目的通過(guò)對(duì)AFLP分子標(biāo)記的引物篩選和聚丙烯酰胺凝膠電泳進(jìn)行優(yōu)化和分析,獲得一套適用于南藥益智的AFLP技術(shù)體系。方法采用8對(duì)引物隨機(jī)配對(duì)形成64對(duì)引物,以不同產(chǎn)地的益智基因組DNA為模板進(jìn)行AFLP-PCR擴(kuò)增,再利用聚丙烯酰胺凝膠電泳分析,篩選能夠鑒定益智遺傳多樣性的核心引物,進(jìn)一步采用NTSYS軟件進(jìn)行聚類(lèi)分析。結(jié)果從64對(duì)引物中篩選了4對(duì)引物適合于益智AFLP分析,并以E3/M7引物組合效果最佳,擴(kuò)增出104條多態(tài)性帶,多態(tài)性帶比率為94.54%,能夠鑒定不同產(chǎn)地益智的種質(zhì)資源。結(jié)論獲得適合分析不同產(chǎn)地益智的AFLP技術(shù)體系,為研究南藥益智遺傳多樣性奠定基礎(chǔ)。 

【文章來(lái)源】：時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥. 2020,31(05)北大核心CSCD

【文章頁(yè)數(shù)】：3 頁(yè)

【部分圖文】：

不同產(chǎn)地的益智基因組DNA的電泳圖

酶切片段與連接引物連接后作為模板,經(jīng)預(yù)擴(kuò)增和選擇性擴(kuò)增獲得PCR產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖電泳分析。其中以E3/M8、E1/M8、E2/M4、E3/M7為選擇性擴(kuò)增引物的PCR擴(kuò)增的結(jié)果如圖2,擴(kuò)增產(chǎn)物片段大小絕大部分在750bp以下,片段大小比較適合。但瓊脂糖電泳分辨率較低,條帶均呈分散均勻且連續(xù)成一片的彌散帶,需要進(jìn)行下一步的聚丙烯酰胺電泳。3.3 聚丙烯酰胺電泳分析

選擇性擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)6%變性聚丙烯酰胺凝膠電泳及銀染顯色后的結(jié)果如圖3。以引物組合E3/M7的擴(kuò)增條帶信號(hào)最好,且分布均勻,能夠找到穩(wěn)定,清晰,分辨率高的指紋譜帶。我們統(tǒng)計(jì)全部清晰、可分辯的條帶,E3/M7,E1/M8,E3/M8和E2/M4引物組合擴(kuò)增產(chǎn)物所得總條帶數(shù)分別為110,27,36和68,多態(tài)性帶條帶數(shù)分別為104,24,34和64,多態(tài)性百分率分別為94.54%,88.89%,94.44%和94.11%(表3)。3.4 聚類(lèi)分析

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]南藥益智SRAP-PCR體系優(yōu)化及引物篩選[J]. 歐虹雅,韓冬苗,黃茲寶,張明康,周聰聰,高炳淼.  生物技術(shù)進(jìn)展. 2018(04)
[2]基于ITS序列研究南藥益智遺傳多樣性[J]. 郭藝,高炳淼,潘坤,侯杰,李永輝,張俊清.  分子植物育種. 2018(03)
[3]基于PCR技術(shù)的分子標(biāo)記在南藥益智研究中的應(yīng)用[J]. 陳玉容,高炳淼,彭超,張俊清.  分子植物育種. 2016(07)
[4]海南益智野生居群表型多樣性分析[J]. 潘坤,劉曉靜,高炳淼,王海燕,王文泉.  安徽農(nóng)業(yè)科學(xué). 2016(16)
[5]南藥益智廢棄物綜合利用現(xiàn)狀與分析[J]. 高炳淼,魏娜,王勇,李永輝,田建平,譚銀豐,鐘霞,張俊清.  時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥. 2015(06)
[6]南藥益智AFLP-PCR體系的建立與優(yōu)化[J]. 高炳淼,潘坤,田建平,唐天樂(lè),魏娜,張俊清.  生物技術(shù). 2015(03)
[7]南藥益智ITS-PCR體系的建立與優(yōu)化[J]. 高炳淼,潘坤,田建平,魏娜,張俊清.  基因組學(xué)與應(yīng)用生物學(xué). 2015(05)
[8]當(dāng)歸種質(zhì)資源遺傳多樣性的AFLP分析[J]. 張宏意,廖文波.  中藥材. 2014(04)
[9]分子標(biāo)記技術(shù)及其在中藥石斛研究中的應(yīng)用進(jìn)展[J]. 張文龍,曾桂萍.  基因組學(xué)與應(yīng)用生物學(xué). 2014(02)
[10]益智仁的化學(xué)成分及藥理活性研究進(jìn)展[J]. 陳萍,王培培,焦?jié)烧?向蘭.  現(xiàn)代藥物與臨床. 2013(04)



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