【目的】建立一套利用激光捕獲顯微切割技術(shù)切取梅（Prunus mume Sieb. et Zucc.）的雌蕊并提取微量RNA的技術(shù)體系�！痉椒ā恳悦菲贩N‘大嵌蒂’和‘龍眼’的花芽和雌蕊為實(shí)驗(yàn)材料,制作石蠟切片,比較不同厚度條帶的切割效果并選取最佳的條帶厚度制作切片;以Leica LMD 7 000激光捕獲顯微切割系統(tǒng)為實(shí)驗(yàn)核心,比較不同激光強(qiáng)度的切割效果,選取切割效果最好的激光強(qiáng)度,分別切取2個(gè)梅品種的雌蕊,比較常溫保存與液氮保存切割后樣品所提取的RNA質(zhì)量,最終建立適合于梅的激光捕獲顯微切割提取微量RNA的最佳體系�！窘Y(jié)果】在石蠟切片制作過程中,改進(jìn)了試驗(yàn)材料的貯藏條件（在4℃冰箱低溫貯藏）,即除滲蠟和制片之外,其他如脫水、透明等步驟都在4℃冰箱中進(jìn)行,而后再切片制片。經(jīng)過反復(fù)比較,成功確定石蠟切片的最佳條帶厚度為10μm,激光捕獲顯微切割效果最好的激光強(qiáng)度為30,并且明確切割后液氮保存的切割材料所提取RNA的RIN值比常溫保存的高�！窘Y(jié)論】改進(jìn)了石蠟切片制作過程中某些步驟中材料的貯藏溫度,確定了適合于梅花芽的切片厚度以及顯微切割激光強(qiáng)度,建立了相對簡單、穩(wěn)定且重復(fù)性好的利用石蠟切片... 

【文章來源】：果樹學(xué)報(bào). 2020,37(10)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：9 頁

【部分圖文】：

不同厚度的切片的切割效果

在激光捕獲顯微切割過程中收集到的雌蕊組織樣品，提取RNA并且經(jīng)過檢測后，其質(zhì)量如表2所示。比較切割完成后未將PCR管置入液氮與切割完成立即將PCR管置入液氮保存的兩種情況，提取的RNA經(jīng)過檢測后表明，未置入液氮保存而獲得的樣品（2號）RIN值較低，RNA降解比較嚴(yán)重，且濃度較低，完整度也較低，而置入液氮保存中而獲得的樣品（1號）RIN值較高，RNA質(zhì)量相對較好，濃度高，完整度也比較好。本試驗(yàn)中每個(gè)樣品所獲得的RNA產(chǎn)量約為60 ng。RIN(RNA Integrity Number）為RNA的完整性計(jì)數(shù)，RIN范圍為1～10，代表不同的RNA質(zhì)量，其中，1代表RNA降解，10代表RNA的完整性高。圖4 顯微切割雌蕊組織的過程

顯微切割雌蕊組織的過程

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
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[3]棉花顯微切割技術(shù)體系的建立及著絲粒序列探索研究[D]. 胡曉.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2011
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本文編號：3342766