本文關(guān)鍵詞：抗日本血吸蟲SEA雞卵黃抗體的制備與鑒定　出處：《中國寄生蟲學(xué)與寄生蟲病雜志》2007年03期 　論文類型：期刊論文

  更多相關(guān)文章： 卵黃免疫球蛋白 日本血吸蟲 免疫診斷 循環(huán)抗原

【摘要】：目的制備特異性抗日本血吸蟲可溶性蟲卵抗原(SEA)的雞卵黃免疫球蛋白(IgY)并檢測其特異性、敏感性。方法用日本血吸蟲SEA經(jīng)翅膀下靜脈和皮下免疫25周齡海蘭母雞4次(首次劑量為60μg/只,加強劑量為30μg/只),每次間隔10d。取免疫前和首次免疫后35d的雞蛋卵黃,分別用水稀釋法提取IgY,BCA法測定蛋白含量,并進行十二烷基磺酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)和蛋白質(zhì)印跡(Westernblotting)分析,ELISA檢測純化后IgY特異性和敏感性。分別提取免疫后不同時間的卵黃抗體,觀察抗體效價的變化。結(jié)果海蘭母雞經(jīng)SEA首次免疫后35d,每枚蛋經(jīng)提純后可得到約61mg抗體,經(jīng)SDS-PAGE和Westernblotting分析,純化的IgY有1條主要蛋白帶,相對分子質(zhì)量(Mr)為130000,并可被SEA識別。母雞初次免疫后第10天,經(jīng)SDS-PAGE和ELISA分析,雞蛋卵黃內(nèi)即有抗體產(chǎn)生,初次免疫后31d效價可達1∶1600。雙抗體夾心ELISA結(jié)果顯示純化后的IgY有較高的敏感性,可檢測到的SEA達2.4ng/ml。結(jié)論制備的抗SEA雞卵黃抗體的特異性和敏感性均較高。
[Abstract]:Objective to prepare chicken egg yolk immunoglobulin (IgY) against Schistosoma japonicum soluble egg antigen (SEAA) and detect its specificity. Methods 25-week-old Hailan hens were immunized with Schistosoma japonicum SEA (60 渭 g for the first time and 30 渭 g for each) with subcutaneous and subcutaneous immunization. The egg yolk before immunization and 35 days after the first immunization were collected at intervals of 10 days and the protein content was determined by water dilution method. Sodium 12 alkyl sulfonate-polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) and Western blotting were performed. ELISA was used to detect the specificity and sensitivity of purified IgY. The egg yolk antibody was extracted at different time after immunization and the titer of antibody was observed. The results showed that Hailan hens were immunized with SEA for 35 days. After each egg was purified, about 61mg antibody was obtained. SDS-PAGE and Westernblotting analysis showed that the purified IgY had a major protein band. The relative molecular weight (Mr) was 130000and could be recognized by SEA. On the 10th day after the first immunization of hens, SDS-PAGE and ELISA analysis showed that antibodies were produced in egg yolk. The titer of the purified IgY was 1: 16000.The results of double antibody sandwich ELISA showed that the purified IgY had a high sensitivity. The detectable SEA was 2.4 ng / ml. Conclusion the specificity and sensitivity of anti SEA yolk antibody were higher.
【作者單位】： 華中科技大學(xué)同濟醫(yī)學(xué)院病原生物學(xué)系 華中科技大學(xué)同濟醫(yī)學(xué)院病原生物學(xué)系 華中科技大學(xué)同濟醫(yī)學(xué)院病原生物學(xué)系 華中科技大學(xué)同濟醫(yī)學(xué)院病原生物學(xué)系 華中科技大學(xué)同濟醫(yī)學(xué)院病原生物學(xué)系 華中科技大學(xué)同濟醫(yī)學(xué)院病原生物學(xué)系 華中科技大學(xué)同濟醫(yī)學(xué)院病原生物學(xué)系
【基金】：國家863高技術(shù)研究發(fā)展計劃(No.2006AA02A251)~~
【分類號】：R392
【正文快照】： 血吸蟲病的診斷方法主要有病原學(xué)診斷和免疫學(xué)診斷。由于病原學(xué)方法對慢性病人和低度感染者檢出率低,因此免疫學(xué)診斷方法的建立和改進是多年來血吸蟲病診斷的研究熱點。當(dāng)前國內(nèi)免疫學(xué)診斷主要是檢測抗體,常用的方法有環(huán)卵沉淀試驗(COPT)、酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)、間接血凝

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 仇鎮(zhèn)寧,馮振卿,朱昌亮,李蕓茜,管曉虹;用單克隆抗獨特型抗體NP30檢測血吸蟲病短程抗體的研究[J];南京醫(yī)科大學(xué)學(xué)報;1999年01期

2 余清聲,王桂平,王薇,覃媛,黃劭;抗眼鏡王蛇毒雞卵黃抗體的研制及初步應(yīng)用[J];中華微生物學(xué)和免疫學(xué)雜志;2004年09期

【共引文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 郭儉;郭家鋼;;血吸蟲病早期免疫診斷的研究進展[J];國外醫(yī)學(xué).寄生蟲病分冊;2005年06期

2 徐福洲,王金洛,楊兵,宋維平,賴平安,秦澤榮,孟彥妮;抗豬產(chǎn)腸毒素大腸埃希氏菌卵黃抗體的研制及攻毒治療試驗[J];華北農(nóng)學(xué)報;2002年04期

3 施強,楊婷婷;IgY抗體用于弓形蟲感染小鼠病原學(xué)檢測的研究[J];海峽預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志;2002年01期

4 黃躍龍;抗體及其亞類檢測考核血吸蟲病療效的研究進展[J];中國熱帶醫(yī)學(xué);2002年04期

5 劉四紅;侯力強;孔天翰;;抗中華眼鏡蛇毒雞卵黃抗體的制備及其效價測定[J];蛇志;2006年01期

6 李金榮;藍海;;中西醫(yī)結(jié)合治療毒蛇咬傷的新進展[J];蛇志;2006年02期

7 梁幼生,朱蔭昌,寧安,戴建榮,徐明,楊小紅,華萬全,熊玉霞,高祖祿,胡啟龍;FA-ELISA檢測血吸蟲病人短程抗體試劑盒近期療效考核價值的研究[J];中國血吸蟲病防治雜志;2001年02期

8 王祝鳴,馮振卿,仇鎮(zhèn)寧,李蕓茜,管曉虹;日本血吸蟲單克隆anti-anti-id的建株及初步鑒定[J];中國血吸蟲病防治雜志;2001年04期

9 吳玉龍;許寧;仇鎮(zhèn)寧;陳鳳;李遠林;方文;楊杰;馮振卿;管曉虹;;日本血吸蟲抗獨特型抗體NP30抗體檢測法在云南大山區(qū)應(yīng)用效果的評價[J];中國血吸蟲病防治雜志;2006年03期

10 劉四紅;孔天翰;;抗眼鏡蛇毒雞卵黃抗體的制備、純化和保護性實驗研究[J];中國病理生理雜志;2006年12期

相關(guān)會議論文 前1條

1 王金洛;宋維平;徐福洲;楊兵;賴平安;王琴;孟燕妮;;抗豬流行性腹瀉病毒卵黃抗體(PEDV-IgY)及其特性研究[A];2003北京國際養(yǎng)豬研討會暨展覽會論文集[C];2003年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 王玉燕;特種經(jīng)濟動物抗CDV、CAV、CPV免疫球蛋白的制備與應(yīng)用[D];山東農(nóng)業(yè)大學(xué);2002年

2 劉劍南;衛(wèi)氏肺吸蟲重組抗原的制備及應(yīng)用研究[D];南京醫(yī)科大學(xué);2003年

3 孫欽偉;腸產(chǎn)毒素大腸桿菌高免蛋黃粉抗體的吸收及若干因子對其活性影響的初步研究[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2003年

4 王翔宇;卵黃免疫球蛋白親和配基分離蛇毒Gln49-PLA_2的研究[D];大連理工大學(xué);2004年

5 曹軍;豬三十九肽膽囊收縮素（CCK39）的基因克隆、表達及其抗體的制備[D];揚州大學(xué);2005年

6 史政榮;抗內(nèi)毒素IgY-F（ab′）_2的制備與體外生物學(xué)效應(yīng)研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2005年

7 吳玉龍;日本血吸蟲抗獨特型抗體NP30抗體檢測法在云南大山區(qū)流行現(xiàn)場應(yīng)用的研究[D];南京醫(yī)科大學(xué);2006年

8 許寧;日本血吸蟲病抗獨特型抗體NP30檢測系統(tǒng)的優(yōu)化[D];南京醫(yī)科大學(xué);2006年

9 孫凌霜;鴨和鵝A型禽流感間接ELISA抗體檢測方法的建立[D];東北農(nóng)業(yè)大學(xué);2006年

10 張笑意;精制抗新城疫病毒卵黃抗體的研制[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2006年

【二級參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 楊婷婷,李世清,郭維植,施強;抗腸出血性大腸桿菌O157∶H7雞卵黃抗體的初步研究[J];海峽預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志;2001年04期

【相似文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 王薇;;用大劑量X線照射的童蟲疫苗預(yù)防牛日本血吸蟲病[J];國際醫(yī)學(xué)寄生蟲病雜志;1984年02期

2 黃辛;;中國科學(xué)家公布日本血吸蟲基因天書"首次通過國內(nèi)生物信息平臺向全世界發(fā)布大規(guī)�；蚪M序列數(shù)據(jù)[J];浙江大學(xué)學(xué)報(農(nóng)業(yè)與生命科學(xué)版);2006年03期

3 李齊;感染日本血吸蟲小鼠的脾細胞產(chǎn)生的嗜酸性粒細胞趨化淋巴因子(ECF-L)[J];國際免疫學(xué)雜志;1987年05期

4 張恩英,婁文嫻,薛純良,王兆軍;日本血吸蟲病患者尿液中循環(huán)抗原和抗體聯(lián)合檢測的診斷價值[J];中國寄生蟲學(xué)與寄生蟲病雜志;2000年01期

5 裘麗姝,馮正,張永紅,李浩;多克隆與單克隆抗體夾心ELISA法檢測日本血吸蟲病患者血清循環(huán)抗原[J];中國寄生蟲學(xué)與寄生蟲病雜志;2000年02期

6 黃華;姜昌富;黃進;;蚯蚓與日本血吸蟲交叉反應(yīng)抗原的初步探討[J];中國人獸共患病學(xué)報;2006年05期

7 翟羽佳;劉全;;日本血吸蟲新型疫苗的研究進展[J];中國生物制品學(xué)雜志;2009年05期

8 倪永暉;日本血吸蟲病鼠體內(nèi)肉芽腫炎癥的調(diào)節(jié)機制[J];國際醫(yī)學(xué)寄生蟲病雜志;1987年05期

9 婁文嫻,俞安洲,張奇兒;一種對日本血吸蟲病具有診斷潛力的單克隆抗體[J];現(xiàn)代免疫學(xué);1990年02期

10 田生和;;HLA-DQ控制的T細胞對日本血吸蟲可溶性蟲卵抗原的應(yīng)答[J];國際醫(yī)學(xué)寄生蟲病雜志;1991年04期

相關(guān)會議論文 前10條

1 張兆松;;日本血吸蟲病分子疫苗的研究[A];新世紀(jì) 新機遇 新挑戰(zhàn)——知識創(chuàng)新和高新技術(shù)產(chǎn)業(yè)發(fā)展（上冊）[C];2001年

2 王成祖;張瑾;劉池波;劉文琪;;抗日本血吸蟲SEA雞卵黃抗體的制備與鑒定及其初步應(yīng)用[A];第二屆中國醫(yī)學(xué)細胞生物學(xué)學(xué)術(shù)大會暨細胞生物學(xué)教學(xué)改革會議論文集[C];2008年

3 劉朔婕;戴五星;;日本血吸蟲多價膜錨定表達疫苗pIRES-Sj97-sj14-Sj26的構(gòu)建及其免疫原性的研究[A];湖北省暨武漢市生物化學(xué)與分子生物學(xué)學(xué)會第八屆第十七次學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2007年

4 溫志立;汪世平;曾憲芳;吳朝陽;沈國勵;;壓電免疫傳感器用于檢測日本血吸蟲循環(huán)抗原的研[A];中國動物學(xué)會第六屆全國青年寄生蟲學(xué)工作者學(xué)術(shù)討論會論文摘要集[C];2000年

5 王成祖;張瑾;劉池波;劉文琪;;抗日本血吸蟲SEA雞卵黃抗體的制備與鑒定及其初步應(yīng)用[A];2009年浙江省檢驗醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2009年

6 劉偉;朱興全;戴榮四;林瑞慶;宋慧群;程天印;劉毅;;湖南省日本血吸蟲線粒體nad4基因的多態(tài)性研究[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會家畜寄生蟲學(xué)分會第九次學(xué)術(shù)研討會論文摘要集[C];2006年

7 劉偉;朱興全;戴榮四;林瑞慶;宋慧群;程天印;劉毅;;湖南省日本血吸蟲線粒體cox1基因的多態(tài)性研究[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會家畜寄生蟲學(xué)分會第九次學(xué)術(shù)研討會論文摘要集[C];2006年

8 宋震宇;劉金明;何金桃;孫帥;石耀軍;李浩;陸珂;林矯矯;岳城;;東方田鼠血清篩選噬菌體展示抗原對小鼠日本血吸蟲病免疫效果觀察[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會家畜寄生蟲學(xué)分會第六次代表大會暨第十次學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2009年

9 錢寶珍;胡海濤;;先天性感染日本血吸蟲家兔攻擊感染后血清抗體動態(tài)的研究[A];2005年浙江省醫(yī)學(xué)病毒學(xué)、醫(yī)學(xué)微生物與免疫學(xué)學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2005年

10 張蕾;楊艷芬;楊雪;蘇川;張兆松;;抗日本血吸蟲感染的新型T細胞表位疫苗的研究[A];中華醫(yī)學(xué)會熱帶病與寄生蟲學(xué)分會機會性感染學(xué)術(shù)研討會論文匯編[C];2007年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 姜寧;日本血吸蟲RNA疫苗探索及Sj23抗原對宿主免疫調(diào)節(jié)機制的研究[D];吉林大學(xué);2009年

2 朱翔;日本血吸蟲輻照尾蚴免疫小鼠早期免疫應(yīng)答特征及其相關(guān)分子機制的研究[D];南京醫(yī)科大學(xué);2005年

3 余俊龍;SjHGPRT和SjSDISP全長cDNA的克隆、表達及保護性免疫研究[D];中南大學(xué);2006年

4 張蕾;抗日本血吸蟲感染表位PDDV疫苗的研究[D];南京醫(yī)科大學(xué);2007年

5 聞禮永;日本血吸蟲大陸株硫氧還蛋白在畢氏酵母菌的克隆表達及其免疫反應(yīng)性研究[D];南京醫(yī)科大學(xué);2007年

6 胡媛;日本血吸蟲23kDa膜蛋白（Sj23）和脂肪酸結(jié)合蛋白（Sj14）的雙價DNA疫苗免疫保護性研究[D];華中科技大學(xué);2007年

7 蔡鵬飛;日本血吸蟲多表位疫苗構(gòu)建探索和TSP-2抗原鑒定[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2008年

8 戴橄;日本血吸蟲雌雄合抱相關(guān)蛋白的分離、鑒定及其DNA疫苗的研究[D];中南大學(xué);2006年

9 夏艷勛;日本血吸蟲性別差異表達基因的篩選及新基因的克隆分析[D];華南農(nóng)業(yè)大學(xué);2006年

10 張玉俠;Th17/IL-17在日本血吸蟲感染小鼠肝臟肉芽腫病變中的作用及其機制[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2011年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 王成祖;抗日本血吸蟲SEA雞卵黃抗體的制備與鑒定[D];華中科技大學(xué);2007年

2 濮翔科;ICOS轉(zhuǎn)基因小鼠模型的建立及其在日本血吸蟲病研究中的應(yīng)用[D];蘇州大學(xué);2005年

3 李曄;抗日本血吸蟲病二價多表位疫苗研究[D];揚州大學(xué);2010年

4 王瑋;基于生物信息學(xué)的日本血吸蟲糖代謝研究[D];華中師范大學(xué);2007年

5 徐叢榮;日本血吸蟲組織蛋白酶B基因的克隆、表達及初步鑒定[D];福建醫(yī)科大學(xué);2007年

6 高勝巖;日本血吸蟲多價DNA疫苗的構(gòu)建及免疫保護性研究[D];吉林農(nóng)業(yè)大學(xué);2008年

7 付光偉;日本血吸蟲表膜結(jié)構(gòu)蛋白Annexin基因克隆、表達與免疫保護效果評估[D];福建農(nóng)林大學(xué);2009年

8 趙志榮;日本血吸蟲Mago nashi基因的克隆、表達與功能鑒定[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2007年

9 李健;日本血吸蟲四跨膜蛋白2大親水區(qū)（Sj TSP_2HD）表達及免疫保護性的研究[D];江蘇省血吸蟲病防治研究所;2008年

10 張詩海;輪狀病毒SA11衣殼蛋白VP7的畢赤酵母重組表達及IgY的制備[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2009年

，

本文編號：1360350