艾力·斯迪克;張偉;冉多良;;PRRSV新疆株N基因原核表達(dá)條件的優(yōu)化及蛋白純化[J];新疆農(nóng)業(yè)科學(xué);2011年06期

7 楊平;吳德;車煉強(qiáng);方正鋒;林燕;譙仕彥;李勇;曾毅;蘇祥;;飼糧添加L-精氨酸或N-氨甲酰谷氨酸對感染PRRSV妊娠母豬繁殖性能及免疫功能的影響[J];動(dòng)物營養(yǎng)學(xué)報(bào);2011年08期

8 ;[J];;年期

9 ;[J];;年期

10 ;[J];;年期

中國重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 王金鳳;張嶺嶺;王嬌;趙澤坤;孫繼國;袁萬哲;;高致病性PRRSV河北地方株的分離鑒定及部分Nsp2基因變異分析[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)食品衛(wèi)生學(xué)分會(huì)第十一次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2010年

2 韓慶安;朱振榮;張永輝;張子佳;劉紅;尹克勇;楊剛;王玉清;;2004～2008年河北省規(guī)模豬場PRRSV感染情況調(diào)查[A];2010畜牧業(yè)與低碳經(jīng)濟(jì)科技論文集[C];2010年

3 夏平安;李艷伍;張紅英;楊霞;崔保安;盧中華;;豬繁殖與呼吸綜合征和豬流感復(fù)合RT-PCR診斷方法的建立及應(yīng)用[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)畜牧獸醫(yī)生物技術(shù)學(xué)分會(huì)暨中國免疫學(xué)會(huì)獸醫(yī)免疫分會(huì)第六次研討會(huì)論文集[C];2005年

4 蔣文明;姜平;李玉峰;吳勝昔;許家榮;;由減毒沙門氏菌介導(dǎo)的豬繁殖與呼吸綜合征病毒(PRRSV)DNA疫苗的口服免疫應(yīng)答[A];第一屆中國養(yǎng)豬生產(chǎn)和疾病控制技術(shù)大會(huì)——2005中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)學(xué)術(shù)年會(huì)論文集[C];2005年

5 文明;毛君婷;史開志;周碧君;王開功;;貴州省豬繁殖與呼吸綜合征分子流行病學(xué)調(diào)查[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)2010年學(xué)術(shù)年會(huì)——第二屆中國獸醫(yī)臨床大會(huì)論文集(下冊)[C];2010年

6 張沖;趙欽;孔寧;黃柏成;杜永坤;張昂克;孫鵬;劉洪亮;高繼明;姬鵬超;王向鵬;周恩民;;新型PRRSV細(xì)胞受體阻斷蛋白在豬體內(nèi)阻斷作用初探[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)獸醫(yī)公共衛(wèi)生學(xué)分會(huì)第三次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2012年

7 王桂萍;陳劍鋒;鄒坤;;金銀花體對豬繁殖與呼吸綜合征病毒體外作用的研究[A];第十屆全國藥用植物及植物藥學(xué)術(shù)研討會(huì)論文摘要集[C];2011年

8 韓先杰;王金寶;王宏偉;;豬呼吸與繁殖障礙綜合征病毒(PRRSV)TCID_(50)的測定[A];豬的重要傳染病防治研究新成果——中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)家畜傳染病學(xué)分會(huì)第五屆理事會(huì)第二次全體會(huì)議暨防檢疫專業(yè)委員會(huì)第7次學(xué)術(shù)交流會(huì)論文集[C];2002年

9 陳義平;劉秀梵;;PRRSV的免疫生物學(xué)特性[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)家畜傳染病學(xué)分會(huì)成立20周年慶典暨第十次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集（上）[C];2003年

10 張禎濤;王金寶;周順;李俊;宋玉才;劉長龍;徐文;倪嬌;;檢測豬繁殖與呼吸綜合征病毒中和抗體的重組GP5-ELISA的研究[A];第一屆中國養(yǎng)豬生產(chǎn)和疾病控制技術(shù)大會(huì)——2005中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)學(xué)術(shù)年會(huì)論文集[C];2005年

中國重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 中牧;[N];農(nóng)民日報(bào);2005年

2 農(nóng)業(yè)部動(dòng)物疫病診斷與流行病學(xué)中心主任 崔尚金博士;[N];中國畜牧獸醫(yī)報(bào);2005年

3 余木;[N];中國畜牧報(bào);2005年

4 瑞普(保定)生物藥業(yè)有限公司 李建麗;[N];中國畜牧獸醫(yī)報(bào);2009年

5 北京華都種豬繁育有限責(zé)任公司 姚亮;[N];中國畜牧報(bào);2004年

6 丁壯 萬遂如;[N];中國畜牧報(bào);2002年

7 馬利;[N];中國畜牧水產(chǎn)報(bào);2001年

8 王錫禎 王澤華 俞燕君 關(guān)同應(yīng);[N];中國畜牧報(bào);2002年

9 瑞普(天津)生物藥業(yè)有限公司 李剛　謝雪松;[N];中國畜牧獸醫(yī)報(bào);2009年

10 記者 孟濤;[N];中國食品質(zhì)量報(bào);2000年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 劉永宏;高致病性豬繁殖與呼吸綜合征病理學(xué)研究及其病毒的序列分析[D];內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué);2010年

2 蔡錦順;PRRSV GP5與M蛋白重組犬2型腺病毒的構(gòu)建及其免疫特性研究[D];吉林大學(xué);2010年

3 周鐵忠;遼寧省豬繁殖與呼吸綜合征分子流行病學(xué)調(diào)查及免疫防制研究[D];吉林大學(xué);2010年

4 趙鵬;豬繁殖與呼吸綜合征病毒在抗體選擇壓下的變異[D];山東農(nóng)業(yè)大學(xué);2010年

5 李廣明;靶向PRRSV及其PAM細(xì)胞病毒受體基因shRNA重組腺病毒的構(gòu)建與抑制PRRSV復(fù)制研究[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2009年

6 張磊;感染PRRSV GD株強(qiáng)弱毒株Marc145細(xì)胞的差異表達(dá)基因篩選及調(diào)控研究[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2011年

7 蔡雪輝;PRRSV流行毒株NSP2遺傳變異分析及其活疫苗的安全性評價(jià)[D];吉林大學(xué);2012年

8 姜一峰;高致病性豬繁殖與呼吸障礙綜合征病毒強(qiáng)弱毒毒力差異的分子基礎(chǔ)研究[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2012年

9 郝曉芳;甘肅省豬繁殖障礙性疾病病毒性病原的分子流行病學(xué)調(diào)查及HP-PRRSV DNA疫苗的研究[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2011年

10 邢鳳;豬抗PRRSV相關(guān)基因的鑒定及功能分析[D];山東農(nóng)業(yè)大學(xué);2011年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 王美君;臨床健康豬群中PRRSV的分離與鑒定[D];山東農(nóng)業(yè)大學(xué);2010年

2 姚雪靜;PRRSV安徽株的分離鑒定及感染仔豬病理學(xué)的研究[D];安徽農(nóng)業(yè)大學(xué);2010年

3 榮福龍;高致病性PRRSV在仔豬體內(nèi)動(dòng)態(tài)分布和體外增殖特性的研究[D];東北農(nóng)業(yè)大學(xué);2010年

4 張沖;野豬源PRRSV Shaanxi-2株分離鑒定、全基因測序及遺傳進(jìn)化分析[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2010年

5 曹永芝;高致病性豬繁殖與呼吸綜合征病毒(PRRSV)的氣溶膠傳播機(jī)制[D];山東農(nóng)業(yè)大學(xué);2010年

6 李珈瑩;PRRSV GP4、GP5基因的克隆及原核表達(dá)[D];延邊大學(xué);2010年

7 石娜;豬IL-15與PRRSV ORF5基因真核表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建及其免疫原性分析[D];東北農(nóng)業(yè)大學(xué);2010年

8 邱洪凱;藍(lán)耳病病毒克隆測序、單克隆抗體制備及唾液酸粘附素的克隆表達(dá)[D];山東農(nóng)業(yè)大學(xué);2010年

9 宮大慶;高致病性PRRSV HuN4株感染仔豬過程中淋巴結(jié)蛋白質(zhì)組學(xué)研究[D];黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué);2011年

10 趙澤坤;高致病性PRRSV的RT-PCR鑒別診斷方法的建立及應(yīng)用[D];河北農(nóng)業(yè)大學(xué);2010年

  本文關(guān)鍵詞：高致病性豬繁殖與呼吸綜合征病理學(xué)研究及其病毒的序列分析，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。