發(fā)布時間：2021-11-25 00:47

　　從丹參（Salvia miltiorrhiza Bunge）中克隆1個新細胞色素P450基因SmCYP71D411.1,采用生物信息學(xué)的方法,對該基因進行序列特征和組織表達特性分析。提取丹參根部總RNA后反轉(zhuǎn)錄為cDNA,克隆得到SmCYP71D411.1基因全長,構(gòu)建克隆重組質(zhì)粒。利用生物信息分析預(yù)測蛋白質(zhì)性質(zhì)、結(jié)構(gòu)。并利用實時熒光定量PCR進行了組織表達特異性分析。SmCYP71D411.1 cDNA全長1 539 bp,編碼498個氨基酸,相對分子質(zhì)量56 541.42 Da,理論等電點7.67。亞細胞定位于葉綠體類囊體膜、細胞質(zhì)、葉綠體基質(zhì)等。SmCYP71D411.1在根周皮中的表達量最高。本研究克隆得到一個新基因SmCYP71D411.1,并進行了生物信息學(xué)分析,為進一步驗證該基因的功能提供了一定的基礎(chǔ)。 

【文章來源】：基因組學(xué)與應(yīng)用生物學(xué). 2020,39(12)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：6 頁

【部分圖文】：

目前預(yù)測的丹參酮類合成下游途徑(李斌,2017)注:實線箭頭表示已經(jīng)建立的關(guān)系;虛線箭頭表示假設(shè)關(guān)系;Sm CPS1是以二萜的前體GGPP作為其底物產(chǎn)生丹參酮的起始關(guān)鍵酶

以丹參LS1F2 c DNA為模板，以(Forward primer:5"-TCACATCATGGAGCTAAACACTT;Revers primer:CATAACCGATGACTTATTACAGTTACAC-3")為引物，克隆得到丹參Sm CYP71D411.1全長c DNA,其全長1 539 bp，編碼498個氨基酸(圖2)。1.2 Sm CYP71D411.1理化性質(zhì)分析和亞細胞定位

采用NCBI protein blast的在線方式，對Sm CYP-71D411.1保守結(jié)構(gòu)域(Conserved domains)進行分析，結(jié)果顯示，Sm CYP71D411.1的保守域(圖3)，有一個P450保守域，屬于P450超家族。細胞色素P450是一類以鐵卟啉為輔基的蛋白質(zhì)，在植物中CYP超家族基因占蛋白質(zhì)編碼基因的1%，對底物的結(jié)構(gòu)特異性不強，可代謝各種類型化學(xué)結(jié)構(gòu)的底物，目前植物中已經(jīng)知道的底物有幾百種，其催化活性多且功能復(fù)雜(Chen et al.,2014;Pateraki et al.,2015)。1.4 Sm CYP71D411.1蛋白的二級結(jié)構(gòu)

【參考文獻】：
期刊論文
[1]丹參酮合成相關(guān)的候選基因CYP76AK5克隆及生物信息學(xué)分析[J]. 浦香東,王麗芝.  中國現(xiàn)代中藥. 2017(08)
[2]本草基因組學(xué)[J]. 陳士林,宋經(jīng)元.  中國中藥雜志. 2016(21)
[3]Biosynthesis and Regulation of Active Compounds in Medicinal Model Plant Salvia miltiorrhiza[J]. Zhi-chao Xu,Ai-jia Ji,Xin Zhang,Jing-yuan Song,Shi-lin Chen.  Chinese Herbal Medicines. 2016(01)
[4]EST-SSR分析不同產(chǎn)地丹參的遺傳多樣性[J]. 宋振巧,王建華,陳為序,朱海玥.  核農(nóng)學(xué)報. 2014(02)



本文編號：3517083