本文關(guān)鍵詞：一種經(jīng)miniSOG標(biāo)記的人腺病毒的制備

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【摘要】：為了探索腺病毒感染細(xì)胞后病毒核心在胞內(nèi)運(yùn)輸?shù)倪^程,本研究構(gòu)建了一株經(jīng)miniSOG標(biāo)記IX蛋白的人腺病毒。首先,我們通過重疊延伸PCR的方法合成了miniSOG基因,將其克隆至pcDNA3表達(dá)載體后轉(zhuǎn)染293細(xì)胞,熒光顯微鏡下可觀察到miniSOG蛋白的表達(dá),經(jīng)固定,封閉,DAB-H2O2染色,OsO4固定染色后,可見表達(dá)miniSOG蛋白的細(xì)胞呈深褐色。之后將miniSOG構(gòu)建至腺病毒穿梭載體pShuttle的IX基因3’端,并通過與骨架質(zhì)粒pAdeasy-1在E.coli BJ5183細(xì)菌內(nèi)同源重組獲得了重組腺病毒質(zhì)粒pAd5-IXSOG。pAd5-IXSOG質(zhì)粒經(jīng)PacI酶切線性化后轉(zhuǎn)染293細(xì)胞,拯救出重組腺病毒HAdV-5-IXSOG。經(jīng)過8輪擴(kuò)增,超速離心純化后獲得2.0ml濃度為6.0×1011vp/mL的重組腺病毒,電子顯微鏡下可見完整病毒顆粒。本研究經(jīng)反向遺傳學(xué)技術(shù)對(duì)腺病毒載體進(jìn)行改造,成功制備了經(jīng)miniSOG標(biāo)記的重組腺病毒HAdV-5-IXSOG,該病毒可用于腺病毒感染細(xì)胞的實(shí)時(shí)追蹤。
【作者單位】： 中國疾病預(yù)防控制中心病毒病預(yù)防控制所傳染病預(yù)防控制國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物研究所;
【關(guān)鍵詞】： 腺病毒 IX蛋白 miniSOG 病毒拯救
【基金】：國家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(31400156) 國家科技重大專項(xiàng)課題(2013ZX10004-101)
【分類號(hào)】：R373
【正文快照】： 腺病毒載體廣泛用于基因治療及重組疫苗研究。人腺病毒呈二十面體立體對(duì)稱結(jié)構(gòu),無包膜,其主要衣殼蛋白包括五鄰體基(penton base)、六鄰體(hexon)及纖維蛋白(fiber);次要衣殼蛋白包括VI,VIII,IX,IIIa蛋白。衣殼內(nèi)部的基因組核心主要由病毒DNA,核心蛋白(V,VII,μ,IVa2,terminal，

本文編號(hào)：738726