【摘要】：目的建立一種簡單、穩(wěn)定的乳鼠海馬神經(jīng)元的分離及原代培養(yǎng)方法。方法選用出生24 h內(nèi)的乳鼠,分離雙側(cè)海馬區(qū),機械吹打分散,獲得細胞懸液。用含胎牛血清的DMEM/F12培養(yǎng)基培養(yǎng)24 h后,換成添加B27的Neuralbasal培養(yǎng)基進行原代培養(yǎng),第7天采用神經(jīng)元特異性烯醇化酶(NSE)免疫熒光細胞化學染色鑒定神經(jīng)元純度。結(jié)果在體外培養(yǎng)條件下海馬神經(jīng)元細胞結(jié)構(gòu)特征明顯,能形成典型的神經(jīng)細胞網(wǎng)絡,100%細胞呈NSE陽性。結(jié)論依靠簡單的機械分散并配合特定培養(yǎng)條件可獲得生長狀態(tài)良好、純度高的海馬神經(jīng)元。
[Abstract]:Objective to establish a simple and stable method for the isolation and primary culture of hippocampal neurons in neonatal rats. Methods the bilateral hippocampal area was isolated from newborn rats within 24 hours after birth, and the suspension was obtained by mechanical blow dispersion. DMEM/F12 medium containing fetal bovine serum was cultured for 24 h, then replaced with Neuralbasal medium supplemented with B27 for primary culture. On the 7th day, neuron specific enolase (NSE) immunofluorescence cytochemical staining was used to identify the purity of neurons. Results under the condition of culture in vitro, the structural characteristics of hippocampal neurons were obvious, which could form a typical neural network, and 100% of the cells were NSE positive. Conclusion Hippocampal neurons with good growth state and high purity can be obtained by simple mechanical dispersion and combined with specific culture conditions.
【作者單位】： 西南醫(yī)科大學中西結(jié)合學院;西南醫(yī)科大學附屬中醫(yī)醫(yī)院中西醫(yī)結(jié)合防治器官纖維化實驗室及中西醫(yī)結(jié)合研究中心;西南醫(yī)科大學附屬中醫(yī)醫(yī)院脾胃科;
【基金】：四川省科技廳基礎(chǔ)研究項目(2013TY0158)
【分類號】：Q813.11;R-33

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本文編號：2323348