以黑果枸杞無(wú)菌苗的葉片為材料,對(duì)愈傷組織誘導(dǎo)及增殖培養(yǎng)的最佳激素組合進(jìn)行篩選,通過(guò)研究不同初始接種量、碳源、光暗條件對(duì)懸浮培養(yǎng)體系的影響,確定最佳培養(yǎng)條件,并對(duì)懸浮細(xì)胞的生長(zhǎng)特性進(jìn)行監(jiān)測(cè),建立黑果枸杞細(xì)胞懸浮培養(yǎng)體系。結(jié)果表明,葉片誘導(dǎo)愈傷的最佳激素組合是WPM+KT 0.5 mg/L+2,4-D 2.0 mg/L+蔗糖20 g/L+瓊脂5.0 g/L,誘導(dǎo)率100%,且愈傷組織質(zhì)地疏松,生長(zhǎng)快;最佳細(xì)胞懸浮培養(yǎng)條件是:細(xì)胞初始鮮重接種量1.5%,碳源為蔗糖,光照培養(yǎng)或弱光培養(yǎng);所建立的細(xì)胞懸浮系生長(zhǎng)是"S"型曲線,培養(yǎng)第25 d,細(xì)胞生長(zhǎng)量最大,細(xì)胞干重達(dá)到最大值10.1 g/L,是接種時(shí)的12.6倍。 

【文章來(lái)源】：基因組學(xué)與應(yīng)用生物學(xué). 2020,39(11)北大核心CSCD

【文章頁(yè)數(shù)】：8 頁(yè)

【部分圖文】：

黑果枸杞葉片誘導(dǎo)

根據(jù)愈傷誘導(dǎo)及繼代培養(yǎng)的試驗(yàn)結(jié)果，選擇繼代20 d左右、疏松型、一致性較強(qiáng)的的葉片愈傷組織進(jìn)行細(xì)胞懸浮培養(yǎng)。初代懸浮細(xì)胞在2～4 d后愈傷組織逐漸分散，4～6 d培養(yǎng)液開(kāi)始變濃，10～20 d細(xì)胞處于快速生長(zhǎng)期，培養(yǎng)液更加濃稠(圖3A),21～25 d趨于穩(wěn)定，28～30 d后培養(yǎng)液逐漸變灰褐色(圖3B)，細(xì)胞衰老。初代培養(yǎng)的細(xì)胞狀態(tài)不穩(wěn)定，大團(tuán)塊較多。去除較大細(xì)胞團(tuán)塊的繼代1次的細(xì)胞分散更快，繼代2次之后狀態(tài)穩(wěn)定，獲得黑果枸杞懸浮培養(yǎng)細(xì)胞系。圖3 懸浮細(xì)胞培養(yǎng)

懸浮細(xì)胞培養(yǎng)

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