G蛋白偶聯(lián)受體（G protein-coupled receptor,GPCR）家族成員大麻素受體1（Cannabinoid receptor 1,CB1）主要在神經(jīng)系統(tǒng)中表達,CB1活化后參與調(diào)節(jié)學(xué)習(xí)、記憶、疼痛和能量代謝等過程。然而迄今為止,尚缺少直接監(jiān)測CB1活化的方法。我們首先構(gòu)建了CB1分子內(nèi)熒光共振能量轉(zhuǎn)移（Fluorescence Resonance Energy Transfer,FRET）分子探針,通過監(jiān)測CB1受體的第三細胞內(nèi)環(huán)（i3c-loop）和C末端之間的結(jié)構(gòu)變化來監(jiān)測其活化。為了監(jiān)測CB1受體的激活及介導(dǎo)的下游信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路,我們首先在CB1受體的C-末端融合青色熒光蛋白（eCFP）,并將黃色熒光蛋白（eYFP）直接插入i3c-loop中,從而構(gòu)建完成第一個CB1受體FRET分子探針（p5-VSV-CB1-eYFP at 3-loop-M-eCFP,CB1-M）,對其生物學(xué)活性的研究表明,CB1激動劑能夠時間和濃度依賴性的誘導(dǎo)受體分子探針內(nèi)化、FRE信號增加,同時促進細胞內(nèi)[Ca²⁺]增加,ERK1/2 MAP激酶磷酸化增強。此外,我們對... 

【文章來源】：昆明理工大學(xué)云南省

【文章頁數(shù)】：113 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

G蛋白偶聯(lián)受體的結(jié)構(gòu)圖

8圖 1.2 大麻素受體的信號通路圖Fig 1.2 Cannabinoid receptor signaling pathwayA 圖為大麻素 1 型受體的信號通路圖；B 圖為大麻素 2 型型受體的信號通路圖（圖片引自大麻素-CB1 /CB2 受體系統(tǒng)對多巴胺神經(jīng)元調(diào)節(jié)作用及其與帕金森病發(fā)生的研究進展）Cannabinoid receptor signaling pathwayFigure A shows the signal pathway of the cannabinoid type 1 receptor;Figure B shows the signal pathway of the cannabinoid type 2 receptor.1.2.5.1 CB1 介導(dǎo)的下游信號通路 ERK1/2ERK1/2（extracellular regulated protein kinases）是指細胞外調(diào)節(jié)蛋白激酶，包括 ERK1 和 ERK2，是將信號從表面受體傳導(dǎo)至細胞核的關(guān)鍵激酶。ERK1/2是 80 年代末期發(fā)現(xiàn)的一類絲/蘇氨酸蛋白激酶，是傳遞絲裂原信號的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)蛋白。它正常定位于胞漿，當(dāng)激活后轉(zhuǎn)位至胞核，調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄因子活性，產(chǎn)生細胞效

昆明理工大學(xué)碩士學(xué)位論文骨架成份，如微管相關(guān)蛋白 MAP-1、MAP-2 和 MAP-4，參與細胞形態(tài)的調(diào)節(jié)及細胞骨架的重分布。最近，國外學(xué)者又新克隆出 ERK5 及其上游激酶 MEK5，這條 MAPKs 信號通路可被 H2O2及高滲刺激激活，其底物為 c-myc（圖 3）。分子生物學(xué)技術(shù)發(fā)現(xiàn)還存在 ERK3Kinase/ERK3 及 ERK4 兩條通路存在，但目前對其激活信號、底物及生物學(xué)意義還不清楚。


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