本研究根據(jù)決明三代轉(zhuǎn)錄組測序獲得的1-脫氧-D-木酮糖-5-磷酸合酶（CoDXS）和1-脫氧-D-木酮糖-5-磷酸還原異構(gòu)酶（CoDXR）基因的全長序列設(shè)計特異性引物,PCR擴增獲得CoDXS、CoDXR基因的OFR,構(gòu)建原核表達(dá)載體pTrc-CoDXS、pTrc-CoDXR在含有質(zhì)粒PAC-BETA的TOP10重組菌中進行表達(dá),通過TOP10的菌斑顏色變化來驗證CoDXS和CoDXR基因的功能。利用實時熒光定量PCR來檢測CoDXS、CoDXR基因在決明不同組織中以及六種脅迫條件下的表達(dá)情況。研究結(jié)果表明CoDXS、CoDXR基因的OFR分別為2 127、1 416 bp,編碼的氨基酸數(shù)目分別為708、471,功能鑒定結(jié)果顯示含有CoDXS、CoDXR基因編碼區(qū)的TOP10菌斑呈現(xiàn)出深橘黃色;CoDXS基因的表達(dá)趨勢為:花＞莖＞種子＞葉＞根,CoDXR基因的表達(dá)趨勢為:葉＞花＞莖＞根＞種子。對CoDXR和CoDXS基因在不同的脅迫條件下的相對表達(dá)量檢測分析發(fā)現(xiàn),在鹽脅迫條件下:CoDXS基因的表達(dá)量整體呈現(xiàn)出下降趨勢,CoDXR基因的表達(dá)量波動范圍較小;在ABA脅迫條件下:CoDXS... 

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【文章目錄】：
1 材料與試劑
    1.1 材料
    1.2 主要試劑
2 方法
    2.1 RNA提取、檢測及反轉(zhuǎn)錄
    2.1 CoDXS、CoDXR基因的功能鑒定
        2.2.1 引入酶切位點的重組載體pMD19-T-CoDXS、pMD19-T-CoDXR的構(gòu)建
        2.2.2 pTrc-CoDXS、pTrc-CoDXR重組表達(dá)載體的構(gòu)建
        2.2.3 構(gòu)建表達(dá)菌株
        2.2.4 構(gòu)建對照菌株
        2.2.5 比較攜帶有不同質(zhì)粒的T0P10的生長情況
    2.3 CoDXS、CoDXR基因的qRT-PCR表達(dá)分析
3 結(jié)果與分析
    3.1 原核表達(dá)載體pTrc-CoDXS、pTrc-CoDXR的構(gòu)建
    3.2 pTrc-CoDXR和pTrc-CoDXS在TOP10中的表達(dá)鑒定
    3.3 CoDXS、CoDXR基因在決明不同組織中的表達(dá)情況
    3.4 CoDXR、CoDXS基因在不同脅迫條件下的表達(dá)情況
4 討論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號：3693717