本文關(guān)鍵詞：山萘酚，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：自由基與疾病之間的關(guān)系已經(jīng)成為現(xiàn)代醫(yī)學(xué)與生命科學(xué)領(lǐng)域的一大熱點。自由基是機體在代謝過程中產(chǎn)生的中間產(chǎn)物,許多疾病的發(fā)生都與自由基的氧化破壞有關(guān)。當(dāng)機體組織或細胞內(nèi)氧自由基增加和(或)清除能力降低,導(dǎo)致活性氧家族在組織或細胞內(nèi)蓄積而引起的氧化損傷過程稱為氧化應(yīng)激(oxidative stress)。氧化應(yīng)激可以引起DNA氧化損傷和蛋白質(zhì)的表達異常,使人或動物機體處于易損狀態(tài),從而誘發(fā)多種疾病。因此有效的清除機體內(nèi)多余的自由基不僅有利于人或動物正常的生理活動,同時可以防止疾病的發(fā)生。清除機體內(nèi)多余的自由基主要是靠內(nèi)源性自由基清除系統(tǒng),可分為非酶促系統(tǒng)和酶促系統(tǒng)兩類,兩類清除系統(tǒng)相互協(xié)同共同完成體內(nèi)的抗氧化任務(wù)。非酶促系統(tǒng)主要包括維生素(VA、VC、VE等)、微量元素Sc、金屬結(jié)合蛋白和各類具有抗氧化作用的化合物等；酶促系統(tǒng)主要包括SOD、GSH-Px、CAT等。要降低自由基對機體的傷害,除了依靠內(nèi)源性自由基清除系統(tǒng)外,還需要尋找和發(fā)掘外源性的自由基清除劑,從而使機體免受自由基的傷害。近年來,許多從中草藥或植物中提取的多糖、黃酮等天然活性成分由于可以促進機體內(nèi)抗氧化酶系的生成、提高機體內(nèi)活性氧自由基的清除能力并且毒副作用較低而受到廣泛關(guān)注。山萘酚(Kaempferol)屬于天然黃酮醇類化合物,廣泛存在于水果、蔬菜、豆類、茶葉以及許多中草藥如沙棘、銀杏葉等植物中。山萘酚具有抗氧化、抗腫瘤、抗?jié)�、抗炎、抗動脈粥樣硬化、降低血脂及膽固醇、利膽利尿、止咳等多種藥理活性。然而,山萘酚雖有如此多的生物活性,但其親水性差,因此限制了山萘酚在臨床上的應(yīng)用。到目前為止,以山萘酚為先導(dǎo)化合物進行結(jié)構(gòu)修飾從而改善親水性、提高藥理活性的文獻鮮有報道�；腔磻�(yīng)是藥物合成中的一類重要反應(yīng),其特點是操作簡單,反應(yīng)快速,合成效率高。藥物分子中引入磺酸基(—S03H)后,不僅會增加藥物水溶性,同時能保持或提高它們原有的藥理活性,而且磺酸基中的硫原子也具有良好的抗病毒活性。因此本文的研究內(nèi)容主要包括以下幾個方面：1.以天然產(chǎn)物山萘酚(Kae)為原料,通過磺化反應(yīng)得到山萘酚的磺化衍生物(KS),通過紅外、核磁共振譜、元素分析、高分辨質(zhì)譜等手段確定了組成和結(jié)構(gòu),分子式為[C15H9O9SNa·2.5 H2O],化學(xué)名稱為3,5,7,4’-四羥基黃酮-3’-磺酸鈉,該物質(zhì)易溶于水。2.采用DPPH法、ABTS法、Fenton反應(yīng)等化學(xué)體系法比較研究Kae與KS體外清除自由基的能力,實驗結(jié)果表明,Kae與KS均有一定的清除自由基能力,并且在相同濃度下KS的清除能力比山萘酚強。3.采用CCK-8法分別研究不同劑量的Kae與KS對H202誘導(dǎo)損傷人血管平滑肌細胞(VSMC)活力的影響,設(shè)置正�？瞻捉M,H202氧化損傷組,Kae不同濃度陽性對照組(5、10.20μmol/L),KS不同濃度實驗組(5,10.20μmol/L),實驗結(jié)果表明,H202損傷組和正�？瞻捉M相比,細胞活力下降至44.43%,Kae不同濃度陽性對照組的細胞活力與H202損傷組細胞活力相差不大,而KS實驗組對H2O2誘導(dǎo)的VSMC損傷則有明顯的保護作用,且存在劑量依賴性,當(dāng)KS濃度為20μmol/L,保護作用最強,其細胞活力和正�？瞻捉M相當(dāng)。4.采用Annexin V/PI雙染流式細胞術(shù)檢測上述各組細胞的凋亡率,實驗結(jié)果表明,空白對照組的VSMC凋亡較少,僅占15.41%,而H202損傷組凋亡率明顯增加,高達48.42%,而用不同濃度KS與H202一起孵育24h后,不同濃度KS實驗組細胞凋亡率與H202氧化損傷組相比,凋亡率明顯降低,并呈一定的劑量依賴性,分別為：27.08%,26.48%,22.06%；同時,采用Western Blot檢測各組細胞裂解液中與凋亡相關(guān)的促凋亡蛋白Caspase3、BAD和抗凋亡蛋白Bcl-2相對表達影響,實驗結(jié)果表明KS可以明顯降低促凋亡蛋白Caspase-3、BAD蛋白的相對表達量,增加Bcl-2的相對表達量從而起到保護H202誘導(dǎo)VSMC凋亡的作用。5.采用ELISA法系統(tǒng)研究不同劑量KS對H2O2誘導(dǎo)損傷血管平滑肌細胞超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)、乳酸脫氫酶(LDH)的活力以及丙二醛(MDA)含量的影響。設(shè)置空白組、H202損傷模型組、KS實驗組(5、10、20μM),實驗結(jié)果顯示H202誘導(dǎo)VSMC損傷后,細胞裂解液中的SOD、GSH-Px等抗氧化酶的活性降低,同時LDH活性和MDA的含量明顯增加,加入不同濃度的KS后,和H202組相比,KS可劑量依賴性的抑制上述效應(yīng)。6.體外抗氧化活性實驗結(jié)果表明KS具有良好的抗氧化活性,在此基礎(chǔ)上本論文對KS能否改善機體內(nèi)抗氧酶體系也做了初步研究。設(shè)置空白組,KS高劑量組(64mg/kg·d)、中劑量組(32mg/kg·d)、低(16mg/kg·d)劑量組,對無特定病原菌的小白鼠連續(xù)灌服KS水溶液15天,取肝、腎組織分別制備成10%的組織勻漿液測定其MDA含量,SOD、GSH-Px、CAT活力及T-AOC變化,實驗結(jié)果顯示：小鼠肝臟、腎臟中的SOD、GSH-Px、CAT活力及T-AOC明顯提高,MDA含量明顯降低,并且在一定范圍內(nèi)隨著KS劑量的增加,作用效果越好,這說明KS可以改善小鼠體內(nèi)抗氧化酶體系。綜上所述,本論文以山萘酚為原料通過磺化反應(yīng)合成的的磺化衍生物KS,和山萘酚相比,不僅水溶性較好,而且具有良好的體內(nèi)外抗氧化活性,這將為提高山萘酚在臨床上的應(yīng)用奠定基礎(chǔ),也為其它天然產(chǎn)物的開發(fā)和應(yīng)用提供新的思路。

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