【目的】克隆并鑒定與毛果楊次生壁形成相關的NAC(NAM,ATAF1/2,CUC2)轉(zhuǎn)錄因子,在組織表達特異性分析的基礎上,通過過量表達分析轉(zhuǎn)基因植株表型及下游調(diào)控網(wǎng)路,解析該基因調(diào)控楊樹次生壁組分生物合成的作用機制,為利用該基因進行林木種質(zhì)創(chuàng)新奠定基礎。【方法】基于前期轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù),克隆到1個在毛果楊莖中高表達的NAC轉(zhuǎn)錄因子Ptr NAC128。利用qRT-PCR技術(shù)分析Ptr NAC128在毛果楊根、莖、葉中的相對表達量。構(gòu)建35S∷Ptr NAC128-GFP植物表達載體,利用農(nóng)桿菌介導法轉(zhuǎn)化毛白楊;利用基因槍法將PtrNAC128-GFP融合蛋白在煙草葉片中進行瞬時表達,而后對PtrNAC128進行亞細胞定位分析;對毛白楊轉(zhuǎn)基因植株和野生型植株的橫切面切片染色觀察,并通過qRT-PCR檢測木質(zhì)素、纖維素、半纖維素合成途徑關鍵酶基因及調(diào)控次生壁各組分生物合成的NAC、MYB轉(zhuǎn)錄因子的表達差異,解析過表達Ptr NAC128對楊樹次生壁各組分的影響�！窘Y(jié)果】毛果楊PtrNAC128與擬南芥ANAC075聚在一支,具有典型NAC結(jié)構(gòu)域和完整的C端激活區(qū)。qRT-PCR結(jié)果表明Ptr ...

【文章頁數(shù)】：11 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 試驗材料及試劑
    1.2 毛果楊Ptr NAC128基因的克隆和序列分析
    1.3 Ptr NAC128基因的qRT-PCR分析
    1.4 Ptr NAC128基因植物過表達載體的構(gòu)建及毛白楊遺傳轉(zhuǎn)化
    1.5 亞細胞定位分析
    1.6 毛白楊莖橫切面解剖觀察
    1.7 次生壁組分含量測定
        1.7.1 木質(zhì)素含量測定
        1.7.2 纖維素及半纖維素含量測定
    1.8 次生壁組分合成關鍵酶基因及轉(zhuǎn)錄因子的表達分析
2 結(jié)果與分析
    2.1 毛果楊Ptr NAC128基因克隆及結(jié)構(gòu)分析
    2.2 Ptr NAC128基因的組織表達分析
    2.3 亞細胞定位分析
    2.4 Ptr NAC128過表達載體的構(gòu)建與遺傳轉(zhuǎn)化
    2.5 轉(zhuǎn)基因毛白楊植株表型分析
    2.6 木質(zhì)部細胞次生壁中木質(zhì)素、纖維素、半纖維素含量測定
    2.7 木質(zhì)部細胞次生壁組分關鍵合成酶基因及轉(zhuǎn)錄因子的表達檢測
3 討論
4 結(jié)論



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