在CTAB法的基礎上,經(jīng)過多方面改進,提取了"紅陽"獼猴桃7種組織（果實、雄花、雌花、葉片、種子、皮、根）的總RNA。利用瓊脂糖凝膠電泳和超微量核酸蛋白測定儀檢測了該方法和試劑盒法提取的RNA的完整性、純度和濃度。結果顯示:采用這兩種方法提取到的獼猴桃不同組織的總RNA,能檢測到18S和28S兩條清晰完整的條帶,A₂₆₀/A₂₈₀值在1.8～2.0間,A₂₆₀/A₂₃₀值大于2.0。進一步的RT-PCR驗證結果表明采用這兩種方法提取到的RNA質(zhì)量較高,均達到了分子生物學實驗的要求。因此,本文改良的CTAB法適用于獼猴桃各組織高質(zhì)量總RNA的大量提取。 

【文章來源】：江西農(nóng)業(yè)學報. 2020,32(09)

【文章頁數(shù)】：5 頁

【部分圖文】：

用試劑盒法提取的總RNA電泳圖

利用購自大連寶生物工程有限公司的逆轉(zhuǎn)錄試劑盒對兩種方法提取得到的獼猴桃各組織的總RNA進行逆轉(zhuǎn)錄,獲得了cDNA的第一條鏈。進一步選取內(nèi)參基因18S rRNA設計特異性引物,以逆轉(zhuǎn)錄得到的cDNA第一鏈為模板,進行RT-PCR,檢測提取得到的總RNA的質(zhì)量。圖3的電泳圖顯示,采用兩種方法分別提取的獼猴桃7個組織的總RNA都能擴增得到與目的條帶大小相符的單一條帶。對所有擴增條帶進行測序,測序結果與18s rRNA的序列均一致。這表明,采用兩種方法提取得到的總RNA的質(zhì)量較高,這兩種方法適于獼猴桃不同組織總RNA的提取。表1 采用兩種方法提取獼猴桃7種組織的總RNA的純度和濃度 組織 改良的CTAB法 試劑盒法 OD260/OD280 OD260/OD230 濃度/(ng/μL) OD260/OD280 OD260/OD230 濃度/(ng/μL) 果實 1.81 2.01 2834.3 1.96 2.31 887.4 雄花 1.86 2.11 2027.2 1.84 2.28 786.6 雌花 1.93 2.14 2011.8 1.86 2.26 801.2 根 1.85 2.05 1688.6 1.95 2.19 690.2 葉片 1.88 2.18 2523.4 1.84 2.25 801.2 皮 1.92 2.20 1823.2 1.91 2.37 730.5 種子 1.90 2.15 1977.6 1.87 2.22 810.7

采用本實驗室改良的CTAB法和無氯仿多糖多酚植物RNA提取試劑盒兩種方法分別提取了獼猴桃果實、雄花、雌花、葉片、種子、皮和根共7個組織的總RNA。如圖1和圖2所示,采用改良的CTAB法和試劑盒法都能在獼猴桃的7個組織中提取到總RNA,能看到有18S和28S兩條清晰條帶,其中28S條帶的亮度是18S條帶亮度的2倍左右,且兩條帶之間沒有明顯的拖尾現(xiàn)象。這表明這兩種方法都適用于獼猴桃不同組織中總RNA的提取,都能獲得完整性較高的總RNA。2.2 RNA的純度和濃度檢測結果

【參考文獻】：
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本文編號：3347307