發(fā)布時(shí)間：2021-11-25 00:47

　　從丹參（Salvia miltiorrhiza Bunge）中克隆1個(gè)新細(xì)胞色素P450基因SmCYP71D411.1,采用生物信息學(xué)的方法,對(duì)該基因進(jìn)行序列特征和組織表達(dá)特性分析。提取丹參根部總RNA后反轉(zhuǎn)錄為cDNA,克隆得到SmCYP71D411.1基因全長(zhǎng),構(gòu)建克隆重組質(zhì)粒。利用生物信息分析預(yù)測(cè)蛋白質(zhì)性質(zhì)、結(jié)構(gòu)。并利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR進(jìn)行了組織表達(dá)特異性分析。SmCYP71D411.1 cDNA全長(zhǎng)1 539 bp,編碼498個(gè)氨基酸,相對(duì)分子質(zhì)量56 541.42 Da,理論等電點(diǎn)7.67。亞細(xì)胞定位于葉綠體類囊體膜、細(xì)胞質(zhì)、葉綠體基質(zhì)等。SmCYP71D411.1在根周皮中的表達(dá)量最高。本研究克隆得到一個(gè)新基因SmCYP71D411.1,并進(jìn)行了生物信息學(xué)分析,為進(jìn)一步驗(yàn)證該基因的功能提供了一定的基礎(chǔ)。 

【文章來(lái)源】：基因組學(xué)與應(yīng)用生物學(xué). 2020,39(12)北大核心CSCD

【文章頁(yè)數(shù)】：6 頁(yè)

【部分圖文】：

目前預(yù)測(cè)的丹參酮類合成下游途徑(李斌,2017)注:實(shí)線箭頭表示已經(jīng)建立的關(guān)系;虛線箭頭表示假設(shè)關(guān)系;Sm CPS1是以二萜的前體GGPP作為其底物產(chǎn)生丹參酮的起始關(guān)鍵酶

以丹參LS1F2 c DNA為模板，以(Forward primer:5"-TCACATCATGGAGCTAAACACTT;Revers primer:CATAACCGATGACTTATTACAGTTACAC-3")為引物，克隆得到丹參Sm CYP71D411.1全長(zhǎng)c DNA,其全長(zhǎng)1 539 bp，編碼498個(gè)氨基酸(圖2)。1.2 Sm CYP71D411.1理化性質(zhì)分析和亞細(xì)胞定位

采用NCBI protein blast的在線方式，對(duì)Sm CYP-71D411.1保守結(jié)構(gòu)域(Conserved domains)進(jìn)行分析，結(jié)果顯示，Sm CYP71D411.1的保守域(圖3)，有一個(gè)P450保守域，屬于P450超家族。細(xì)胞色素P450是一類以鐵卟啉為輔基的蛋白質(zhì)，在植物中CYP超家族基因占蛋白質(zhì)編碼基因的1%，對(duì)底物的結(jié)構(gòu)特異性不強(qiáng)，可代謝各種類型化學(xué)結(jié)構(gòu)的底物，目前植物中已經(jīng)知道的底物有幾百種，其催化活性多且功能復(fù)雜(Chen et al.,2014;Pateraki et al.,2015)。1.4 Sm CYP71D411.1蛋白的二級(jí)結(jié)構(gòu)

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]丹參酮合成相關(guān)的候選基因CYP76AK5克隆及生物信息學(xué)分析[J]. 浦香東,王麗芝.  中國(guó)現(xiàn)代中藥. 2017(08)
[2]本草基因組學(xué)[J]. 陳士林,宋經(jīng)元.  中國(guó)中藥雜志. 2016(21)
[3]Biosynthesis and Regulation of Active Compounds in Medicinal Model Plant Salvia miltiorrhiza[J]. Zhi-chao Xu,Ai-jia Ji,Xin Zhang,Jing-yuan Song,Shi-lin Chen.  Chinese Herbal Medicines. 2016(01)
[4]EST-SSR分析不同產(chǎn)地丹參的遺傳多樣性[J]. 宋振巧,王建華,陳為序,朱海玥.  核農(nóng)學(xué)報(bào). 2014(02)



本文編號(hào)：3517083