為篩選適合茉莉花的內(nèi)參基因,以5種組織（根、莖、嫩葉、成熟葉、花）和4個發(fā)育階段的花（幼蕾期、膨大花蕾期、最長花蕾期和初綻期）為試驗材料,選擇較常見的8個候選內(nèi)參基因進行引物特異性分析,結(jié)果顯示,8個內(nèi)參基因均擴增出單一條帶,溶解曲線均只有明顯的單一峰。采用qRT-PCR技術(shù)分析8個內(nèi)參基因在不同樣品中的表達量,結(jié)果顯示,內(nèi)參基因在不同樣品中的表達量存在差異,各基因在花中的表達量均顯著低于其他樣品。利用geNorm、NormFinder和BestKeeper軟件對基因的表達穩(wěn)定性進行評價,并通過RefFinder對表達穩(wěn)定性進行綜合分析,結(jié)果表明,適用于不同組織（有花組）的最優(yōu)內(nèi)參基因為SAND和UPL7;適用于不同組織（無花組）的最優(yōu)內(nèi)參基因為UPL7和GAPDH;而適宜不同發(fā)育階段花的最優(yōu)內(nèi)參基因為Actin和EF1α。進一步利用JsDXS和JsPAL2對篩選的內(nèi)參基因進行驗證,結(jié)果顯示,以穩(wěn)定性好的Actin、EF1α及Actin+EF1α組合為參照時,JsDXS和JsPAL2在花發(fā)育不同階段的表達水平的變化趨勢基本一致,而用最不穩(wěn)定的PP2A為參照時,花發(fā)育不同階段的表達水平的... 

【文章來源】：華北農(nóng)學報. 2020,35(06)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：9 頁

【部分圖文】：

茉莉花8個候選內(nèi)參基因PCR產(chǎn)物

將各樣品cDNA等量混合后,稀釋10倍作為模板,分別用8個候選內(nèi)參基因引物進行qRT-PCR擴增,結(jié)果如圖2所示。各候選內(nèi)參基因溶解曲線均只有明顯的單一峰,說明8個候選內(nèi)參基因引物擴增特異性強,符合qRT-PCR試驗要求,可用于后續(xù)候選內(nèi)參基因穩(wěn)定性的分析。2.2 候選內(nèi)參基因表達分析

分別以茉莉花不同組織和花發(fā)育不同階段cDNA為模板,進行qRT-PCR分析。結(jié)果如圖3所示,8個候選內(nèi)參基因在茉莉花不同樣品中的Ct值均有一定的變化,變化的趨勢各有不同。EF1α在不同樣品的Ct值在19.09～23.27,GAPDH的Ct值在17.89～31.26,Actin的Ct值27.88～29.20,PP2A的Ct值在22.16～34.03,TIP41的Ct值在22.31～33.51,UPL7的Ct值在23.47～31.39,PEPKR1的Ct值在26.96～29.98,SAND的Ct值在25.54～31.20。除Actin外,其他所有候選內(nèi)參基因在花中的Ct值均高于其他組織,即在花中的表達量均最低。因各候選內(nèi)參基因的Ct值(除Actin)在花與其他組織中的差異較大,對后期結(jié)果影響較大,故在候選內(nèi)參基因穩(wěn)定性評價中,將不同組織分為“有花組”(包含根、莖、嫩葉、成熟葉、花)和“無花組”(包含根、莖、嫩葉、成熟葉)進行分析。8個候選內(nèi)參基因平均Ct值為21.53～28.68,其中EF1α的Ct值最小,說明其表達豐度較高(圖4)。圖4 茉莉花不同樣品中候選內(nèi)參基因的Ct值

【參考文獻】：
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