【目的】克隆貴州本地高羊茅品種黔草1號和黔草2號的第三組晚期胚胎發(fā)生豐富蛋白（Late Embryogenesis Abundant Protein,Group 3,LEA3）基因,分析其生物信息學及其苗期干旱脅迫的表達量變化,為進一步探討LEA3基因的功能和高羊茅抗旱分子機制提供理論基礎。【方法】參照NCBI已登錄大麥LEA3基因序列,利用RT-PCR獲得黔草1號和黔草2號LEA3基因cDNA序列,應用相關軟件對氨基酸序列進行分析,采用實時熒光定量PCR（qRT-PCR）分析苗期干旱脅迫的表達量�！窘Y果】黔草1號和黔草2號LEA3基因完整的ORF框長度分別為609和642 bp,分別編碼203個氨基酸和213個氨基酸;黔草1號LEA3蛋白比黔草2號缺失1個基元序列（包含11個氨基酸）,且兩者LEA3基因編碼的氨基酸序列存在12個位點的氨基酸差異;黔草1號LEA3基因編碼蛋白分子量為20.72 kDa,等電點8.55,總平均親水性為-0.971;黔草2號LEA3基因編碼蛋白分子量為22.01 kDa,等電點8.99,總平均親水性為-1.069;兩者的LEA3蛋白均沒有跨膜結構,且均以α... 

【文章來源】：西南農業(yè)學報. 2020,33(12)北大核心CSCD

【文章頁數】：9 頁

【部分圖文】：

LEA3基因上半段(左)與下半段(右)的擴增

LEA3蛋白的系統進化樹

黔草1號 LEA3基因編碼蛋白的分子量為20.72 kDa,等電點8.55,總平均親水性為-0.971;黔草2號 LEA3基因編碼蛋白分子量為22.01 kDa,等電點8.99,總平均親水性為-1.069(圖3)。2個品種 LEA3蛋白均有很強的親水性,且呈一定周期性,形成多個親水性高峰�？傮w看,黔草2號 LEA3蛋白親水性大于黔草1號。2個品種LEA3蛋白均不包含跨膜區(qū)域,屬于非跨膜蛋白。黔草1號 LEA3由73.76 % α-螺旋、19.31 %無規(guī)卷曲、3.96 %延伸鏈和2.97 % β-折疊構成;黔草2號 LEA3由77.46 % α-螺旋、14.55 %無規(guī)卷曲、4.23 %延伸鏈和3.76 % β-折疊構成(圖4)。表3 黔草1號和黔草2號 LEA3蛋白氨基酸組成及其含量Table 3 The comparison of amino acids contents of Qiancao 1 and Qiancao 2 LEA3 proteins 氨基酸Amino acids 黔草1號Qiancao 1 黔草2號Qiancao 2 氨基酸數量(個)Number of amino acids 氨基酸含量(%)Percentage of amino acid 氨基酸數量(個)Number of amino acids 氨基酸含量(%)Percentage of amino acid 丙氨酸Ala 44 21.78 43 20.19 精氨酸Arg 2 0.99 2 0.94 天冬酰胺Asn 4 1.98 5 2.35 天冬氨酸Asp 10 4.95 10 4.96 半胱氨酸Cys 0 0.00 0 0.00 谷氨酰胺Gln 16 7.92 17 7.98 谷氨酸Glu 18 8.91 19 8.92 甘氨酸Gly 16 7.92 17 7.98 組氨酸His 3 1.49 3 1.41 異亮氨酸Ile 0 0.00 1 0.47 亮氨酸Leu 3 1.49 3 1.41 賴氨酸Lys 28 13.86 31 14.55 蛋氨酸Met 4 1.98 4 1.88 苯丙氨酸Phe 1 0.49 0 0.00 脯氨酸Pro 0 0.00 0 0.00 絲氨酸Ser 8 3.96 7 3.29 蘇氨酸Thr 34 16.83 40 18.78 色氨酸Trp 0 0.00 0 0.00 酪氨酸Tyr 2 0.99 3 1.41 纈氨酸Val 9 4.46 8 3.75 總量Total 202 100.00 213 100.00

【參考文獻】：
期刊論文
[1]金發(fā)草LEA3基因2個剪接體轉化煙草的抗干旱脅迫能力分析[J]. 李銳,王文國,趙琦,陳曉儀,徐鶯.  西南農業(yè)學報. 2018(05)
[2]竹亞科lea3基因的進化分析[J]. 于麗霞,李斌,黃海泉,鄢波.  植物分類與資源學報. 2014(06)
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[4]高粱LEA3蛋白基因和啟動子的克隆及序列分析[J]. 孫曉嬌,湯曉倩,于麗霞,白瓊,鄢波.  植物分類與資源學報. 2013(05)
[5]兩個高羊茅品種苗期抗旱性的比較[J]. 牛熙,王嘉福,陳超.  山地農業(yè)生物學報. 2012(02)
[6]黃花苜蓿LEA3基因片段克隆與生物信息學分析[J]. 劉亞玲,王俊杰,云錦鳳,趙彥,侯永霞.  生物技術通報. 2011(07)
[7]甘蔗胚胎晚期豐富蛋白基因（LEA）cDNA全長克隆及表達特性[J]. 劉金仙,闕友雄,郭晉隆,許莉萍,吳嘉云,鄭益鳳,陳如凱.  農業(yè)生物技術學報. 2009(05)
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博士論文
[1]不同抗旱性青稞LEA2/LEA3蛋白基因的克隆與表達[D]. 錢剛.中國科學院研究生院（成都生物研究所） 2007

碩士論文
[1]逆境脅迫下LEA3蛋白親水結構域的類分子伴侶功能研究[D]. 張亨.西南科技大學 2018



本文編號：3368833