目的:本研究旨在探索長(zhǎng)鏈非編碼RNA(Long non-coding RNA,lncRNA)與廣州地區(qū)采集的細(xì)顆粒物(Fine particulate matter,PM_2.5)誘發(fā)大鼠肺泡巨噬細(xì)胞(NR8383)和SD大鼠的炎癥反應(yīng)間調(diào)控關(guān)系。方法:第一部分:采集廣州地區(qū)的PM_2.5暴露于NR8383細(xì)胞誘發(fā)炎癥建立炎癥模型。用CCK8法檢測(cè)不同染毒時(shí)間、染毒濃度下的細(xì)胞存活率。細(xì)胞因子抗體芯片篩選出主要的炎性因子,RT-q PCR、ELISA進(jìn)行驗(yàn)證。通過lncRNA高通量測(cè)序篩選與RT-q PCR驗(yàn)證出差異顯著的lncRNAs。通過胞漿胞核亞細(xì)胞定位實(shí)驗(yàn)確定lncRNAs在細(xì)胞中的分布情況并確定lncRNA AABR07005593.1作為研究的目的lncRNA。使用RNAi技術(shù)構(gòu)建細(xì)胞轉(zhuǎn)染lncRNA AABR07005593.1的loss-of-function體系,轉(zhuǎn)染聯(lián)合PM_2.5暴露染毒,觀察炎性因子的表達(dá)水平。通過lncRNA高通量測(cè)序、目的lncRNA功能實(shí)驗(yàn)及KEGG數(shù)據(jù)庫(kù)分析,我們預(yù)測(cè)目的lncR...

【文章頁(yè)數(shù)】：104 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
前言
第一部分 lncRNA AABR07005593.1在PM_2.5誘導(dǎo)NR8383 細(xì)胞炎癥反應(yīng)中的作用
    1.材料與方法
        1.1 主要實(shí)驗(yàn)材料
        1.2 主要設(shè)備
        1.3 顆粒物的采集與處理
        1.4 細(xì)胞培養(yǎng)
        1.5 制備PM_2.5工作液
        1.6 細(xì)胞存活率的檢測(cè)
        1.7 細(xì)胞因子抗體芯片篩選炎性因子
        1.8 RT-qPCR及 ELISA驗(yàn)證炎性因子的表達(dá)水平
        1.9 NR8383 細(xì)胞暴露PM_2.5后轉(zhuǎn)錄組測(cè)序及分析
        1.10 胞漿胞核亞細(xì)胞定位實(shí)驗(yàn)
        1.11 lncRNAAABR07005593.1 功能驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)
        1.12 NF-ΚB通路阻斷實(shí)驗(yàn)
        1.13 ChIRP-MS實(shí)驗(yàn)
        1.14 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
    2 結(jié)果
        2.1 PM_2.5對(duì)細(xì)胞存活率的影響
        2.2 細(xì)胞因子抗體芯片篩選炎性因子
        2.3 RT-qPCR及 ELISA驗(yàn)證炎性因子的表達(dá)水平
            2.3.1 RT-qPCR驗(yàn)證炎性因子的轉(zhuǎn)錄水平
            2.3.2 ELISA驗(yàn)證炎性因子的蛋白水平
        2.4 NR8383 細(xì)胞暴露于PM_2.5后轉(zhuǎn)錄組測(cè)序及分析
        2.5 胞漿胞核亞細(xì)胞定位實(shí)驗(yàn)
        2.6 lncRNA AABR07005593.1 功能驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)
        2.7 NF-ΚB通路阻斷實(shí)驗(yàn)
        2.8 ChIRP-MS實(shí)驗(yàn)
    3 討論
第二部分:PM_2.5誘導(dǎo)SD大鼠產(chǎn)生炎性反應(yīng)及l(fā)ncRNA AABR07005593.1的表達(dá)情況
    1 材料與方法
        1.1 主要實(shí)驗(yàn)材料與設(shè)備
        1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        1.3 PM_2.5顆粒的采集與處理
        1.4 大鼠分組及染毒方式
        1.5 大鼠觀察與處理
        1.6 血常規(guī)指標(biāo)檢測(cè)
        1.7 臟器觀察
        1.8 大鼠肺組織細(xì)胞因子抗體芯片及RT-qPCR結(jié)果
            1.8.1 細(xì)胞因子抗體芯片篩選炎性因子
            1.8.2 RT-qPCR驗(yàn)證炎性芯片結(jié)果
        1.9 RT-qPCR驗(yàn)證目的lncRNA AABR07005593.1 的表達(dá)
        1.10 統(tǒng)計(jì)學(xué)描述
    2 結(jié)果
        2.1 大鼠的一般情況
        2.2 各組大鼠體質(zhì)量變化
        2.3 各組SD大鼠周圍血血常規(guī)指標(biāo)比較結(jié)果
        2.5 各組大鼠臟器系數(shù)比較
        2.6 各組大鼠肺組織病理學(xué)檢查結(jié)果
        2.7 大鼠肺組織細(xì)胞因子抗體芯片及RT-qPCR結(jié)果
        2.8 RT-qPCR驗(yàn)證目的lncRNA AABR07005593.1 的表達(dá)
    3 討論
參考文獻(xiàn)
附錄
綜述 大氣細(xì)顆粒物(PM_2.5)致呼吸系統(tǒng)疾病的作用機(jī)制研究進(jìn)展
    參考文獻(xiàn)
致謝
個(gè)人簡(jiǎn)歷
攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文



本文編號(hào)：3968237