目的克隆北柴胡轉(zhuǎn)錄因子基因BcbZIP179的全長(zhǎng)編碼序列,原核表達(dá)融合蛋白。為進(jìn)一步研究該基因在北柴胡轉(zhuǎn)錄調(diào)控中的功能提供理論依據(jù)。方法以北柴胡轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)為基礎(chǔ),設(shè)計(jì)特異性引物,PCR擴(kuò)增BcbZIP179基因的全長(zhǎng)編碼序列,利用生物信息學(xué)分析軟件分析序列特征。利用qPCR方法分析BcbZIP179基因在不同組織器官中的表達(dá)及MeJA處理?xiàng)l件下的表達(dá)情況。構(gòu)建原核表達(dá)載體,在不同溫度和IPTG濃度下,采用2種菌株誘導(dǎo)表達(dá)目的蛋白。結(jié)果 BcbZIP179編碼序列全長(zhǎng)432 bp,編碼144個(gè)氨基酸,BcbZIP179受MeJA誘導(dǎo),在MeJA處理的北柴胡不定根中,處理前24 h內(nèi),表達(dá)量逐漸升高,隨后表達(dá)量降低;BcbZIP179在北柴胡的根、莖、葉、花及果實(shí)中均有表達(dá),在果實(shí)中的表達(dá)量最高;利用大腸桿菌原核表達(dá)系統(tǒng),在16℃和37℃不同溫度條件下均獲得了帶有6×His標(biāo)簽的BcbZIP179融合蛋白。結(jié)論克隆到了北柴胡中的1個(gè)bZIP家族的轉(zhuǎn)錄因子基因BcbZIP179,在16℃、IPTG 0.05 mmol·L^-1條件下,可獲得體外表達(dá)的蛋白,為制備抗體、分...

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
    1.2 試劑
    1.3 RNA提取與c DNA合成
    1.4 Bcb ZIP179基因的全長(zhǎng)克隆及序列分析
    1.5 Bcb ZIP179基因表達(dá)分析
    1.6 原核表達(dá)載體構(gòu)建
    1.7 原核表達(dá)條件摸索
2 結(jié)果與分析
    2.1 北柴胡Bcb ZIP179的序列分析
    2.2 Bcb ZIP179基因表達(dá)分析
        2.2.1 Bcb ZIP179基因在北柴胡不同組織中的表達(dá)分析
        2.2.2 Bcb ZIP179基因受Me JA誘導(dǎo)的表達(dá)分析
    2.3 Bcb ZIP179原核表達(dá)
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