本文選題：VOCs　切入點(diǎn)：IVF實(shí)驗(yàn)室裝修材料　出處：《汕頭大學(xué)》2010年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：人類體外受精-胚胎移植( In-vitro fertilization and embryo transfer,IVF-ET)的受精率、卵裂率、囊胚形成率及臨床妊娠率低下一直困擾著該領(lǐng)域研究者。IVF實(shí)驗(yàn)室的化學(xué)污染問(wèn)題被認(rèn)為是主要原因之一。化學(xué)污染主要來(lái)源于揮發(fā)性有機(jī)化合物(Volatile Organic Compounds,VOCs)的排放。VOCs主要由IVF實(shí)驗(yàn)室器材、墻壁涂料、膠劑、地板及層流設(shè)備材料等排放。在IVF實(shí)驗(yàn)室裝修時(shí),盡量減少化工材料的使用,選擇排放VOCs低的設(shè)備及材料,可以最大程度優(yōu)化IVF實(shí)驗(yàn)室環(huán)境。配子或胚胎的冷凍/解凍方法及輔助孵出方法也會(huì)影響到受精率、卵裂率、囊胚形成率及臨床妊娠率。玻璃化冷凍/解凍及激光輔助孵出技術(shù)與其它凍存方法和輔助孵出方法比較更有優(yōu)越性。為驗(yàn)證IVF實(shí)驗(yàn)室裝修后的環(huán)境質(zhì)量及玻璃化冷凍、激光輔助孵出技術(shù)對(duì)受精率、卵裂率、囊胚形成率的影響,分別在IVF實(shí)驗(yàn)室建立3個(gè)月和建立1年后進(jìn)行了一系列的鼠胚試驗(yàn),包括小鼠超排、配子與胚胎體外發(fā)生試驗(yàn)、鼠胚玻璃化冷凍、解凍及輔助孵出等試驗(yàn)。試驗(yàn)所獲得的受精率、卵裂率、優(yōu)質(zhì)胚胎率、囊胚率及囊胚孵出率與各文獻(xiàn)報(bào)道結(jié)果一致,甚至優(yōu)于文獻(xiàn)報(bào)道結(jié)果。裝修3個(gè)月和1年后鼠胚試驗(yàn)結(jié)果相比較,未發(fā)現(xiàn)明顯差異,P0.05。此結(jié)果提示VOCs排放的減少,玻璃化凍融及激光輔助孵出技術(shù)的應(yīng)用,可以提高受精率、卵裂率、優(yōu)質(zhì)胚胎率、V⑴唄始芭嚀シ醭雎�，对IVF-ET臨床結(jié)局意義重大。 研究目的:驗(yàn)證通過(guò)改善IVF實(shí)驗(yàn)室的裝修材料可以有效減少VOCs的釋放,為配子及胚胎提供更加安全無(wú)毒的培養(yǎng)環(huán)境,有利于配子及胚胎的體外發(fā)育;觀察玻璃化冷凍/解凍及激光輔助孵出技術(shù)對(duì)胚胎凍存和孵出效果。 研究方法:本研究包括以下幾部分: 1.小鼠超排卵及配子與胚胎的體外發(fā)生:第一天下午5:00給雌鼠腹腔注射孕馬血清促性腺激素(PMSG )10IU/只(0.1ml),第三天下午5:00注射促性腺激素(HCG )10IU/只(0.1ml)。雌鼠注射HCG 12~13h后人性化處死雄鼠,獲得精子并使之獲能。注射HCG 13~14h后,人性化處死雌鼠,獲得卵子。將獲能精子加入培養(yǎng)箱中放有卵子的培養(yǎng)皿中。加精4-6小時(shí)后觀察受精情況,后每24h觀察卵裂率、囊胚形成率。 2.8細(xì)胞期鼠胚(d2.5)的獲得:第一天12:00給雌鼠腹腔注射PMSG 10IU/只(0.1ml)。第三天中午11:00給雌鼠腹腔注射HCG 10IU/只(0.1ml)。注射HCG當(dāng)日下午5:00一對(duì)一與公鼠合籠。次晨檢查陰道栓子情況,見栓記為受精d0.5。第六天上午人性化處死雌鼠,獲得d2.5鼠胚。 3.玻璃化冷凍:將d2.5鼠胚移入玻璃化冷凍液1液約5~7分鐘,后移入玻璃化冷凍液2液,隨后裝載到冷凍載桿上,將載桿投入液氮。 4.玻璃化解凍:3001皿中加入解凍液1,五孔板中加入解凍液2、3、4,將裝有胚胎的載桿迅速放入解凍液1,停留1分鐘,隨之放入解凍液2、3、4液中,分別停留時(shí)間為3、5、5分鐘,最后移入囊胚微滴中進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察。 5.激光輔助孵出:解凍d2.5天胚胎,將胚胎放置在HEPES液中,在卵周間隙較大的透明帶部位3點(diǎn)鐘位置行激光光束打孔。打孔后培養(yǎng)到d5天,觀察囊胚孵出情況。 結(jié)果: 1.IVF實(shí)驗(yàn)室裝修完成3個(gè)月,平均受精率84.0%,平均卵裂率96.2%,平均優(yōu)質(zhì)胚胎率97.3%,平均囊胚形成率96.1%,平均囊胚孵出率93.1%;IVF實(shí)驗(yàn)室裝修完成1年,平均受精率87.4%,平均卵裂率92.8%,平均優(yōu)質(zhì)胚胎率98.7%,平均囊胚形成率97.4%,平均囊胚孵出率93.3%。 2.玻璃化冷凍/解凍及輔助孵出:IVF實(shí)驗(yàn)室裝修完成3個(gè)月,優(yōu)質(zhì)胚胎率94.1%,囊胚發(fā)育率94.1%,孵出率為100%;IVF實(shí)驗(yàn)室裝修完成1年,優(yōu)質(zhì)胚胎率為100%,囊胚發(fā)育率為100%,孵出率為100%。 結(jié)論: 1.VOCs是IVF實(shí)驗(yàn)室環(huán)境污染的主要成分,主要來(lái)源于IVF實(shí)驗(yàn)室裝修材料。IVF實(shí)驗(yàn)室裝修3月與1年鼠胚體外發(fā)生試驗(yàn)結(jié)果比較,在受精率、卵裂率、優(yōu)質(zhì)胚胎率、囊胚率及孵出率未發(fā)現(xiàn)明顯差異,進(jìn)一步說(shuō)明使用環(huán)保標(biāo)準(zhǔn)高的裝修材料,減少化工材料的使用,可有效降低IVF實(shí)驗(yàn)室VOCs的含量,為配子及胚胎的體外培養(yǎng)及發(fā)育提供一個(gè)安全、無(wú)毒的培養(yǎng)環(huán)境,對(duì)IVF結(jié)局意義重大。 2.玻璃化冷凍/解凍及激光輔助孵出技術(shù)有利于提高胚胎凍存復(fù)蘇后優(yōu)質(zhì)胚胎率和激光打孔后胚胎孵出率。
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【學(xué)位授予單位】：汕頭大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類號(hào)】：R714.8;R114

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1590804